毕业论文-汾阳医院职工HPV感染率及感染分型情况

汾阳医院职工HPV感染率及感染分型情况HPV在医院职工中感染率及亚型分析摘要:目的研究山西省汾阳医院职工（已婚妇女）HPV感染率以及感染亚型.方法2015年3月对汾阳医院737名职工进行了HPV筛查，具体是用特定取样器取待检者宫颈分泌物于细胞保存液中，然后将细胞进行裂解来提取其中的DNA，用荧光定量PCR的方法扩增，扩增完毕进行变性杂交，已确定是否有HPV感染及感染的亚型.结果在接受检查的737名职工中，有105名感染HPV,其中高危型感染率明显高于低危型，有一部分待检者有多种亚型同时感染，高危型可以与低危型同时感染，高危16、52、58型感染率较高.76例单一感染，29例多重感染，其中18例双重感染，6例三重感染，4例四重感染，1例五重感染。无论单一感染还是多重感染,总感染中均以16型(高危)多见.结论医院职工HPV感染率约为14%，人们应重视HPV的筛查来提前预防宫颈癌的发生.关键词:医院职工；HPV；宫颈分泌物；感染率Abstract:ObjectiveTostudyinShanxiprovinceFenyanghospitalstaff(marriedwomen)andtheinfectionrateofHPVsubtypeinfection.Methodsfrom2015MarchtoHPVscreeningfor737workersinFenyanghospital,inparticulartospecificsubjectstotakesamplercervicalsecretionincellpreservationliquid,andthenthecellsinlysistoextracttheDNA,amplificationusingthemethodoffluorescencequantitativePCRamplification,hybridizationwascompletedtodeterminewhethertherehasbeendegeneration,HPVinfectionandsubtype.Resultsin737workersexamined,105caseswereinfectedwithHPV,includinghigh-riskinfectionratewassignificantlyhigherthanthatoflowrisk,thereisaparttobedetectedhasmanysubtypesofinfectionatthesametimeatthesametime,canbeinfectedwithhigh-riskandlow-risktype,16,52,58high-risktypehighinfectionrate.Singleinfectionin76cases,infectionin29cases,including18casesofdoubleinfection,threeinfectionin6cases,4casesoffourinfections,fiveinfectionin1cases.Theinfectionrateofwasabout16inthetotalinfection,ConclusiontheinfectionrateofHPVwasabout14%,anditshouldbeemphasizedthatthescreeningofHPVshouldbethepreventionofcervicalcancerinadvance.Keywords：hospitalstaff；HPV；cervicalsecretion；infectionrate前言人乳头瘤病毒（HPV）是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖,目前已分离出130多种，不同的型别引起不同的临床表现。HPV抵抗力强，能耐受干燥并长期保存，加热或经福尔马林处理可灭活，所以高温消毒和2%戊二醛消毒可灭活。HPV是性传播疾病的病原之一，与泌尿生殖系尖锐湿疣有关，也是引起宫颈癌的元凶。HPV包括低危HPV6、11、42、43、44等型别，常引起外生殖器湿疣等良性病变包括宫颈上皮内低度病变(CINI)，高危险型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等型别，与宫颈癌及宫颈上皮内高度病变(CINII/III)的发生相关。因此HPV筛查对预防宫颈癌的发生非常重要，人们应对此引起极大的重视。1标本与材料1.1标本的收集：月经正常妇女，在月经来潮后10～18天为最佳检查时间。检查前48小时内不要作阴道冲洗，不要用避孕药膏等阴道内用药物，检查前不进行醋酸或碘液涂抹，24小时内不应有性生活。由医生以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，然后使用专用的HPV采样刷置于宫颈口采集标本。