- 现行
- 正在执行有效
- 2002-04-20 颁布
- 2002-07-01 实施
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文档简介
C50WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用Guidelinesforuseofpolymerasechainreaction(PCR)techniqueinclinicaldiagnosis2002-04-20发布2002-07-01实施中华人民共和国卫生部发布
WS/T230-2002合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)是一种在体外特异性扩增靶DNA序列的技术。其基本过程为模板双链DNA的变性、引物与模板DNA的退火和在DNA聚合酶引导下的链延伸反应三个阶段的多次循环。每一次循环后的扩增产物均可作为下一轮循环的模板,理论上.扩增产物量呈指数形式上升,即经个循环后,产物量增加到2倍。PCR操作简单,短时间内在体外可获得数百万个特异靶DNA序列的烤贝·为临床疾病的诊断、治疗监测和预后评估提供了一种极有帮助的实验室辅助手段。本标准的附录A、附录B都是标准的附录。本标准从2002年7月1日起实施本标准由卫生部医政司提出。本标准由北京大学人民医院肝病研究所负责起草。本标准主要起草人:陶其敏、全文斌、范涛。本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释
中华人民共和国卫生行业标准临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用WS/T230-2002GuidelinesforuseofpolymerasechainreactionCPCR)techniqueinclinicaldiagnosis1范围本标准规定了临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用准则。本标准适用于各级、各类的医疗、卫生、保健机构应用PCR技术进行临床诊断2定义本标准采用下列定义。2.1!引物primer与待扩增靶DNA片段两端互补的鼻核音酸,其本质是单链DNA(ssDNA)在DNA聚合酶的作用下能进行延伸,从而合成新的互补链。2.2模板tcmplate侍扩增的靶DNA或RNA链,包括人类基因组DNA、质粒DNA、唑苗体DNA、CDNA和mRNA、扩增后的DNA产物等几乎所有形式的DNA或RNA。2.3变性denaturationDNA或RNA由双链转变为单链状态,加热、提高PH或加人甲酰胺、原等试剂都可使双链DNA或RNA发生变性。2.4退火annealing引物与互补的核音酸序列在合适的温度下通过氢键形式相互结合的过程。2.5延伸extension在合适的条件下,由DNA聚合酶(如:Taq酶)催化引导引物DNA链延伸的合成过程2.6污染contamination由来源于非待测样品的核酸所引起的一个样品、一系列样品或试剂的非特异性扩增或扩增后在产物分析过程中造成的样品之间的污染,污染通常引起假阳性结果。2.7遗留污染Carry-overcontamination同一类靶序列上一次PCR扩增产物对以后扩增反应的后续污染。2.8内对照internalcontrol在同一反应混合物体系中与待测靶核酸同时进行扩增反应的已知对照物。2.9TaqDNA聚合酶TaqDNApolymerase一种耐热的DNA聚合酶,最初是从美国黄石国家公园温泉中存在的水生栖热菌(Therorsq"alir)中分离获得,Taa醇最适活性温度在70℃~80℃,能
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