临床免疫学-移植免疫与配型

移植免疫与配型

授课内容一、器官移植及其相关的基本概念二、排斥反应的种类及其发生机制三、移植前需进行哪些实验室检查四、血型的概念及血型鉴定五、HLA的概念及HLA配型方法六、PRA的概念及检测方法七、移植后需要做哪些检查移植免疫的发展史1596年，意大利外科医生进行最早一次成功的自体组织移植.19世纪初，尝试异体皮肤移植,但因排斥而失败。1940年，Medewar证实了同种异体移植排斥是一种免疫现象.1954年，美国医生Murray在单卵双生姐妹间进行肾移植获得成功。

1954年美国Murray第1次肾移植成功

★开创了人类肾脏、心脏、肝脏以及其他器官移植手术的先河。Murray在1990年获得了诺贝尔医学奖器官移植的发展史JosephE.Murray

JosephE.Murray

器官移植的发展史1962年，应用HLA分型技术选择合适的供体，第一次用无亲缘关系的供体肾进行异体移植，获得成功。1963年肝移植、肺移植1966年胰腺移植

1967年心脏移植80年代初，由于环孢素A等应用，明显提高了器官移植的成功率，器官移植已广泛应用于临床。移植手术水平的改善解剖结构烂熟于心显微外科飞速发展艺高人胆大器官保存技术的提高单纯冷却灌洗机器持续灌注深低温保存离体器官可以用含氧无血溶液进行保存灌洗，开创科学家研究低温灌洗器官保存时代。AlexisCarrel免疫抑制剂成功使用Voronoy1933年肾脏移植失败？JosephE.Murray

1962年尸肾移植成功！硫唑嘌呤！PeterBrianMedawar：1942年首次揭开移植排斥之谜，创立移植免疫学免疫抑制剂成功使用免疫移植免疫→移植排斥移植排斥→免疫本质和过程：MHC、T细胞发育、生物学功能、免疫耐受免疫机制的阐明→移植耐受：免疫抑制剂、移植配型免疫抑制剂：1950s：x线全身照射1960s：硫唑嘌呤+激素——基本用药1970s：多克隆抗体（抗淋巴细胞球蛋白ALG和抗胸腺球蛋白ATG)——选择用药1980s：环孢素A，进入CsA时代 单克隆抗体（CD3单抗）1990s：他克莫司(FK506)和毒酚酸酯(MMF)90年代中后期：雷帕霉素未来趋势：诱导免疫耐受11

一、器官移植及其相关的基本概念

移植（transplantation):将一个个体的一部分通过手术或其他方法移到另一个体的特定部位，继续保持活力并发挥功能，以治疗疾病或挽救生命。移植物（graft）：被移植的细胞，组织或器官的统称供者（Donor）：献出移植物的个体受者（Recipient）：接受移植物的个体器官移植（organtransplatation)

应用自体或异体的正常细胞、组织、器官置换病变或功能缺损的细胞、组织或器官，以维持和重建机体生理功能。细胞移植：造血干细胞等组织移植：皮肤组织等器官移植：肝肾心肺肠等13器官移植的种类14donor-recipient遗传学关系自体移植：auto-transplant同质移植：iso-transplant异体移植：allo-transplant异种移植：xeno-transplant遗传学分类自体移植(autologoustransplantation)

同系移植(isograft)单卵双生间、纯系动物间的移植同种异体移植(isogeneictransplantation)同种间不同个体的移植，具遗传基因、MHC差异异种移植(xenotransplantation)异种动物间的移植：种间差异性更大

异种移植（Xenotransplantation)转基因猪------组织和器官的最佳来源受精卵DNA表达人MHC异种之间的移植一般会失败；同一种系内不相关的个体之间的移植常常要失败；自体移植总是能成功；同种异体的受体对首次移植物排斥时间较长，但再次接受同一供体的移植物，则迅速被排斥；受体与供体间的血缘关系愈近，移植愈可能成功。移植排斥反应的规律21

