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文档简介
(一)分离原理胶束:表面活性剂在水中的浓度达到其临界胶束浓度时,可形成胶束(一)分离原理(一)分离原理(1)保留因子t0
在胶束中无保留的中性物质的迁移时间tmc胶束的迁移时间t溶质的迁移时间t0和tmc的测定t0
一般用甲醇或二甲基亚砜作为标记物测定tmc
用疏水性极强的中性物质苏丹III测定(2)分离因子(3)分离度毛细管电泳中常用的表面活性剂毛细管凝胶电泳
CapillaryGelElectrophoresis毛细管凝胶电泳是在毛细管中填充凝胶或其它筛分介质而建立起来的一种电泳分离分析法。筛分介质:聚丙烯酰胺凝胶琼脂糖凝胶Hydrolink胶高聚物溶液分离对象:生物大分子如蛋白质、DNA片段等主要贡献:分析化学家研究和发明了96通道毛细管电泳快速测序仪(高效分离技术)毛细管凝胶电泳分离原理一些生物大分子如DNA和被SDS饱和的蛋白质分子,其电荷/质量之比与分子大小无关,电泳淌度几乎相同,用CZE模式很难分离。在含有筛分介质的毛细管中,这些分子在电场作用下电泳,受到的阻力不同,迁移速度有差异。DNA片段分离DNA片段分离DNA片段分离21-2毛细管电色谱毛细管电色谱是毛细管电泳与高效液相色谱的融合技术。毛细管色谱柱+电驱动流动相压力驱动和电驱动流型的比较毛细管电色谱的特点分离效率比HPLC高选择性比毛细管电泳高毛细管电色谱的分类按毛细管柱的类型分类填充柱毛细管电色谱开管柱毛细管电色谱连续床毛细管电色谱按流动相驱动的方式分类电渗流驱动的毛细管电色谱电渗流和压力联合驱动的毛细管电色谱毛细管电色谱仪毛细管电泳仪加压装置梯度系统电渗流和压力联合驱动的毛细管电色谱仪梯度系统电渗流和压力联合驱动的毛细管电色谱仪一、毛细管电色谱的基本原理毛细管电色谱中的电渗流溶质的迁移速度分离效率(一)毛细管电色谱中的电渗流电渗:指在电场作用下,毛细管中或固相多孔物质内,液体沿固体表面移动的现象。填充毛细管中电渗流速度E电场强度;
流动相介电常数;流动相粘度;与填充有关的无量纲因素(0.4-0.7)(二)溶质的迁移速度分离效率H=A+B/u+Cu与HPLC相比,A,C较小分离效率由于多数采用小粒径填料(1.5-3m)涡流扩散项和传质阻力项较小对理论塔板高度的贡献主要来自分子扩散项采用柱上检测,死体积小****CEC分离效率高*****二、毛细管电色谱实验条件的选择操作电压缓冲溶液pH值背景电解质浓度有机溶剂三、毛细管电色谱柱开管柱化学键合、吸附溶胶-凝胶填充柱拉制法填充法连续床柱(整体柱)填充过程整体柱的制备硅胶整体柱:四甲氧基硅烷(TMOS)、水溶性聚合物聚环氧乙烷(PEO)及催化剂乙酸,在0℃下搅拌形成溶胶,在40℃下水解和缩聚生成凝胶,经陈化、碱处理扩孔、干燥和焙烧后制成硅胶整体柱。有机聚
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