自身免疫病疫苗

自身免疫病疫苗第一页，共六十页，2022年，8月28日NewvaccinedevelopmentNewvaccinesagainstinfectiousdiseases DevelopmentofDNAvaccines Developmentoftherapeuticvaccines

Advancesincurrentvaccines Streptococcuspneumoniae、InfluenzavirusNewvaccinesagainstnon­infectiousdiseases Cancer

AutoimmunediseasesNewvaccinedeliverytechnology第二页，共六十页，2022年，8月28日Principleofdeliveringvaccinesinedibleplants.Agenefromahumanpathogenisinsertedintoabacteriumthatinfectsplants(A).Thebacteriumtheninfectsculturedleafsegmentsoftheselectedfoodplant(B),whichsproutintowholeplantscontainingthehumanpathogengene(C).Oncetheplantiseaten,ittriggersanimmuneresponsetothepathogenNewvaccinedeliverytechnology第三页，共六十页，2022年，8月28日一、自身免疫病的基本概念：自身免疫（autoimmunity）

机体免疫系统对自身成分发生免疫应答，产生自身抗体或自身反应性T淋巴细胞的现象。自身免疫病（autoimmunedisease，AID）

若自身耐受机制遭破坏，自身免疫应答的质或/和量发生异常，则自身抗体和自身反应性淋巴细胞可攻击并破坏自身组织细胞，机体出现病理改变和相应临床表现。自身免疫病第四页，共六十页，2022年，8月28日基本特征1.可测到高效价的自身抗体和（或）自身应答性T细胞2.自身抗体或应答T细胞→作用于自身组织细胞→造成损伤或功能障碍3.可复制出相似的动物模型，用患者血清或致敏淋巴细胞可使疾病被动转移等4.病情转归与自身免疫应答强度密切相关5.反复发作和慢性迁延6.有遗传倾向7.部分自身免疫性疾病易发生于女性其中，第1、第2条不可缺少。第五页，共六十页，2022年，8月28日自身免疫性疾病的分类：器官特异性糖尿病、多发性硬化症器官非特异性系统性红斑狼疮、 类风湿性关节炎第六页，共六十页，2022年，8月28日

自身免疫病自身抗原器官特异性自身免疫病：

慢性甲状腺炎甲状腺球蛋白、微粒体、细胞膜表面抗原 、第二胶质抗原(CA2)毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病) 甲状腺细胞表面TSH受体原发性肾上腺皮质萎缩(Addison病) 肾上腺细胞恶性贫血 胃壁细胞、内因子慢性溃疡性结肠炎 结肠上皮细胞男性自了性不育症 精子青少年型胰岛素依赖性糖尿病 胰岛细胞伴共济失调-毛细血管扩张的 胰岛素受体胰岛素低抗型糖尿病重症肌无力 乙酰胆碱受体自身免疫性溶血性贫血 红细胞特发性血小板减少性紫癜 血小板干燥综合征(Sjogrenssyndrome) 唾液腺管、细胞核、甲状腺球蛋白非器官特异性自身免疫病：

类风湿关节炎 变性IgG系统红斑狼疮 核成分(DNA、DNA-核蛋白、RNA、Sm抗 原)、红细胞、血小板、细胞浆成分(线粒 体、微粒体)第七页，共六十页，2022年，8月28日自身免疫病举例：系统性红斑狼疮（SLE）类风湿关节炎（RA）I型糖尿病（IDDM）多发性硬化（MS）强直性脊椎炎（AS）第八页，共六十页，2022年，8月28日系统性红斑狼疮（SLE）东方人和黑人育龄妇女常见。多克隆淋巴细胞非特异活化抗体介导的损伤发病特征：关节疼痛、面部蝶形红斑、血尿、蛋白尿、白细胞贫血。血液中含大量自身抗原和抗原－抗体复合物。免疫病理由抗原－抗体复合物沉积于关节、肾小球基底膜致炎症。第九页，共六十页，2022年，8月28日系统性红斑狼疮（SLE）：

一类不治的器官非特异性自身免疫病。患者多种组织、脏器受损。脸部红斑（左下）、下肢狼疮青斑（右下）、形成紫红色染色狼疮细胞为SLE的典型病变。右上图为SLE发病的全球分布。高发区低发区未知区第十页，共六十页，2022年，8月28日SystemicLupusErythematosus(SLE)

ischaracterizedbyfever,weakness,arthritis,skinrashes(seefigureatleft),pleurisy,andkidneydysfunction.AffectedindividualsmayproduceautoantibodiestoarangeoftissueantigenssuchasDNA,histones,RBCs,platelets,leukocytes,and

clottingfactors.SLEtypicallyappearsinwomenbetween20and40yearsofagewithafemale:maleratioof10:1.