移植抗原（组织相容性抗原）

概念：引起移植排斥反应的抗原类型：

1.主要组织相容性抗原

2.次要组织相容性抗原

3.血型抗原

4.组织特异性抗原

22

1.主要组织相容性抗原能引起强烈排斥反应的组织相容性抗原称为主要组织相容性抗原即MHC（MajorHistocompatibilityComplex）抗原，在人类又称为人类白细胞抗原HLA（HumanLeukocyteAntigen）。

位于一对同源染色体上对应位置的一对基因称为等位基因（allele）；由于群体中的突变，同一座的基因系列称为复等位基因。HLA复合体的每一座存在为数众多的复等位基因，由于各个座位基因是随机组合的，故人群中的基因型可达108之多。A5A10B40B16A1A2B8B35甲（6#）乙（6#）A5，A10，B40，B16复等位基因

一对等位基因同为显性称为共显性。HLA复合体中每一个等位基因均为共显性，从而大大增加了人群中的HLA表型的多样性，达到107数量级。因此除了同卵双生者外，无关个体间HLA型别完全相同的可能性极小。A2A10B40B16A1A2B8B35HLAmolecule：A1，A2，B8，B35

甲甲乙乙HLAmolecule：A2，A10，B40，B16

共显性表达27

DPDQDR

C4

C2

BCA人类MHC(HLA)基因结构

II类III类I类HLA抗原可根据不同基因位点的产物和它们的功能加以分类。第一类抗原：HLA-A，HLA-B，HLA-C

第二类抗原：HLA-DR，HLA-DQ，HLA-DP

第三类抗原：C4A，C4B，C2，Bf等补体成分28多基因座复等位基因的存在基因共显性表达HLA的高度多态性（polymorphism）没有血缘关系的两个人HLA几乎没有相同的可能HLA基因存在丰富多态性：

A约27、B约50C约10、DR约23DP约6、DQ约9HLA抗原命名（第12届国际会议）HLA-AHLA-BHLA-CHLA-DRHLA-DQHLA-DPA1B5B78Cw1DR1DQ1DPw1A2B7B47Cw2DR103DQ2DPw2A203B703B48Cw3DR2DQ3DPw3A210B8B49(21)Cw4DR3DQ4DPw4A3B12B50(21)Cw5DR4DQ5(1)DPw5A9B13B51(5)Cw6DR5DQ6(1)DPw6A10B14B5102Cw7DR6DQ7(3)A11B15B5103Cw8DR7DQ8(3)A19B16B52(5)Cw9(w3)DR8DQ9(3)A23(9)B17B53Cw10(w3)DR9A24(9)B18B54(22)DR10A2403B21B55(22)DR11(5)A25(10)B22B56(22)DR12(5)A26(10)B27B57(17)DR13(6)A28B2708B58(17)DR14(6)A29(19)B35B59DR1403A30(19)B37B60(40)DR1404A31(19)B38(16)B61(40)DR15(2)A32(19)B39(16)B62(15)DR16(2)A33(19)B3901B63(15)DR17(3)A34(10)B3902B64(14)DR18(3)A36B40B65(14)DR51A43B4005B67DR52A66(10)B41B70DR53A68(28)B42B71(70)A69(28)B44(12)B72(70)A74(19)B45(12)B73A80B46B75(15)B76(15)B81B77(15)Bw4Bw6

注：括号中为宽型抗原历年发现HLA抗原和基因的情况31II类基因区III类基因区I类基因区编码编码HLA-II类分子HLA-I类分子补体成分等32MHCI类和II类分子的结构、分布和功能特点特征MHCI类分子MHCII类分子基因HLA-A,B,CHLA-DP,DQ,DR分子结构

α+β2mα+β抗原肽结合区a1+a2a1+β1肽结合槽大小8～12aa13～17aa组织分布和表达所有有核细胞表面APC，激活的T细胞特异性免疫中识别和递呈内源性识别和递呈外源性的功能抗原肽，与共受体CD8

