GB/T 31807-2015棉花根腐病菌检疫鉴定方法

ICS6502001

B16..

中华人民共和国国家标准

GB/T31807—2015

棉花根腐病菌检疫鉴定方法

DetectionandidentificationofPhymatotrichopsisomnivoraDuarHennebert

(gg)

2015-07-03发布2015-11-27实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

中华人民共和国

国家标准

棉花根腐病菌检疫鉴定方法

GB/T31807—2015

*

中国标准出版社出版发行

北京市朝阳区和平里西街甲号

2(100029)

北京市西城区三里河北街号

16(100045)

网址

:

服务热线

:400-168-0010

年月第一版

20159

*

书号

:155066·1-49877

版权专有侵权必究

GB/T31807—2015

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口

(SAC/TC271)。

本标准起草单位中华人民共和国宁波出入境检验检疫局中华人民共和国珠海出入境检验检疫

:、

局中国检验检疫科学研究院

、。

本标准主要起草人张慧丽张卫东段维军徐瑛陈先锋崔俊霞杜洪忠吴品珊

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31807—2015

棉花根腐病菌检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了棉花根腐病菌的检疫鉴定方法

。

本标准适用于棉花根腐病寄主植物的植株种子及介质的检疫鉴定

、。

2仪器设备和主要试剂

21仪器设备

.

显微镜解剖镜天平感量计制冰机纯水仪涡旋振荡器台式离心

、、(1/100g,1/10000g)、pH、、、、

机高速冷冻离心机低温冰箱冷藏冷冻冰箱超净工作台仪电泳仪水平电泳槽凝胶成像仪

、、、、、PCR、、、、

微量移液器

(2μL、20μL、100μL、200μL、1000μL)。

22主要试剂

.

除另有规定外所有试剂均采用分析纯包括无菌双蒸水次氯酸钠液氮蛋白酶氯化镁氢氧

,。、、、K、、

化钠醋酸铵氯化钾无水乙醇溴化乙锭三氯甲烷异丙醇异戊醇Taq聚合酶混合

、、、、、、、、DNA、dNTP

物缓冲液琼脂糖相对分子质量标准物提取缓冲液

、10×PCR、、DNA、CTAB、Tris/EDTA/SDS

硼酸盐缓冲液缓冲液等分离培养基产孢培养基马

(TES)、TrisEDTA(TBE)、Tris/EDTA(TE)。、、

铃薯葡萄糖琼脂培养基配制方法及步骤见附录

(PDA)C。

3病菌的鉴定

31症状检查

.

将可疑植株的根部在解剖镜下镜检将带有菌丝索或菌核的病根挑出种子类样品从中挑选夹带

,。,

的植株残体尤其是根部病残体介质土借助湿筛挑出其中的菌核参见附录

,。(B)。

32病原菌的分离培养

.

321病根上菌丝索的分离培养

..

在解剖镜下将病根上覆盖的菌丝索挑下用无菌水洗涤菌丝片段洗净后置于分离培养基上

,,,,

黑暗培养每天观察待长出菌丝后挑取菌丝尖端转移到平板上纯化

28℃,,,PDA。

322病残体上病原菌的分离培养

..

在自来水下将病残体洗净切取病健交界处组织用次氯酸钠进行表面消毒无菌水冲洗

,,1%3min,

次灭菌滤纸吸干表面水分后置于分离培养基上黑暗培养每天观察待长出菌丝后挑取菌

3,,,28℃,,