标准解读

《GB/T 34757-2017 猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法》是一项国家标准，旨在规范猪流行性腹泻病毒（PEDV）的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测过程。该标准适用于猪只及相关样本中PEDV核酸的定性检测，为动物疫病防控提供了技术支持。

标准首先明确了实验所需的材料与设备，包括但不限于特定引物和探针序列、RNA提取试剂盒、反转录酶以及荧光定量PCR仪等。对于样品处理，规定了从采集到保存的具体要求，强调了防止交叉污染的重要性，并给出了推荐的保存条件以保证样本质量。

在操作步骤方面，《GB/T 34757-2017》详细描述了从样品准备开始直至结果分析结束的全过程。这包括使用适当的试剂对样品进行RNA提取；利用特异性引物及探针对目标区域进行扩增；设置合适的循环条件完成PCR反应；最后通过观察Ct值来判断是否存在PEDV感染。此外，还提供了阳性对照品的选择建议及其制备方法，用于验证整个实验系统的有效性。

为了确保检测结果的准确性和可靠性，本标准特别强调了质量控制措施的应用，比如定期校准仪器、使用已知浓度的标准物质作为参考等。同时，也提出了关于实验数据记录与报告编制的要求，确保信息完整且易于理解。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2017-11-01 颁布
  • 2018-05-01 实施
©正版授权
GB/T 34757-2017猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法_第1页
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文档简介

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T34757—2017

猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法

Porcineepidemicdiarrhea—RT-PCRfordetectingvirusacid

2017-11-01发布2018-05-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T34757—2017

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物卫生标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位东北农业大学中国动物卫生与流行病学中心河南牧业经济学院河南农业

:、、、

大学

。

本标准主要起草人李一经邵卫星魏荣宋建德姜艳平袁丽萍唐丽杰乔薪瑗崔文徐耀辉

:、、、、、、、、、、

吴发兴张志孙映雪魏战勇李晓成

、、、、。

Ⅰ

GB/T34757—2017

猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪流行性腹泻病毒检测方法的仪器试剂样品的采集和处理程

RT-PCR、、、RT-PCR

序电泳及结果判定的技术要求

、。

本标准适用于快速检测猪临床样品猪小肠和新鲜粪便或细胞培养物中猪流行性腹泻病毒核酸

()。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注明日期的引用文件仅注日期的版本适用于本

。,

文件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

鸟类病毒反转录酶

AMV:RNA(avianmyeloblastosisvirus)

碱基对

bp:(basepair)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

脱氧核糖核酸

DNA:(deoxyribonucleicacid)

种脱氧核糖核苷三磷酸混合物

dNTPs:4(deoxyribonucleosidetriphosphates)

磷酸盐缓冲液

PBS:(phosphate-bufferedsalinebuffer)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

反转录聚合酶链式反应

RT-PCR:-(reversetranscriptase-polymerasechainreaction)

酶抑制剂

RRI:RNA(rnaseribonucleaseinhibitor)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNApolymerase)

4仪器

41扩增仪

.PCR。

42高速台式冷冻离心机可控温至离心速度可达以上

.:4℃、12000r/min。

43组织研磨器或者研钵

.。

44冰箱冰箱和以下超低温冰箱

.2℃~8℃-70℃。

45核酸电泳仪和水平电泳槽

.。

46微量移液器量程分别和

.0.2μL~2μL、1μL~10μL、10μL~100μL、20μL~200μL100μL~

的移液器并配备与移液器相匹配的吸头

1000μL,

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