抗原肽，与共受体CD4

结合，限制Tc杀伤功能结合，限制Tc杀伤功能

33MHCI类分子接纳抗原肽为8-12个氨基酸内源性抗原递呈途径外源性抗原递呈途径MHCII类分子接纳抗原肽为13-17个氨基酸CD8＋TCD4＋T34

2.次要组织相容性抗原在供、受者间MHC完全相同的情况下，仍会发生排斥反应，引起这种较弱而缓慢排斥反应的组织相容性抗原称为次要组织相容性抗原(minorhistocompatibilityantigen,mHA)。此类抗原是表达于机体组织细胞表面的同种异型抗原，由种群内某些多态性基因编码，可被MHC分子提呈。mHA主要包括两类：性别相关的mHA和常染色体编码的mHA35次要组织相容性抗原的概念

位于细胞内有别于MHC分子的具有同种差异的抗原肽必须和MHC分子结合被APC直接提呈通常引起弱而迟缓的细胞免疫反应36次要组织相容性抗原的反应特点

一般属非膜蛋白，主要诱导细胞免疫受MHC分子约束只有在体内致敏后，才能在体外检测不同个体中，参与排斥反应的mH抗原不尽相同大多引起迟缓的排斥反应37

3.其他同种异型抗原人类ABO血型抗原：不仅分布在红细胞表面，也存在于肝、肾等组织细胞和血管内皮细胞表面，供、受者ABO血型不合也可引起移植排斥反应。组织特异性抗原：特异性表达于某一器官、组织或细胞表面的抗原。在多种组织特异性抗原中，研究较深入的是内皮细胞(vascularendothelialcell，VEC)特异性抗原和皮肤的SK抗原。二、排斥反应的种类及其发生机制

移植排斥（transplantationrejection)

是宿主针对移植抗原或移植物针对宿主抗原产生的免疫应答，从而导致移植物功能丧失或受者机体损害的过程。排斥反应的本质：T细胞介导的、针对移植抗原的免疫应答

识别“自己”与“非己”记忆性特异性可经淋巴细胞转移40超急性排斥反应急性排斥反应慢性排斥反应移植排斥反应类型

（一）据其发生的快、慢和病变特点分为：移植排斥反应的分类和特点类型反应时间反应机制超急性术后数分钟至几小时受者体内事先存在的天然抗体加急性1~5天T淋巴细胞急性7~14天T淋巴细胞慢性数月至数年抗体、补体、内皮细胞增生42（二）根据排斥对象分为：1、宿主抗移植物反应（hostversusgraftreaction,HVGR）:受者对供体器官产生的排斥反应。2、移植物抗宿主反应（graftversushostreaction,GVHR）:移植物中的淋巴细胞对宿主的组织抗原产生免疫应答并引起组织损伤。43