AnexampleofcomplicationsarisingfromSLEiswhenimmunecomplexesofautoantibodiesandvariousnuclearantigensaredepositedalongthewallsofsmallbloodvessels.Thisdepositionactivatesthecomplementsystem,resultinginglomerulonephritisanddamagetotheblood-vesselwall(vasculitis).Thisbloodvesseldamagecanleadtowidespreadtissuedamage.第十一页，共六十页，2022年，8月28日类风湿关节炎（RA）1％人口发病。发病年龄40～50岁女性发病率为男性3倍60％～80％携带HLA-DR4基因发病特征：慢性进行性关节滑膜、软骨坏损。血液中含高水平RF因子（抗自体IgG的IgM抗体）。早期关节肿胀、疼痛；晚期关节变形，失去功能。第十二页，共六十页，2022年，8月28日类风湿关节炎（RA）：是一类严重的自身免疫病，患者关节滑囊被破坏，使手指僵硬变形。第十三页，共六十页，2022年，8月28日I型糖尿病（IDDM）缺乏胰岛素造成糖代谢紊乱和血糖浓度增高。发病年龄11～12岁遗传几率高达25％发病特征：多饮食、多尿，体重下降，尿酮过多，乏力，视力下降。自身免疫反应损伤胰岛b细胞。患者依赖外源注射胰岛素来维持葡萄糖代谢。第十四页，共六十页，2022年，8月28日多发性硬化（RA）慢性进行性中枢神经系统脱髓鞘疾病。T淋巴细胞介导的自身免疫病。发病可能与麻疹病毒慢性潜伏感染有关。发病特征：重复出现视觉、运动、触觉等神经功能的短暂丧失。大脑切片显示多处白斑。白斑内浸润大量T、B淋巴细胞和巨嗜细胞。第十五页，共六十页，2022年，8月28日强直性脊椎炎（AS）脊椎关节的慢性进行性炎症。发病率1％，患者90％以上携带HLA-B27基因。男/女发病比例为9：1。发病特征：脊椎慢性炎症，最终脊椎关节完全融合，不能灵活弯曲。血液中无RF因子。慢性炎症细胞浸润脊椎关节、骶骼关节、肌腱骨膜附着处。第十六页，共六十页，2022年，8月28日免疫耐受（immunologicaltolerance）是指机体免疫系统接触抗原后导致的特异性免疫无应答性和低应答性。淋巴细胞识别抗原后的两种后果：1、淋巴细胞识别抗原后发生特异性的免疫应答－免疫原2、免疫耐受性的形成－耐受原免疫系统“自我识别”识别自我与非我－自身耐受二、免疫耐受机制第十七页，共六十页，2022年，8月28日1、中枢耐受