（最好在取样前先用棉签擦去宫颈分泌物）将专用宫颈刷置于宫颈口，轻轻搓动宫颈刷使其顺时针旋转5圈。慢慢取出宫颈刷，将其放入标有病人编号的取样管中，取样管内已加有专用细胞保存液，折断其刷头入管中，拧紧瓶盖。样本采集后，应尽快的送至PCR实验室进行提取。若不能马上送检样本，请于4℃保存，但请务必在2个星期之内进行检测。2015年3月按上述标准采集我院职工的宫颈分泌物于特定的保存液中。1.2材料：实验所用试剂购自潮州凯普生物化学有限公司，扩增及变性所用荧光定量PCR购自美国ABI7500，杂交所用仪器购自潮州凯普生物化学有限公司。2方法2.1DNA提取一般样本：震荡均匀，取500ul，14000rpm离心一分钟，去上清液。多血液样本：延长样本震荡时间，吸取500ul临床样本，14000rpm离心一分钟，去上清液；再用已灭菌的纯化水500ul漂洗一次。（如血液过多，可再漂洗一次）。多粘液样本：延长样本震荡时间，使其混匀，将取样刷取出，吸取瓶底部液体500ul，14000rpm离心一分钟，去上清液。加入400ul溶液1（事先在45℃水浴中预热），震荡混匀，100℃加热15分钟。加入400ul溶液2，震荡混匀后，室温下放置5分钟，去上清液（务必去干净，可将上清液倒入废缸后，14000rpm离心一分钟，用200ul移液器调至90ul，轻轻将剩余的上清液吸尽，枪头切勿碰到离心沉淀方向，以免洗掉DNA）。室温放置2分钟，加入60ul溶液3充分溶解。静置10分钟，14000rpm离心3-5分钟，保留上清液待用。溶液1成分：三羟基氨基甲烷、氯化钠、乙二胺四乙酸钠盐、氢氧化钠、十二烷基硫酸钠、纯化水。溶液2成分：异丙醇。溶液3成分：灭菌注射用水。2.2PCR扩增：扩增体系为：10xbuffer（含Mg2+）5ul；2.5mMdNTP2ul；10uMprimer11ul；10uMprimer21ul；Taq0.5ul；ddH2O39.5ul；DNA模板（即上述处理好的上清液）1ul于特定的PCR反应管中进行扩增，扩增程序为95℃9分钟，（95℃20秒、55℃30秒、72℃30秒）40个循环，72℃5分钟，4℃保存。2.3变性杂交分型：95℃变性20min，在变性程序运行的5-20分钟内及时将反应管取出，放入冰水中不低于2min。开杂交仪，蒸馏水充满反应室，安放金属多孔板，设置45℃。开泵排出多孔板的水，加杂交液1000ul，5分钟后开泵排干杂交液，关泵加杂交液500ul。加PCR产物放置15分钟。开泵泵出杂交液。杂交液800ul清洗3次，关泵，设置温度25℃，加封阻液1000ul放置5分钟。开泵，排净液体后关泵，加酶标液500ul，放置4分钟开泵，排净所有液体后，设定温度36℃，溶液A800ul洗膜4次，排净液体，关泵加入显色液，盖好杂交仪盖板，放置5分钟。判读结果3实验结果根据最终杂交结果得出：在接受检查的737名职工中，有105名感染HPV,具体结果如下：待检者编号年龄结果待检者编号年龄结果00-12616、5800-53466800-2305800-54465300-3305200-55461600-4301600-564616、35、53、6800-53016、3500-57466800-63058、6800-58475300-7301600-59475200-8316800-60471600-9315200-61473900-10311600-62475800-11313900-6347低危8100-12315800-64481600-133218、3300-654853、5600-1432低危8100-66485900-15326800-674811、5300-163239、6800-68485200-1733低危1100-695018、3300-18335100-705039、52、5300-19346600-715016、3900-20346600-7250低危8100-21345200-735116、1800-223416、6600-74515200-233531、39、5100-75523300-24353500-76525200-2535低危8100-775218、3300-26365300-78521600-27365300-79543900-283616、52、56、6600-80545200-2936低危81，高危5800-81555800-303658、6600-8255低危44、8100-31363900-83551800-3237低危8100-84558100-33395300-85555300-34395200-86563300-353916、18、52、68低危4400-8756低危4400-36401800-88565600-374133、3900-89573500-38415800-90575100-39411800-91595200-404233、5100-92595800-41435300-93605200-4243低危8100-94601600-434316、51、5800-95611600-44435