有机混合物的分离色谱法

层析中，被分离物质接触到两相物质中固定不动的部分，称为固定相流动着带被分离物质移动的部分，称为流动相，按固定相和流动相的性质不同，层析法可分为以下几种：返回又称色谱分离法，是被分离的物质通过在固定相和流动相之间反复分配而最后得到分离的方法。第1页/共41页第一页，共42页。柱层析将固定相均匀填在金属或玻璃制成的管中做成层析柱，并以此进行分离的方法叫柱层析第2页/共41页第二页，共42页。固定相（吸附剂）的要求：具有较大的表面积和一定的吸附能力与流动相及试液中各组分不发生化学反应，并不溶于流动相应粒度均匀，颗粒细小常见官能团的极性常用流动相的极性返回第3页/共41页第三页，共42页。纸层析返回第4页/共41页第四页，共42页。吸附剂的选择硅胶：常用吸附剂，其活度与含水量有关氧化铝：用于非极性化合物的分离，根据制备时的PH不同，又分为碱性、中性和酸性。聚酰胺；分离易生成氢键的极性化合物纤维素：极性有机化合物及金属阳离子、阴离子分离返回第5页/共41页第五页，共42页。返回第6页/共41页第六页，共42页。第7页/共41页第七页，共42页。返回第8页/共41页第八页，共42页。展开剂的选择一般原理，（Stahl三角形）微量圆圈法返回第9页/共41页第九页，共42页。点样与展开定性分析用玻璃毛细管点样，定量用微量注射器样品溶液应为均一体系返回第10页/共41页第十页，共42页。定性与定量分析显色方法：紫外-荧光法，碘熏法、化学法定性：测定比移值,洗脱后用其他方法定性定量：溶剂洗脱-分光光度测定，板上原位直接定量（测定斑点面积法），薄层扫描。返回第11页/共41页第十一页，共42页。返回第12页/共41页第十二页，共42页。载气的选择常用载气包括氦气、氮气、氩气、二氧化碳和氢气选择因素：一是价格，二是检测器种类，三是样品的种类和组成使用常规的填充柱时，流量一般在25~150ml.min-1,使用毛细管柱时，一般在1~25ml.min-1。返回第13页/共41页第十三页，共42页。返回第14页/共41页第十四页，共42页。恒温室与分离柱温度控制恒定温度法：设定柱温等于或略高于样品的平均沸点，分析时间在2~30min程序升温法:样品组分沸点相差较大时，使柱温以一定的方式上升，得到理想的分离效果返回第15页/共41页第十五页，共42页。返回第16页/共41页第十六页，共42页。检测器检测器要求：响应时间快，灵敏度高，具有较大的线性响应范围，通用性强热导池检测器（TCD）火焰-电离式检测器（FID）电子捕获检测法（ECD）返回第17页/共41页第十七页，共42页。返回第18页/共41页第十八页，共42页。返回第19页/共41页第十九页，共42页。返回第20页/共41页第二十页，共42页。填充柱和毛细管柱填充柱：气固色谱（常用固体吸附剂），气液色谱（常用固定液，担体）毛细管柱：内径0.25~0.5mm,长25~50m新型固定相：高分子多孔微球，球形多孔硅胶，键合固定相返回第21页/共41页第二十一页，共42页。返回第22页/共41页第二十二页，共42页。返回第23页/共41页第二十三页，共42页。返回第24页/共41页第二十四页，共42页。气相色谱的基本参数与计算公式保留时间tR与死时间t0组分从进样到出现峰最大值所需时间为保留时间，不被固定相滞留部分从进样到出峰最大值的时间容量因子k’在平衡状态时，组分在固定相与流动相中的浓度之比选择性因子α两组分分离程度的量度理论塔板数N组分从进样到出峰，经过无数次分配平衡，每一次平衡完成过程中，组分随流动相移动的距离分离度分离柱对混合组分的分离情况返回第25页/共41页第二十五页，共42页。返回第26页/共41页第二十六页，共42页。流动相流速对柱效的影响——范帝姆脱方程（VanDeemterequation）H为理论塔板高度，v为流速。Ａ为分子涡流扩散项，第二项为组分分子（纵向）扩散项第三项为传质阻力项。返回第27页/共41页第二十七页，共42页。定性分析利用保留值定性：相对保留值，保留值与碳数变化规律，多柱定性，不同柱温定性应用化学反应定性：制备衍生物，扣除法，官能团特征反应与其他检测仪器联用定性：与质谱，红外光谱，等仪器联用定量分析第28页/共41页第二十八页，共42页。返回第29页/共41页第二十九页，共42页。定量分析峰面积定量：自动积分，面积仪，剪纸称重，峰高×半峰宽峰高定量定量测定：定量进样法，归一化法，内标法，外标法，叠加法，转化定量法返回第30页/共41页第三十页，共42页。液相色谱法第31页/共41页第三十一页，共42页。高效液相色谱法概述与经典液相色谱法比较与气相色谱法比较高效液相色谱的特点：分离效率高选择性高检测灵敏度高分析速度快高效液相色谱的分类高效液相色谱的应用范围和局限性高效液相色谱仪基本装置和组成高效液相色谱的应用返回第32页/共41页第三十二页，共42页。返回第33页/共41页第三十三页，共42页。返回第34页/共41页第三十四页，共42页。高效液相色谱的分类按溶质在两相分离过程的物理化学原理吸附色谱分配色谱离子色谱体积排阻色谱（凝胶色谱）亲和色谱按溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类洗脱法前沿法置换法返回第35页/共41页第三十五页，共42页。返回第36页/共41页第三十六页，共42页。返回第37页/共41页第三十七页，共42页。返回第38页/共41页第三十八页，共42页。返回第39页/共41页第三十九页，共42页。高效液相色谱的应用范围和局限性应用范围高沸点不易挥发，受热不稳定易分解，分子量大，不同极性的有机物，生物活性物质及天然产物，化工产品及环境污染物等等。方法局限性：使用多种溶剂，成本高，且易产生污染，梯度洗脱比气相色谱的程序升温复杂缺少通用的检测器分析具有多种沸程的石油产品，不能替代气相色谱法也不能代替中、低压液相色谱法，尤其对受压易分解的生物活性样品第40页/共41页第四十页，共42页。感谢您的观看！第41页/共41页第四十一页，共42页。内容总结层析中，被分离物质接触到两相物质中固定不动的部分，称为固定。又称色谱分离法，是被分离的物质通过在固定相和流动相之间。第1页/共41页。与流动