（三）移植排斥反应的免疫学特点1、移植抗原的提呈识别2、排斥反应的免疫效应机制441、移植物抗原的提呈与识别1）由供体APC进行的抗原提呈

——直接提呈

2）由受体APC进行的抗原提呈

——间接提呈45受者T细胞46直接提呈的特点

提呈完整的同种异型MHC分子激活大量T细胞克隆（1-10%T细胞总数）

主要引起急性排斥反应对免疫抑制治疗敏感47间接提呈的特点

提呈经处理的同种异型MHC抗原肽激活少量T细胞克隆（0.01%T细胞总数）

主要引起慢性排斥反应对免疫抑制治疗不敏感492、排斥反应的免疫效应机制

抗体：预存抗体的作用移植物诱导抗体的作用

T细胞：CD4+细胞的作用

CD8+细胞的作用炎症因子：粘附分子的作用细胞因子的作用50（四）同种异基因移植排斥反应的类型及效应机制超急性排斥反应急性排斥反应慢性排斥反应血管接通后数分钟至数小时移植后数天至2周移植后数月至数年HVGR511.超急性排斥反应预存抗体（ABO血型抗体；术前反复输血、怀孕、再次移植等）抗原（血管内皮细胞表面）激活补体直接破坏靶细胞活性片段引起血管通透性增高和中性粒细胞浸润和损伤纤维蛋白沉积和大量血小板聚集血管炎症反应、血管内凝血出血器官不可逆性缺血、变性、坏死522.急性排斥反应细胞免疫排斥体液免疫排斥CD4+Th介导的迟发型超敏反应性损伤CD8+CTL的细胞毒效应补体激活急性间质炎急性血管炎533.慢性排斥反应由多因素参与急性排斥反应的延续CD4+Th和巨噬细胞相关的慢性炎症反复多次抗体或细胞介导的内皮损伤细胞损伤诱发持续分泌多种生长因子(如胰岛素样生长因子、血小板源性生长因子、转化生长因子等）导致血管壁增厚、间质纤维化间质纤维化、移植物内血管硬化三、移植前需进行哪些实验室检查?常规检测血型鉴定HLA配型PRA常规检测血尿粪常规肝肾功、电解质、血气出凝血微生物四、血型的概念及血型鉴定血型（bloodgroup)：

血液各成分以抗原为表现形式、由血型基因所决定的遗传性状，是血液系统的一种遗传多态性，包括红细胞血型、血小板血型、白细胞血型等。狭义的血型一般指红细胞血型。

血型鉴定ABO血型Rh血型ABO血型ABO抗原是强组织相容性抗原红细胞表面血型抗原+血清抗体 正向定型：抗体鉴定抗原 反向定型：抗原鉴定抗体四种血型：A、B、AB、OABO血型凝集试验ABO血型鉴定正向定型反向定型Rh血型常见D、E、C、c、e抗原Rh阴性汉族<1%受者Rh阴性，供者必须阴性(第一次一般无问题)传统方法：凝集试验新方法：流式细胞仪 液相芯片 生物芯片等五、HLA的概念及HLA配型方法

HLA概念： 人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen),由HLA基因复合体编码的产物，因最初是在白细胞表面发现，故得名。主要表达于细胞膜，或游离存在于血液和体液中，包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类。参与免疫应答和免疫调节，与移植排斥反应密切相关。

HLA复合体位于6号染色体短臂上。

国外统计：3位点6个抗原均匹配时，移植肾的10年存活率为62%，5抗原为47%，4抗原为45%，3抗原为40%，无1匹配时为33%，说明HLA配型可减少移植物的同种异型抗原性，有助于提高移植物的长期存活率。10090807060504030201001年2年同卵双生子（N=12）HLA一致的同胞（N=765）尸体捐献者（N=3974）HLA不一致的同胞（N=951）%移植物存活率67HLA的检测：血清学检测细胞学检测基因检测HLA配型681、血清学分型法

补体介导的微量细胞毒试验

原理：

抗体(HLA分型)+淋巴细胞(受者)+补体淋巴细胞受损判定结果（细胞死亡百分率）主要应用：检测HLA-A、B、C抗原

69技术要点（1）分离待检的淋巴细胞，经洗涤、计数后，配成一定浓度。检测HLA-Ⅱ类抗原时，需分离B淋巴细胞。（2）取分型板，加入标准抗血清和待检淋巴细胞，充分混匀，温育。（3）加入补体，温育。（4）加台盼蓝/伊红染色死细胞。（5）用倒置显微镜观察计数死细胞的百分数。

HLA抗体测步骤:CDC染色固定观察结果孵育一小时

0-10%11-20%21-50%51-80%81-100%1阴性2可疑阴性

4弱阳性6阳性

8强阳性试验结果判定标准

72

2.细胞学分型法

混合淋巴细胞培养法（MLC)

分为：单向法和双向法原理：

单向法：淋巴细胞（供者，X线或丝裂霉素处理）

+淋巴细胞(受者)培养淋巴母细胞(判定结果)；

双向法：淋巴细胞(供者)+淋巴细胞(受者)

培养淋巴母细胞(判定结果)。

主要应用：检测DR抗原734天3H-胸腺嘧啶混合淋巴细胞4小时计量放射性g-射线PBLPBL

混合淋巴细胞反应混合淋巴细胞培养74

原理：比较供、受者编码HLA抗原基因的DNA序列，判定供、受者间的相似程度。主要方法：

(1)PCR-RFLP(限制性片段长度多态性)法

(2)PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法

(3)PCR-SSP(序列特异性引物）法(4)SBT(Sequencing-BasedTyping)

