生物制品基础知识培训

生物制品基础知识培训第一页，共四十四页，2022年，8月28日目录一、生物制品的定义及概述二、生物制品的分类三、疫苗的定义和分类四、疫苗生产工艺流程五、疫苗质量控制及检定的要求六、厂房、设施和仪器设备七、文件系统第二页，共四十四页，2022年，8月28日一、生物制品的定义及概述

生物制品是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备，用于疾病预防、治疗和诊断的药品。第三页，共四十四页，2022年，8月28日二、生物制品的分类1、疫苗

疫苗是将病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。

第四页，共四十四页，2022年，8月28日2、抗毒素及免疫血清

由特定抗原免疫动物所得由血浆或血清制成；称抗毒素或免疫血清。如破伤风抗毒素、抗狂犬病血清等，用于治疗或被动免疫预防。第五页，共四十四页，2022年，8月28日3、血液制品

由健康人的血浆或特异免疫人血浆分离、提纯或由重组ＤＮＡ技术制成的血浆蛋白组分或血细胞组分制品,

如人血白蛋白、人免疫球蛋白、人凝血因子(天然或重组的)、红细胞浓缩物等,用于诊断、治疗或被动免疫预防。第六页，共四十四页，2022年，8月28日4、细胞因子及重组ＤＮＡ产品

由健康人血细胞增殖、分离、提纯或重组ＤＮＡ技术制成的多肽类或蛋白质类制剂,如干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、红细胞生成素等,用于治疗。第七页，共四十四页，2022年，8月28日5、诊断制品（1）体外诊断制品:由特定抗原、抗体或有关生物物质制成的免疫诊断试剂或诊断试剂盒,如伤寒、副伤寒、变形杆菌诊断菌液,沙门氏菌属诊断血清,等,用于体外免疫诊断;第八页，共四十四页，2022年，8月28日（2）体内诊断制品:由变态反应(超敏反应)原或有关抗原材料制成的免疫诊断试剂,用于皮内接种等。6、其它制品

由有关生物材料或特定方法制成,不属于上述5类的其他生物制剂,用于治疗或预防疾病。如治疗用Ａ型肉毒素制剂、微生态制剂和卡介菌多糖、核酸制剂等。第九页，共四十四页，2022年，8月28日三、疫苗的定义和分类疫苗定义疫苗分类第十页，共四十四页，2022年，8月28日1、疫苗定义由特定细菌、病毒、立克次体、衣原体等微生物及寄生虫制成的，接种动物后能产生自动免疫和预防疾病的一类生物制剂均称为疫苗，制剂的主要成分为微生物或寄生虫。第十一页，共四十四页，2022年，8月28日2、分类按微生物分类细菌类疫苗病毒类疫苗寄生虫类疫苗第十二页，共四十四页，2022年，8月28日按疫苗抗原的性质和制备工艺分类活疫苗弱毒活疫苗基因缺失疫苗：用基因工程技术将强毒株毒力相关基因切除构建的活疫苗基因工程活载体疫苗病毒抗体复合疫苗：特异性高免血清与适当比例的相应病毒组成，其特点是可以延缓病毒释放，提高疫苗的安全性和免疫效果。第十三页，共四十四页，2022年，8月28日活疫苗特点可在体内繁殖系统免疫反应和局部免疫反应免疫力持久，产量高，成本低有毒力增强和反祖危险抗原干扰现象保存条件苛刻第十四页，共四十四页，2022年，8月28日死疫苗灭活疫苗：由完整的病毒或细菌经灭活剂灭活后制成，即要使病原体充分死亡，丧失感染性或毒性，又要保留其免疫原性。亚单位疫苗：是指将病原体经物理或化学方法处理，除去无效物质，提取其有效抗原部分制备的一类疫苗，经提取、纯化，通过化学合成，制成不同的亚单位疫苗。第十五页，共四十四页，2022年，8月28日基因工程重组亚单位疫苗：利用DNA重组技术，将编码病原微生物保护性的基因导入原核或真核细胞，使其在受体细胞中高效表达，分泌保护性抗原肽链，提取肽链加入佐剂制成。该类疫苗安全性好，副反应小（有害的反应原少），稳定性好，便于保存和运输，但研发、生产成本高，免疫原性较差，需多次免疫才能得到有效保护。第十六页，共四十四页，2022年，8月28日死疫苗特点不能在体内繁殖有利于制备多价或多联疫苗比较安全，不发生全身性副反应，无毒力反祖现象受外界影响小，有利于保存运输免疫剂量大，需多次免疫，成本高只能诱导机体产生体液免疫通常需要用佐剂或携带系统来增强其免疫效果第十七页，共四十四页，2022年，8月28日举例说明活疫苗和灭活苗的区别猪瘟第十八页，共四十四页，2022年，8月28日基因疫苗：包括DNA疫苗和RNA疫苗，是将编码某种抗原蛋白的基因置于真核表达元件的控制下，构成重组表达质粒DNA或RNA，将其直接注入动物体内，通过宿主细胞的转录翻译系统合成抗原蛋白，从而诱导宿主产生抗原蛋白的免疫应答。第十九页，共四十四页，2022年，8月28日单价疫苗：利用同一种微生物（菌）毒株或同一种微生物中的单个血清型（菌）毒株的增殖培养物制备的疫苗。多价疫苗：利用同一种微生物（菌）毒株或同一种微生物中的多个血清型（菌）毒株的增殖培养物制备的疫苗多联疫苗：利用不同的微生物增殖培养物，按免疫学原理和方法组合而成的疫苗。接种动物后能获得相应疾病的免疫保护，一针多防，可减少劳动力和动物应激。第二十页，共四十四页，2022年，8月28日