1）T细胞克隆在胸腺中的缺失（阴性选择）

2）B细胞克隆缺失2、外周耐受

1）克隆无能或免疫忽视

2）免疫抑制细胞的作用

3）免疫隔离部位的抗原在生理条件下不致免疫应答第十八页，共六十页，2022年，8月28日天然免疫耐受：异卵双生小牛共用胎盘第十九页，共六十页，2022年，8月28日1957年Burnet：Theclonalselectionhypothesis.Duringitsnormalcourseofdevelopment,eachlymphocyteprogenitorisabletogiverisetomanylymphocytes,eachbearingadistinctantigenreceptor.Manylymphocyteswithreceptorsthatbindubiquitousselfantigensareeliminatedearlyindevelopmentbeforetheybecomeabletorespond,assuringtolerancetosuchselfantigens.Whenantigeninteractswiththereceptoronamaturelymphocyte,thatcellsisactivatedtobecomeablastcell(lymphoblast)andthenstartstodivide.Itgivesrisetoacloneofidenticalprogeny,allofwhosereceptorsbindthesameantigen.Antigenspecificityisthusmaintainedastheprogenyproliferateanddifferentiateintoeffectorcells.Onceantigeniseliminatedbytheseeffectorcells,theimmuneresponseceases.第二十页，共六十页，2022年，8月28日中枢耐受T细胞及B细胞分别在胸腺及骨髓微环境中发育，此间进行阴性选择启动细胞凋亡，致克隆消除减少生后自身免疫病的发生第二十一页，共六十页，2022年，8月28日中枢免疫耐受：阴性选择第二十二页，共六十页，2022年，8月28日

1、中枢耐受

对自身抗原形成的耐受

1）T细胞克隆在胸腺中的缺失（阴性选择）

Kappler：中枢器官I-E+小鼠表达Vb17aTcell

外周器官I-E+小鼠不表达Vb17aTcell

外周器官I-E－小鼠表达Vb17aTcellVb17aTcell识别I-E复合体的自身抗原后被清除

2）B细胞克隆缺失第二十三页，共六十页，2022年，8月28日NegativeselectionofBcellsin

bonemarrow胸腺和骨髓克隆消除－普遍表达的自身抗原外周器官的组织特异性抗原？第二十四页，共六十页，2022年，8月28日

2、外周耐受

1）克隆无能(clonalanergy)或免疫忽视(immunological

ignorance)

自身应答T细胞克隆与相应组织特异抗原并存，正常情况下，不导致自身免疫病。因感染、病原体与自身抗原的分子模拟作用，使APC活化，产生效应T细胞

第二十五页，共六十页，2022年，8月28日1.

T细胞无能反应

1）

缺乏第二信号

CostimulatorCD28-B7或信号弱

2）

增殖活化信号传递受阻第二十六页，共六十页，2022年，8月28日2.B细胞克隆无能反应

1）

膜免疫球蛋白表达的抑制Nossal克隆流产成熟Bcell+SmIg内吞重新表达未成熟Bcell+SmIg内吞不表达，特异性耐受 细胞不死亡，抗原受体永久消失8-24h第二十七页，共六十页，2022年，8月28日2）

功能性无反应性：含有多重相同结构表位的Ag（多糖物质）作为致耐原 交联而不递呈2.B细胞克隆无能反应第二十八页，共六十页，2022年，8月28日免疫耐受小鼠淋巴细胞正常小鼠另一小鼠取皮肤移植存活如耐受血液中除去淋巴细胞，则没有免疫耐受发生2）免疫抑制细胞的作用Gershon首先发现Ts第二十九页，共六十页，2022年，8月28日3）免疫隔离部位的抗原在生理条件下不致免疫应答

1.

生理屏障 脑、眼前房、胎盘2.抑制性细胞因子TGF-inhibitTh2

IL-4、IL-10inhibitTh1第三十页，共六十页，2022年，8月28日三、自身免疫病的致病因素及机制诱发自身免疫异常的环境因素自身抗原出现

1.分子模拟（molecularmimicry）

2.表位扩展（epitopespreading）

3.自身抗原性质改变

4.隐蔽抗原释放

免疫应答和免疫调节异常个体自身免疫相关的遗传因素第三十一页，共六十页，2022年，8月28日自身免疫性疾病的致病相关因素

1.自身抗原的改变或与自身抗原有关引起自身免疫病的抗原

一）

隐蔽抗原的释放（晶状体、精子、甲状腺）

未在胚胎期与免疫系统接触淋巴细胞克隆存在 手术、外伤或感染 输精管结扎自身免疫性睾丸炎 眼外伤自身免疫性交感性眼炎第三十二页，共六十页，2022年，8月28日二）

自身抗原发生改变

Ag变性 代谢改变 遗传结构改变致Ag表达改变 药物影响

a-甲基多巴：RBC膜上e抗原抗RBCAb自身溶血性贫血肼苯哒嗪：改变核成分抗核AbSLE样综合症病毒感染：整合DNA抗自身Ab，干扰FasL表达，T、B增生 变性的IgG－抗IgGFc抗体－自身抗体