3、基因分型法

“骨髓库”构建原理76限制性片段长度多态性分析法（RFLP）

根据不同个体间的HLA相应碱基序列在不同部位存在多个不同酶切位点，通过一组限制性内切酶消化、识别、切割这些位点，产生数量和长度不一的DNA酶解片段，经电泳分离，与相应的cDNA探针进行杂交，即可分析限制性片段长度多态性，借以确定HLA的型别，这种HLA分型法称为DNA-RFLP。若对DNA片段进行体外扩增，然后再进行RFLP分析，则可大大提高RFLP的敏感度和特异性，这种引入DNA体外扩增技术的限制性片段长度多态性分析则称为PCR-RFLP分型法。77PCR-SSOP

PCR-SSOP分型法是将待检细胞HLA基因片段经PCR扩增后转移至NC膜或尼龙膜上，然后与放射性核素（32P）、生物素或地高辛等标记的探针进行杂交，若待检DNA与已知核苷酸序列的探针互补，则两者结合，即可分析出待检DNA序列，据此确定HLA的基因型别。78PCR-SSP分型法

PCR-SSP是根据HLA碱基序列的多态性和已知的DNA序列设计出一套针对每一等位基因的特异性引物，SSP只能和相应等位基因特异片段的碱基互补性结合。通过PCR技术将待检DNA扩增，产生相对应的特异性扩增产物，通过电泳分析确定HLA型别。HLA-DRB1等位基因PCR-SSP分型引物序列

Table1.SenseprimersquenceofHLA-DRB1allelestypingbyPCR-SSP

HLA-DRB1

Allele

Primersequence5’end

Primersequence3’end

0101

TTGTGGCAGCTTAAGTTTGAAT

CTGCACTGTGAAGCTCTCAC

1501

TCCTGTGGCAGCCTAAGAG

CCGCGCCTGCTCCAGGAT

1601

TCCTGTGGCAGCCTAAGAG

AGGTGTCCACCGCGGCG

0301

TACTTCCATAACCAGGAGGAGA

TGCAGTAGTTGTCCACCCG

0405

GTTTCTTGGAGCAGGTTAAACA

CTGCACTGTGAAGCTCTCAC

1101

GTTTCTTGGAGTACTCTACGTC

CTGGCTGTTCCAGTACTCCT

1202

AGTACTCTACGGGTGAGTGTT

CACTGTGAAGCTCTCCACAG

1301

TACTTCCATAACCAGGAGGAGA

CCCGCTCGTCTTCCAGGAT

1401

GTTTCTTGGAGTACTCTACGTC

TCTGCAATAGGTGTCCACCT

0706

CCTGTGGCAGGGTAAGTATA

CCCGTAGTTGTGTCTGCACAC

0803

AGTACTCTACGGGTGAGTGTT

CTGCAGTAGGTCTCCACCAG

80D-mix+DNA+Taq每孔加DNA标本、Taq酶和D-mix每孔包括两套引物特异性引物内对照引物MICROSSP

微量SSP试剂盒原理HLA基因分型HLA-DRHLA-AHLA-BHLA-C82四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)：聚合反应中，ddNTP会随机取代dNTP，使新合成的DNA链无法继续延伸脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)/双脱氧核苷三磷酸

(ddNTP)3‘少一个羟基四种不同染料标记的ddNTPSanger双脱氧法原理Sanger双脱氧法原理SeCore™I类位点试剂盒A、B以及Cw位点

单管多段扩增，分成2个片段A位点（Exon1、2、3以及4、5）B位点（Exon2、3以及4、5）Cw位点（Exon1、2、3以及4、5、6)6个测序引物对Exon2、3、4进行双向测序A位点B位点Cw位点990bp950bp1375bp1100bp1400bp1370bpMWABCwLocationofaminoacidvariabilitythatresultsinmultipledifferentHLAclassImoleculesExon212Exon43Exon1LeaderExon3SeCore™II类位点测序试剂盒DRB1单管扩增系统300bp的扩增产物已包含Codon86反向TG测序混合液MWDRB1—DQB1位点测序试剂盒分别对Exon2和Exon3进行两管扩增—DPB1位点测序试剂盒LocationofaminoacidvariabilitythatresultsinmultipledifferentHLAclassIImoleculesExon21/12/2Exon1LeaderExon393