600-9661低危8100-4544低危8100-976116、58、5200-46445600-98615200-47443500-99625100-484433、3900-1006316、31、58、6800-49446800-1016316、39、51低危8100-50453900-1026531、5200-514533、51、5800-103865800-52451800-104725800-1053468左图是HPV分型图部分结果见下图高危59型高危56及低危11型高危16型表1HPV感染者年龄分布年龄（岁）总人数阳性人数阳性率（％）<308578.2%31-401873016.0%41-502383615.1%51-601752212.5%>61521019.2%表2HPV分型情况分型情况出现次数出现率11型21.3%44型32.0%16型2114.0%18型96.0%31型32.0%33型96.0%35型53.3%39型128.0%51型85.3%52型1711.3%53型117.3%56型53.3%58型1610.6%66型53.3%68型128.0%81型128.0%4结论在接受检查的737名职工中，有105名感染HPV,感染率约为14.2%。其中高危型感染率明显高于低危型，有一部分待检者有多种亚型同时感染。单一感染76例，多重感染29例，多重感染中18例双重感染，6例三重感染，4例四重感染，1例五重感染。无论单一感染还是多重感染,总感染中均以16型(高危)多见，与以往研究结果一致[1]。由此可见，即使是健康女性也不能排除无HPV感染。人们应加强对HPV的正确认识，定期进行HPV筛查，将宫颈癌扼杀在萌芽状态。此外人们应在平时加强锻炼，增强身体的抵抗力，保持身心健康。时刻注意自己身体的任何变化，做到早发现，早预防治疗。5讨论在对汾阳医院职工的HPV筛查研究结果中，不难看出HPV感染可见于已婚女性的任何年龄段。据了解，40%的女性在一生中的某个时期都会与HPV有过接触，但多半会自动清除。由上述表1可知，<30岁女性HPV感染率较低，由于机体的免疫力比中老年强，在HPV感染后，自身免疫系统会自动清除。而中老年女性免疫力较年轻女性低，自身的免疫系统无法在一定时间内清除，病毒整合宿主基因[2]组DNA,导致HPV持续性感染[3]，这也是宫颈癌发生的主要原因。据了解[4]，我国每年新增宫颈癌患者大约13.5万，占全球发病数量的1/3，以鳞状细胞癌[5]为主。这个可怕的数据足以引起每个人的重视。最近研究表明[6]，宫颈癌发病呈年轻趋势,发病高峰年龄为36～50岁。而引起宫颈癌的主要是16、18、58、52、33型。因此，已婚女性定期做HPV检测很有必要，据2013年新英格兰医学杂志建议：21岁以下女性不需要筛查。21-29岁之间，每三年进行一次细胞学的筛查。30-65岁，每五年进行一次HPV和细胞学的联合筛查，或者每三年进行一次细胞学的筛查。65岁以上，若之前的结果正常，可以停止筛查。表2可以很直观的看出，在HPV感染的人群中，16亚型感染率较其他亚型高，与以往结果相符[7]。最新研究表明[8]，引起宫颈癌的主要原因有HPV感染、人工流产次数、性伴侣、被动吸烟、丈夫包皮过长、宫颈肿瘤家族史、早婚、精神创伤、结婚次数、吸烟、多产及初产年龄过早。人们应对此引起很大的重视，深入对宫颈癌的正确认识。在平常生活中多食蔬菜及饮茶，保持心情愉快舒畅。在HPV感染后，不要惊慌以致方寸大乱，为了治疗疾病，听信一些江湖游医的说法，往往上当受骗不说，还对疾病造成严重的影响。因此人们应正确认识面对HPV，做到早发现，早预防治疗。市场上治疗HPV感染的大部分是一些重组干扰素类药物。最新研究出来的冷冻联合干扰素[9]治疗方法疗效可观。目前针对预防性HPV疫苗[10]，分二价疫苗（anti-HPV16.18）和四价疫苗（anti-8），已在全球使用六年，有效性和安全性均得到肯定。第二代疫苗还在临床实验阶段。HPV疫苗接种在欧美已很常见，尤其是高学历的女性和留学生们有较强的接受度，甚至现在也推荐男性接种相关疫苗。在我国，有一些大陆的女性选择去香港、台湾接种HPV疫苗，发现HPV疫苗对中国人一样有效。在一项对城市地区女性和医护人员对HPV及疫苗的认识调查[11]中发现，女性对HPV及疫苗认知度[12]低,但大多数女性均愿意接种疫苗,而高学历、高收入、听说过HPV者、家族有肿瘤史者更愿意接种疫苗。因此,关于HPV及疫苗知识的宣传教育,应根据不同的社会文化背景来制定,尤其是针对医护人员，需要更多有关疫苗安全性和有效性的证据来提高接种意愿,达到疫苗防治宫颈癌的目的。【参考文献】[1]唐俭,唐孝亮,李修荣.586例健康妇女HPV16、18型感染情况分析[J].检验医学与临床.2009(18)[2]胡家昌,李芳.高危型HPVDNA与宿主基因整合及致癌机理的相关研究进展[J].现代妇产科进展.2015（05）[3]Koshiol

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