第三十三页，共六十页，2022年，8月28日三）

交叉抗原的作用:

A型乙型溶血性链球菌 人心肌Ag12型溶血性链球菌 肾小球基底膜大肠杆菌O14型 结肠抗原四）

分子模拟作用:病原体氨基酸序列和人的多肽序列相同第三十四页，共六十页，2022年，8月28日HSP60已知自身自身抗原相似有关疾病区域抗原区域程度%1～17 髓过氧化物酶 594～610 60

肾小球肾炎7～21 细胞色素P450 359～372 64

慢性活动性肝炎65～75 甲状腺球蛋白 393～403 58

慢性甲状腺炎86～100 肌凝蛋白重链 516～530 62

柯萨基心肌炎101～123 细胞角蛋白 83～105 58

类风湿性关节炎108～117 DNA-结合蛋白 73～82 58 SLE468～480 乙酰胆碱受体 133～145 63

重症肌无力HSP60与人自身抗原相似性第三十五页，共六十页，2022年，8月28日五）

表位扩展的现象优势决定基(dominantdeterminant),隐蔽决定基(crypticdeterminant)T细胞或B细胞在免疫应答的早期对个别表位的应答发展到对其它表位的应答；从单克隆或寡克隆T/B细胞被活化，扩展到多个克隆被活化。1）T细胞表位扩展：实验性自身免疫性脑脊髓膜炎（EAE）髓鞘碱性蛋白MBP或蛋白脂蛋白PLPMBP显性表位Ac1－11；84－104为次显性表位PLP显性表位139－151；178－191、249－173为次显性表位第三十六页，共六十页，2022年，8月28日PLP139－151SJL/J小鼠R－EAE脾细胞1、对PLP139－151强烈增生2、对PLP178－191强烈增生：分子内扩展MBP84－104SJL/J小鼠R－EAE脾细胞对PLP139－151强烈增生：分子间扩展小鼠脑脊髓炎病毒SJL/J小鼠R－EAE脾细胞对MBP强烈增生：病毒表位内源性自身表位第三十七页，共六十页，2022年，8月28日2）B细胞表位扩展：系统性红斑性狼疮SmB/B’八肽抗八肽抗nRNP(nuclearribonucleoprotein)抗DNASLE干燥综合症的表位扩展(血清中有抗La和Ro自身抗体）重组La抗LaC片断抗LaA片断抗LaF片断重组Ro抗LaA片断第三十八页，共六十页，2022年，8月28日2、表位扩展的可能机制专职性APC（包括抗原特异性B细胞）与非专职性APC摄取组织碎片，加工处理抗原和呈递抗原的能力以及协同刺激分子表达增高，即刺激T细胞能力增强专职性与非专职性APC内质体的蛋白酶发生变化，导致裂解肽链的位置发生变化，使原次显性和阴性表位变成显性或次显性表位，因而使耐受性丧失自身反应细胞应答能力增高，易产生应答。例如TCR和粘附分子表达增加，易产生激活在抗原持久刺激下，BCR或TCR亲和力经抗原选择后而增高易发生免疫调节紊乱第三十九页，共六十页，2022年，8月28日2.免疫调节异常一）多克隆刺激剂的旁路活化：

微生物或其产物非特异性地直接诱导B细胞产生自身抗体

二）MHCII类抗原的异常表达：

IFN-g、IL-1、IL-2、MHCII↑三）辅助刺激因子表达异常（增高）：

B7↑

第四十页，共六十页，2022年，8月28日四）

Th比例失调或功能失衡：

Th1功能亢进－IDDM、MS Th2功能亢进－抗体介导的自身免疫病如SLE第四十一页，共六十页，2022年，8月28日抗凋亡现象：1）凋亡是维持自身稳定的重要机制2）自身反应性细胞凋亡障碍是自身免疫性疾病发病的关键因素之一五）