—按疫苗病原菌（毒）株来源分类同源疫苗：采用同种、同型或同源微生物制备，应用于同类动物免疫接种的疫苗。异源疫苗：采用不同种微生物的（菌）毒株制备的疫苗，接种动物后能使其获得对疫苗中未含有的病原体产生抵抗力，如犬在接种麻疹疫苗后，能产生对犬瘟热的抵抗力。或采用同一种中一种型微生物的（菌）毒株制备的疫苗，接种动物后能使其获得对异型病原体的抵抗力。第二十一页，共四十四页，2022年，8月28日四、疫苗生产工艺流程

菌（毒）种培养物（培养基、动物、禽胚或细胞等）收获抗原（培养液、含毒组织、胚液或细胞液等）配苗

分装冻干成活疫苗或灭活后制成灭活疫苗。第二十二页，共四十四页，2022年，8月28日细菌疫苗的制造工艺流程蛋白胨、肉浸液等原料配制、灭菌菌种生产用种子培养菌液菌苗原液配苗分装冻干、扎盖帖签活疫苗原料佐剂灭活菌液配苗乳化分装、扎盖、帖签灭活疫苗灭活检验配制、灭菌保护剂原料配制、灭菌培养基第二十三页，共四十四页，2022年，8月28日病毒性细胞疫苗的制造工艺流程健康动物（或胚胎）组织原料细胞悬液生长细胞病毒液配苗分装冻干、扎盖帖签活疫苗基础种毒生产用种毒原料保护剂配制灭菌细胞培养液传代细胞灭活病毒液配苗（混匀、乳化）分扎盖帖签装灭活疫苗检验原料佐剂配制灭菌灭活检验配制培养收获第二十四页，共四十四页，2022年，8月28日病毒性组织疫苗的制造工艺流程感染动物或胚胎分装、扎盖、贴签健康动物或SPF鸡胚等健康动物或SPF鸡胚等动物或SPF鸡胚等基础种毒生产用种毒收获感染组织或胚液纯化配制成含毒悬液配苗分装冻干活疫苗保护剂原料配制检验灭活病毒液配苗、乳化灭活疫苗原料佐剂配制灭活检验第二十五页，共四十四页，2022年，8月28日病毒类疫苗的制造方法1毒种的选择与减毒毒株须具备的条件：（1）持有特定的抗原性；（2）有典型的形态和感染特定组织的特性，并能保持其生物学特性；（3）易在特定组织中大量繁殖；（4）不产生神经毒素或能引起机体损害的其它毒素；第二十六页，共四十四页，2022年，8月28日（5）如制备活疫苗，繁殖过程中无恢复原致病性的现象；（6）未被其它病毒污染。2病毒的繁殖（1）活体动物培养（2）鸡胚培养（3）组织培养（4）细胞培养第二十七页，共四十四页，2022年，8月28日3疫苗的灭活

用甲醛或酚溶液灭活。动物组织对灭活效果有影响；灭活时间要合适。第二十八页，共四十四页，2022年，8月28日5冻干冻干的疫苗充氮或真空密封保存。4疫苗纯化主要方法：层析技术与沉淀、离心等。层析系统都由两个相组成：一是固定相，另一是流动相。当待分离的混合物随流动相通过固定相时，由于各组分的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量比）不同，且随流动相向前移动，各组分不断地在两相中进行再分配。分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组分，从而达到将各组分分离的目的。

