标准解读
《GB/T 31789-2015 冬生疫霉菌检疫鉴定方法》是一项国家标准,旨在规范冬生疫霉菌(Phytophthora infestans)的检疫与鉴定流程。该标准适用于植物检疫机构对疑似感染冬生疫霉菌的植物样本进行检测时使用的技术方法。冬生疫霉菌是引起马铃薯晚疫病和番茄晚疫病的重要病原体之一,给农业生产带来严重威胁。
标准首先明确了适用范围,并对术语进行了定义,如“冬生疫霉菌”、“培养基”等关键概念。接着详细描述了样品采集、处理以及保存的具体要求,确保从源头上保证实验材料的质量与代表性。对于实验室条件也有明确的规定,包括但不限于温度、湿度控制及无菌操作环境等方面。
在具体的操作步骤方面,《GB/T 31789-2015》提供了多种鉴定技术方案,包括传统的形态学观察法、生理生化反应测试以及现代分子生物学手段如PCR扩增技术。每种方法都附有详细的实验流程说明,包括试剂配制、仪器设备准备、操作步骤及结果判断依据等信息。此外,还特别强调了质量控制的重要性,通过设置阳性对照与阴性对照来验证实验的有效性和准确性。
针对不同类型的样本(如叶片、茎秆或块茎),标准给出了相应的预处理建议,以提高病原菌分离的成功率。同时,也指出了可能出现的问题及其解决办法,帮助使用者更好地应对实际工作中遇到的各种情况。
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....
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- 现行
- 正在执行有效
- 2015-07-03 颁布
- 2015-11-27 实施



文档简介
ICS6502001
B16..
中华人民共和国国家标准
GB/T31789—2015
冬生疫霉菌检疫鉴定方法
DetectionandidentificationofPhytophthorahibernalisCarne
2015-07-03发布2015-11-27实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布
中国国家标准化管理委员会
GB/T31789—2015
前言
本标准按照给出的规则起草
GB/T1.1—2009。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任
。。
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口
(SAC/TC271)。
本标准起草单位中国检验检疫科学研究院中华人民共和国厦门出入境检验检疫局
:、。
本标准主要起草人杜洪忠吴品珊王宏毅严进张秋娥
:、、、、。
Ⅰ
GB/T31789—2015
冬生疫霉菌检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了冬生疫霉菌的检疫鉴定方法
。
本标准适用于针对冬生疫霉菌寄主的苗木枝条枝叶果实以及夹带土壤和介质中冬生疫霉菌的
、、、
鉴定
。
2仪器和用具
21仪器
.
生物显微镜超净工作台光照培养箱电子天平高压灭菌锅冰箱扩增仪荧光
、、、(1/1000g)、、、PCR、
扩增仪电泳仪凝胶成像仪高速冷冻离心机恒温水浴锅
PCR、、、、。
22用具
.
烧杯三角瓶量筒试管培养皿酒精灯镊子剪刀解剖刀接种针载玻片盖玻片塑料研杵
、、、、、、、、、、、、、
移液器移液器吸头离心管液氮罐
、、、。
3试剂材料和培养基
、
31试剂
.
匹马霉素氨苄青霉素钠盐利福平钠盐五氯硝基苯
(pimaricin),(ampicillin),(rifampicin),(penta-
碳酸钙β谷甾醇β色氨酸硫氨
chloronitrobenzene),(CaCO3),-(-sitosterol),(tryptophan),(thiamine),
氯化钙次氯酸钠
(CaCl2·H2O),(NaClO)。
琼脂糖乙二胺四乙酸四钠盐
,Tris-HCl,MgCl2,HCl,EDTA(),NaOH,NaOAc,KCl,Tris,CTAB
十六烷基三甲基溴化铵无水乙醇三氯甲烷异丙醇异
(),TAE,(Ethanol),(Chloroform),(Isopropanol),
戊醇核酸染料蛋白酶Taq聚合酶相对分子
(Isoamylalcohol),SYBRGreenI,K,DNA,dNTPs,DNA
质量标准物引物和实时荧光引物和及探针
,PCRPHIB1PHIB2,PCRPH-FPH-RTaqMan-MGB
PH-Pr。
32材料
.
琼脂粉汁雪松松针Cedrusdeodara柑橘叶片Citrus胡萝卜玉米油
、V8、()、(spp.)、、。
33培养基
.
培养基胡萝卜丝培养基选择性培养基和卵孢子培养基具体配方参见附
V8、CPA、PARP-V8,
录
B。
4检疫鉴定方法
41症状检查
.
重点观察柑橘果实是否有褐色病变叶和小枝是否枯萎杜鹃属植物
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