Fas、FasL表达异常:第四十二页，共六十页，2022年，8月28日自身免疫病易感性的遗传因素主要组织相容性复合体基因免疫球蛋白基因T细胞受体基因细胞因子基因 Th1和Th2不平衡凋亡基因 lpr、lprcg、gldY染色体连锁自身免疫性加速基因 Yaa/影响B细胞粘附因子的表达－低亲合力Th与B结合－Aag胞质酪氨酸磷酸酶基因系统造血和免疫系统异常第四十三页，共六十页，2022年，8月28日自身免疫病的组织损伤机制自身抗体介导Ⅱ型超敏反应自身抗原-抗体复合物介导III型超敏反应自身反应性T细胞介导IV型超敏反应第四十四页，共六十页，2022年，8月28日

四、自身免疫病的治疗临床常规治疗

对症治疗

1.抗炎：阿斯匹林类药物、糖皮质激素

2.替代补充：注射胰岛素、甲状腺素

3.胸腺切除和血浆置换：去除自身抗体和免疫复合物非特异性免疫抑制治疗环孢素A抑制T细胞特异性免疫治疗1.T细胞疫苗2.拮抗性多肽3.单克隆抗体4.阻断协同刺激信号第四十五页，共六十页，2022年，8月28日原则及种类（一）口服疫苗1、经口耐受性的产生

淋巴细胞对抗原诱导的细胞增生和分泌淋巴因子的功能均减弱淋巴因子的功能有质的变化增强CD8＋T细胞的功能，产生大量T细胞生长因子（TGF-），对致病细胞起到对抗作用第四十六页，共六十页，2022年，8月28日2、动物及人类自身免疫病的治疗

II型胶原性关节炎实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）虹膜睫状炎（EAU）

Copdymer合成多肽口服治疗MS第四十七页，共六十页，2022年，8月28日（二）合成性多肽疫苗1、原则：阻止自身反应性T细胞的激活研究抗原和鉴定自身与T细胞相互作用的决定簇，以及与其功能相关的特定氨基酸序列，从而研究出一种与决定簇结构相似但功能完全相反的多肽，防止自身抗原对反应性T细胞的激活作用。 第四十八页，共六十页，2022年，8月28日2、方法：抗原竞争一个关键氨基酸的替换仍可能会激活原先的T细胞，但该细胞表达不同的功能3、应用：多发性硬化症（MS）第四十九页，共六十页，2022年，8月28日抗原结构改变诱导的免疫抑制第五十页，共六十页，2022年，8月28日新合成的多肽中有相当一部分本身具有免疫反应的刺激作用，甚至会诱发对疾病无益而有害的反应诱发过量细胞因子的生成寻找新的多肽，研制对于不同遗传背景的病人都有益而无害的肽类制剂仍任重道远第五十一页，共六十页，2022年，8月28日（三）T细胞或T细胞受体疫苗1、基本原理：来源于独特型－抗独特型理论。即从T细胞库中选择自身反应性T细胞，灭活后免疫，激发机体的保护性免疫（调节性T细胞）。MS:MBP、PLP等

MBP反应性的T细胞在MS病人激活1st

脑脊液T细胞PHA刺激甲醛固定回输病人MBP自身反应性T细胞频率进行性降低3次接种自身反应性T细胞消除第五十二页，共六十页，2022年，8月28日2、免疫调节机制：1）抗独特型T细胞调节；2）抗独特型抗体反应；3）免疫偏移3、应用：MS和RA的治疗及临床效果4、潜在的限制性因素：1）克隆变化和表位扩展2）来源时间延长、克隆变化

MBP自身反应性T细胞重新出现MS潜在的克隆变化和MBP自身反应性T细胞的表位扩展优势地位的自身反应性T细胞克隆被去除其它识别MBP的T细胞克隆取代和恢复对MBP的自身免疫性MBP的作用？寡克隆T细胞？第五十三页，共六十页，2022年，8月28日T细胞疫苗研究现状MS的T细胞疫苗：采用标准SplitWell技术从外周血和脑脊液（CSF）中筛选对MBP特异的T细胞克隆（刺激指数>3）扩增，辐射。受者接受3次皮下注射，每次2～4个克隆，间隔2～4个月。所有病人MBP反应性T细胞频率降低，3次后清除，已获FDA批准，进入II期临床RA的T细胞疫苗：多