第二十九页，共四十四页，2022年，8月28日病毒性细胞培养疫苗的制备流程：种毒与毒种→营养液配制与细胞制备→接毒与收获→配苗工序1种毒与毒种种毒由国家指定的菌、毒种保藏部门鉴定分发，多为冻干品。按规定在细胞中继代培养后用作毒种。继代培养控制在一定代数以内。工序2营养液配制与细胞制备营养液通常分为细胞培养用的生长液和病毒增殖用的维持液，两者不同的是生长液血清含量为5％～20％，维持液血清含量仅有0％～5％。不同细胞需要不同的营养成分，根据需要选择合适的营养液。常用的营养液有乳汉液、MEM、DMEM等，只需溶解后经除菌过滤即可使用。第三十页，共四十四页，2022年，8月28日工序3接毒与收获病毒接种可与细胞同步（分装同时或分装不久后接种病毒）或异步（细胞形成单层后接种病毒）。待出现70%～80%以上细胞病变时即可收获。收获时可将培养瓶反复冻融后收取；也可加EDTA-胰酶液消化分散收获。收获的细胞毒液经无菌检验、毒价测定合格后，供配苗用。工序4配苗灭活疫苗和冻干苗的配制方法见禽胚培养疫苗。第三十一页，共四十四页，2022年，8月28日疫苗《制造及检验规程》任何一种疫苗都有其《制造及检验规程》，它是国家法定标准。疫苗的生产必须严格按《规程》规定的方法进行生产和检验，若要改变方法，则要提供研究材料证明是可行的，并报农业部评审批准，形成新《规程》才能进行生产。《规程》来源中华人民共和国《生物制品规程》（常规疫苗）转让单位第三十二页，共四十四页，2022年，8月28日五、疫苗质量控制及检定的要求

（一）生产过程中质量监控标准的建立及要求在生产工艺的各个环节和步骤中的产品均应建立相应的监控标准，以便后续工艺的进行,保证产品的质量、工艺的稳定性。第三十三页，共四十四页，2022年，8月28日（二）疫苗产品的质量检定与要求

1．外观检查：根据样品的特征建立外观的质量标准。

2．pH值检测：可根据一般生物制品的要求建立标准，一般为7.2±0.5。

3．纯度：主要用于评价纯化制品中含有有效成分的量和杂质的最低限量，制定相应标准，通常可测定有效抗原在疫苗中的绝对值或测定主要杂质的量推算有效抗原在疫苗中的相对值。

4．宿主细胞DNA和蛋白残留量检测：采用传代细胞生产疫苗，应限制疫苗中的宿主细胞DNA和蛋白残留量，进行方法研究时应建立相应的标准品，并对检测试剂的敏感性和特异性进行验证。疫苗中残余宿主细胞DNA及蛋白残留量可参考现行版《中国药典》的相关要求。第三十四页，共四十四页，2022年，8月28日

5.无菌检查：应符合现行版《中国药典》的相关要求。

6．热原或细菌内毒素检查：可参照现行版《中国药典》的相关要求进行；也可以用其它方法检测疫苗中的热原物质。

7．抗生素检测：预防用疫苗在生产过程中不得添加青霉素或其他β内酰氨类抗生素；如在生产过程中添加除上述以外的其他抗生素，应建立相应的检测方法并规定抗生素残留量的要求。

8．灭活效果的验证：由于制备疫苗的病原体一般均对人类致病，因此应建立有效的灭活方法对该制品中的病原体进行灭活，并应对灭活效果进行验证；在成品检定中应建立灭活剂残留量检测的方法和限度标准。

9．异常毒性检查：应符合现行版《中国药典》的相关要求。第三十五页，共四十四页，2022年，8月28日10．稳定性试验：是指疫苗在常规保存温度下的稳定性试验。由于稳定性试验的结果直接与制品的效期有关，且试验观察时间较长，因此应在生产工艺确定后尽早留样进行，定期取样测定制品效力和其他相关的质量指标；11．效力试验（生物效价）：由于用于预防的疫苗是通过机体的免疫应答反应发生作用的，因此应评价其体液免疫和细胞免疫的生物效价。在评价体液免疫效价时，应选择实验动物的品系，建立检测动物血清抗体的诊断试剂，并对该类试剂进行验证，可以计算小鼠ED50以及抗体产生的滴度12．佐剂的质量评价：如最终制品含有佐剂，则应建立佐剂含量以及与之结合率的检测方法，并制定相应质量标准。13．疫苗标准品或参考品的研究：对于一种新疫苗而言，建立检测疫苗的效力、免疫原性或毒性用标准品或参考品对判断验室研究阶段与批量投产后的疫苗质量是否一致以及临床试验的评价是非常重要的。第三十六页，共四十四页，2022年，8月28日一些基本概念外毒素指某些细胞生长繁殖过程中分泌到菌体外的一种代谢产物。类毒素是细菌的外毒素经甲醛处理后，失去毒性而仍保留其免疫原性，能刺激机体产生保护性免疫的制剂。内毒素是革兰氏阴性菌的菌体中存在的毒性物质的总称。第三十七页，共四十四页，2022年，8月28日（三）我们公司疫苗要检验哪些项目？1、病毒类疫苗a毒种：病毒含量、安全性、纯净、毒种保存、毒种继代；b成品：性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、鉴别检验、安全检验、效力检验、剩余水份测定、真空度测定。第三十八页，共四十四页，2022年，8月28日2.细菌类疫苗a菌种：形态和生化特性、培养特性、血清学特性、特异性、安全性、免疫原性、毒种继代、纯粹检验、菌种保存；b