四种常用的HLA-DNA分型方法主要指标比较方法 试验时间 操作成本 精确度效率 自动化PCR-SSO

Directdot-blot + + +++ ++ +++

- Reversedot-blot

+ + +++ ++ +++

- PCR-SSP +++ ++ ++ ++ -

+ PCR-RFLP + + + + -

- SEQUENCING - - - ++++-

+ ++++：极佳+++：最佳++：好+：可接受-：有问题SSOP=SequenceSpecificOligonucleotideProbeSSP=SequenceSpecificPrimer

RFLP=RestrictionFragmentLengthPolymorphism临床意义HLA配型是移植成功与否最基础最关键的一步，保证供受体间上述分型相同，防止移植排斥反应HLA位点和碱基顺序：

位点不同——急性排斥 位点同、碱基顺序不同——慢性排斥六、PRA的概念及检测方法※概念：是指群体反应性抗HLA各种抗原的抗体，通常为IgG；是各种组织器官移植术前筛选致敏受者的重要指标，与移植排斥反应和存活率密切相关。 如果患者在输血或器官移植中曾经接触过他人HLA，则会产生较强的抗性，不利于器官移植配型。

群体反应性抗体

panelreactiveantibody,PRAPRA与移植PRA阳性也与心脏移植、肺移植、肝移植中的排斥反应相关，并且往往出现在排斥症状发生之前。受者术前、术后PRA分析可以让临床医生及时了解移植后的免疫状态和具有排斥反应预警作用。2000年美国联邦立法将PRA列入器官移植规范技术，2004年PRA被例入中国的器官移植技术标准之一。抗体特异性

HLA-I类465例（43.5%）

HLA-II类268例(25.1%)HLA-I&-II333例(31.4%)。南方医院肖露露

1066例PRA阳性受者的HLA特异性分析

结果和讨论HLA-I类抗体比例为75%，最常见的为抗HLA-A2、A24、A19和抗HLA-B40、B15、B22。II类抗体57％；最常见的为抗HLA-DR5，DR4和DR7。

PRA阳性率有显著地性别差异，女性受者因既往的妊娠经历导致产生HLA抗体的几率高。某个特异性HLA抗体的产生的几率主要受２种因素的影响：（一）该抗原在人群中分布频率（二）该抗原的等位基因数目

唯一有效的检测器官移植受者免疫状态的方法是体液免疫检测（而不是细胞免疫检测），即通过PRA检查患者HLA抗体的存在。移植前PRA阳性，代表受者已经被致敏，其移植物的存活率明显低于移植前未被致敏得受者；移植后PRA阳性，则有2种可能：即排斥预兆，或是术中输血致敏；前者直接介导移植物被排斥，而后者则对移植物无损害。Allo-antibodydetectionwithpurifiedantigen抗原ELISAFLOWLuminexAgAgAgAgColoredBeadsAgAgAgAgAgAgAgAgFITC-Anti-HumanIgG

Anti-Ag(纯化抗原的抗体检测)ELISA：包被HLA抗原LABScan™100Luminex仪器直径5.6M，液态反应体系中呈悬浮状态表面带有大量的活性基团，可与核酸探针，抗体等方便地偶联MicroPlex微球Microspheres(Beads)Luminex技术的原理Microspheres(Beads)微球在生产过程中带上红色和红外两种染料两种染料的不同配比赋予了微球不同的光谱学指纹既特有的荧光激发光谱.Luminex技术的原理108

Luminex系统可用于各种免疫学实验,酶学实验和复杂的基因分析.实验的反应物,如:抗体、寡核甘酸等被包被到这种特殊的荧光磁珠表面.Luminex技术的原理用捕捉物(一抗)包被微球加进样品(抗原)加进生物素接合(Biotinylated)的二抗加进报告用的荧光报告基团

