酸性蛋白酶实验方案

酸性蛋白酶降解猪瘦肉肉实验方案一、实验目的购得黑曲霉发酵生产的酸性蛋白酶，并在其最适条件下进行研究研究该酸性蛋白酶降解瘦肉的降解肉类效果、对酵母生长的影响根据实验前后的含氮量，研究该酸性蛋白酶对瘦肉的降解度二、 实验原理酸性蛋白酶特性：活力定义：一个酶活力指1g酶粉成1ml酶液在40°C.PH3.0条件下，1分钟水解酪素产生lug酪氨酸为一个活力单位（u/g或u/ml）pH范围:2.5〜4.0（最适PH3.5）最适温度：55C，低于40C稳定性状：褐色或灰色粉末，由黑曲霉经发酵提炼而成而成，易溶于水用途:生化研究。水解蛋白，具有较强的水解能力能力，能将大分子的蛋白质水解成氨基酸等水解度（DH）的计算公式：DH（%））二水解液中总氨基态氮/原料中总氮含量[1]凯氏定氮法测总氮：凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量。三、 实验试剂和仪器实验试剂：新鲜瘦猪肉（市售）；酸性蛋白酶（5.0X105IU/g）（广州市凯升生物有限公司）、凯氏定氮法相关试剂实验仪器：凯氏定氮蒸馏装置，雷磁酸度计，恒温水浴锅，电子天平、电磁炉四、 实验方法①新鲜猪瘦肉预处理从市场上购得猪肉，清水洗净后，用小刀精心除去脂肪，将猪肉用自来水冲洗，去血1h后，冷冻保藏，一段时间后取出并切成块状，然后经高压灭菌灭菌用无菌水冲洗，放置冰箱冷冻备用⑶猪肉酶解工艺流程猪肉糜（经预处理）一配制PH3.5的柠檬酸缓冲液一按固液比（m/V）1：1匀浆［1、3］一加酶保温酶解一100°C灭酶15min—4500r/min离心15min一上清液过滤一猪肉蛋白酶解液⑶单因素实验组别设置在酶解时间5h、pH3.5条件下实验，设置一个不加入酶的空白对照，每组设置3组平行对照大温度条件：55C、30C大酶液加入量：按3%（M/M）（酶：底物）加入量［1］大酵母培养：加入蛋白酶按6.5U/mL（酶：培养基）比例、不加蛋白酶对照进行液体培养猪瘦肉用量：每组15g，共8组，共120g总氮含量测定采用凯氏定氮法柠檬酸缓冲液配制方法柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L）pH0.1mol/L柠檬酸（毫升）0.1mol/L柠檬酸钠（毫升）pH0.1mol/L柠檬酸（毫升）0.1mol/L柠檬酸钠（毫升）3.018.61.45.08.211.83.217.22.85.27.312.73.416.04.05.46.413.63.614.95.15.65.514.53.814.06.05.84.715.34.013.16.96.03.816.24.212.37.76.22.817.24.411.48.66.42.018.04.610.39.76.61.418.64.89.210.8柠檬酸C6H8O7-H2O：分子量210.14,0.1mol/L溶液为21.01克/升。柠檬酸钠Na3C6H5O7-2H2O：分子量294.12,0.1mol/L溶液为29.41克/升。柠檬酸C6H8O7-H2O:2.1g柠檬酸钠Na3C6H5O7-2H2O:2.94gH2O:100ml物