标准解读

《GB/T 27621-2011 马鼻肺炎病毒PCR检测方法》是一项国家标准，专门针对马鼻肺炎病毒（EHV）的聚合酶链反应（PCR）检测方法进行了详细规定。该标准适用于对疑似感染马鼻肺炎病毒样本中的病毒核酸进行定性检测，旨在为兽医实验室提供一个标准化的操作流程以确保检测结果的准确性和可比性。

在准备阶段，标准首先明确了实验所需的各种试剂和材料，包括但不限于引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶等，并强调了使用高质量水的重要性。此外，还描述了样品采集的具体要求，如采样部位、保存条件等，确保从源头上保证检测质量。

接着，对于实际操作过程，《GB/T 27621-2011》详细列出了从RNA提取到逆转录合成cDNA再到最终PCR扩增的每一步骤。其中包括了推荐使用的仪器设备类型、温度循环参数设置以及如何避免交叉污染的有效措施等内容。特别指出，在整个实验过程中必须严格遵守无菌操作原则，防止外来因素干扰实验结果。

最后，关于结果分析部分，本标准给出了阳性对照与阴性对照的选择依据及作用说明，同时介绍了如何根据电泳图谱判断样品是否含有目标病毒序列的方法。通过对比不同样品间条带的位置和强度差异，可以初步确定其感染状态。此外，还提到了重复性测试的重要性，建议至少连续两次获得相同结果才能做出最终结论。

此标准为从事相关领域工作的研究人员和技术人员提供了科学指导，有助于提高我国动物疫病防控水平。


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  • 2011-12-30 颁布
  • 2012-04-01 实施
©正版授权
GB/T 27621-2011马鼻肺炎病毒PCR检测方法_第1页
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文档简介

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T27621—2011

马鼻肺炎病毒PCR检测方法

ProtocolofPCRforequinerhinopneumonitisvirus

2011-12-30发布2012-04-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T27621—2011

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位新疆农业大学

:。

本标准主要起草人冉多良单文鲁马伟王传锋张伟

:、、、、。

Ⅰ

GB/T27621—2011

马鼻肺炎病毒PCR检测方法

1范围

本标准规定了马鼻肺炎病毒的检测方法

PCR。

本标准适用于马匹的流通和进出境检疫实施马鼻肺炎的现场检疫和后续监管工作一步法

。PCR

检测技术适用于实验室细胞毒样品检测巢式检测技术适用于临床疑似样品及细胞毒样品检测

;PCR。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

马传染性鼻肺炎

EHV:equinerhinopneumonitis,。

核糖核酸

RNA:ribonucleicacid,。

细胞病变

CPE:cytopathiceffect,。

溴化乙锭

EB:ethidiumbromide,。

乙二胺四乙酸

EDTA:ethylenediaminetetraaceticacid,。

十二烷基磺酸钠

SDS:sodiumdodecylsulfate,。

仓鼠幼肾细胞

BHK-21:babyhamsterkidneycell,。

磷酸盐缓冲液

PBS:phosphatebuffersodium,。

4试剂和材料试剂不经注明均为分析纯

(,)

41水符合中一级水的规格

.:GB/T6682。

42酶

.RNAA。

43酚三氯甲烷

.-。

44琼脂糖凝胶见

.2%:A.1。

45溴化乙锭见

.(10μg/μL):A.2。

46聚合酶

.DNA(5U/μL)。

47电泳缓冲液见

.50×TAE(pH8.5):A.3。

482+

.10×PCRBuffer(plusMg)。

49

.2.5mmol/mLdNTP。

410蛋白酶

.K(20mg/mL)。

411细胞

.BHK

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