AssayLuminex技术的原理红激光分辨微球本身的光谱学指纹绿激光检测荧光报告基团AnalysisLuminex技术的原理Luminex技术的特点高通量：1次检测，仅需10µl样本，最多可达100个指标高速度：最快可达10000测试/小时低成本：流式荧光技术联检的试剂用量少，能有效降低临床应用的成本灵敏度高：包被有大量的抗原、抗体或核酸分子，反应充分、产生信号强，通过激光激发荧光检测重复性好：每个指标有5000个反应单元，分析100次取均值

PE-anti-IgGAlloantibodyPE-第二抗体结合物检测HLA抗体工作原理LABScreen7µl血清+14ulPBS(1x)2µl微球室温下避光孵育30分钟洗涤3次加入PE-标记第二抗体室温下避光孵育30分钟洗涤2次LabScan™100流式分析仪读取结果操作流程LABScreen特点与优势灵敏度高单管，单次检测-可同时检测I类II类PRA特异性强，可达到高分辨水平自动读取数据，进行分析。操作简便、快速。高通量处理样品。LABScreen临床意义：判断受者血清是否存在PRA及其致敏程度。移植术前后的PRA高低与术后急性排斥反应明显有关。

116交叉配型试验

目的：检测受者体内是否存在抗供者的特异性抗体以及受者对供者HLA抗原的相容程度。技术要点：供者淋巴细胞+受者血清（混合）供者淋巴细胞+受者淋巴细胞等方法：1、微量细胞毒试验，2、流式细胞术，

3、混合淋巴细胞培养

供者抗原供者淋巴细胞患者血清(抗供者抗体)补体细胞溶解Micro-lymphocytotoxicitytestComplement-dependentCytotoxicity(CDC)Cross-matchassay(交叉配型)补体依赖的细胞毒试验(CDC)原理：供者淋巴细胞受者血清补体临床意义：判断受者血清是否存在供者抗原的抗体，该抗体可引起超急性排斥反应。0-10%11-20%21-50%51-80%81-100%1阴性2可疑阴性

4弱阳性6阳性

8强阳性CDC试验结果判定标准

选分数最低的供体

七、移植后需要做哪些检查移植器官功能监测移植排斥反应监测免疫抑制药物监测移植术后感染检测移植器官功能监测临床症状实验室指标影像学指标病理情况肝移植：转氨酶代谢状态凝血因子胆汁一般检查肾移植：血清肌酐胱抑素C

尿量尿蛋白一般检查骨髓移植：血细胞骨髓嵌合情况一般检查移植排斥反应监测T淋巴细胞及其亚群检测

CD3+T细胞

CD4+T细胞

CD8+T细胞

CD4/CD8：

>1.2提示急性排斥

<1.08提示感染移植排斥反应监测PRA检测细胞因子检测免疫抑制药物监测环孢素（CsA）阻止数种早期T细胞激活基因的转录，抑制巨噬细胞产生白介素Ⅰ。他克莫司（FK506）阻止受异常刺激的T细胞白介素2表达。吗替麦考酚酯（MMF）药代相关酶基因多态性CYP3A5:A/A快代

A/G中代G/G慢代移植术后感染检测术后1月：多为细菌和真菌术后2-6月：多为病毒查病毒：CMV、HSV、VZV等查细菌：主要是革兰氏阴性菌查真菌：念珠菌、曲霉菌等巨细胞病毒（CMV）

巨细胞病毒是一种DNA病毒，是新生儿包涵体病（CID）的病原体，其直径约200nm，为最大的动物病毒。人类巨细胞病毒感染非常普遍，初次感染大多在2岁以下，通常呈隐性感染，少数有临床症状，69~90%成人已有CMV抗体。多数人在儿童时期感染过而产生获得免疫力，但多数可长期带毒成为潜伏感染。DirectDetection1DNA/mRNA2pp65Antigenemia

Diss