临床微生物学检验：沙门菌属和耶尔菌属(2013检本)

第五节沙门菌属

Salmonella掌握内容沙门菌属及耶尔森菌属1、生物学特性（形态染色、培养及生化反应）2、在选择性培养基上菌落形态3、检验程序4、所致疾病1880年，Eberth首先发现伤寒杆菌。

1885年，美国病理学家Salmon首次分离到猪霍乱沙门菌。2007年在宾夕凡尼亚州生牛奶引发伤寒爆发，29人腹泻的症状。美国鸡蛋受沙门菌感染事件

2010年8月17日加州多个地区暴发沙门菌疫情，266例患病报告。鸡蛋召回数量起初为2.28亿枚，23日升至5.5亿枚。美国人生吃西红柿“中毒”事件

2008年6月美国9个州，数百人因生食了新鲜西红柿而出现发烧、腹泻、腹痛等症状，有几十人因病情严重需住院。沙门菌的发现和食物中毒typhoidfeverisstillabighealth-problemindevelopingcountries.TheWHOestimatesthatthereareworldwideabout16millionofclinicalcasesannually,ofwhichabout600,000resultindeath.Incomparison,about400casesoccureachyearintheU.S.,and70%ofthesecasesareacquiredwhiletravelinginternationally.Themostcommonlyreportedserotypes,inhistoryandpresent:S.typhi、S.enteritidisandS.typhimurium

肠沙门菌（S.enterica)

邦戈沙门菌（S.bongori）沙门菌属分类亚种Ⅰ肠沙门菌肠亚种亚种Ⅱ肠沙门菌萨拉姆亚种亚种Ⅲa肠沙门菌亚利桑那亚种亚种Ⅲb肠沙门菌diarizonae亚种亚种Ⅳ肠沙门菌毫顿亚种亚种Ⅵ肠沙门菌indica亚种沙门菌属沙门菌属目前至少有2500种以上血清型。如：伤寒沙门菌的全名是“肠沙门菌肠亚种伤寒血清型”（SalmonellaentericasubspeciesentericaserotypeTyphi），可缩写为伤寒血清型沙门菌（SalmonellaTyphi）沙门菌99％临床分离株是亚种Ⅰ中的菌株。沙门菌属分类伤寒沙门菌副伤寒沙门菌(甲、乙、丙)人肠热症鼠伤寒沙门菌肠炎沙门菌猪霍乱沙门菌儿童伤寒人、动物急性胃肠炎鸡伤寒沙门菌动物沙门菌属临床意义亚种1的菌种根据其对宿主的致病性,可分为三类

侵袭力：Vi抗原、菌毛粘附内毒素：可引起体温↑，WBC↓血压↓肠毒素：（鼠伤寒沙门菌）致病物质所致疾病肠热症：伤寒、副伤寒胃肠炎：食物中毒菌血症携带者病人带菌者粪-口1、肠热症：肠壁固有层淋巴结淋巴液肠系膜淋巴结胸导管血第一次菌血症胆囊、骨髓、肝、脾、肾第二次菌血症

发热、不适、全身疼痛持续高热、相对缓脉、肝脾肿大、外周血WBC下降2W后发生肠局部坏死溃疡致肠穿孔随尿排出随胆汁进入肠道随粪便排出2、胃肠炎（食物中毒）：最常见鼠伤寒沙门菌猪霍乱沙门菌肠炎沙门菌大于108食物中毒（发热、恶心、呕吐、腹痛、水样泻）3、菌血症或败血症：鼠伤寒沙门菌猪霍乱沙门菌肠炎沙门菌血败血症（高热、寒战、贫血）或菌血症脑膜炎、骨髓炎、胆囊炎等4、无症状带菌者

约1-3%伤寒或副伤寒患者，症状消失1年后，粪便仍可排菌，这些菌主要留在胆囊中，有传染性。“伤寒玛丽”沙门菌属的生物学特性一、形态染色二、抗原结构三、培养和生化特性四、抵抗力形态染色革兰阴性杆菌，直而细长，多有周鞭毛、无芽孢、无荚膜沙门菌电镜图鞭毛抗原（H）菌体抗原（O）表面抗原（K、Vi抗原）抗原构造

1.O抗原：

多糖-类脂-蛋白质复合物，耐热刺激机体产生IgM类抗体（出现早、消失快）（1）O抗原的表示方法共有58种，已排到67。

O1、O2、O3、O4……O67（2）沙门菌的分群及表示方法有共同抗原成分的血清型归为一个群。

A、B、C、D、E、F……Z、O51~O63、O65~O67

例如：O2（A）群;O6，7（C1）群

95％以上致病菌在A-F群

抗原成份2.H抗原：

蛋白质，不耐热刺激机体产生IgG类抗体（出现迟、消失慢）沙门菌H抗原有两种：

I相：特异相，小写字母表示a、b、c……zz1~z55II相：非特异相，阿拉伯数字表示1、2、3……,也有用小写字母a、n、x等表示抗原成份3.表面抗原：

有三种：Vi抗原、M抗原、5抗原

是不耐热的多糖荚膜抗原，抗原性弱Vi抗原位于菌体的最表层，包围了O抗原，可阻碍O抗原的血清学凝集试验。破坏Vi抗原：100℃

10min含有Vi抗原的沙门菌：伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、都柏林沙门菌

抗原成份S-R变异：光滑型-粗糙型H-O变异：有鞭毛-无鞭毛位相变异：双相型-单相型V-W变异：失去Vi抗原变异性对热抵抗力不强：

60℃

1h或65℃15-20min水：2－3周粪便：1－2个月耐胆盐、煌绿抵抗力培养特性1、兼性厌氧，最适生长温度35－37℃，最适

pH6.8－7.8，营养要求不高。2、肠道选择性培养基（MAC、EMB、SS、XLD）：小至中等、半透明、乳糖不发酵菌落，产H2S菌株在SS、XLD上为黑色菌落。3、普通培养基：圆形、光滑、湿润、不透明、边缘整齐的中等菌落。选择性培养基SS平板：含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿、硫代硫酸钠等Mac平板：含乳糖、中性红指示剂、胆盐等中国蓝平板：含乳糖、中国蓝和玫瑰红酸指示剂EMB平板：含乳糖、伊红和美蓝指示剂XLD平板：含木糖、乳糖、蔗糖、赖氨酸、去氧胆酸钠、酚红指示剂等伤寒沙门菌菌落特征

（血平板）伤寒沙门菌菌落特征

（SS平板）不产H2S的沙门菌落特征：无色、半透明、小菌落（MAC平板）XLD平板：不发酵乳糖的沙门菌志贺菌（红色菌落）；产生硫化氢的沙门菌（黑色菌落）；发酵糖类产酸的大肠杆菌（黄色菌落）培养特性4、生化反应发酵葡萄糖、硝酸盐还原阳性、动力阳性、

KIA：KA+/-+/-、

IMVC：-+--或-+-+、赖氨酸脱羧酶阳性、脲酶阴性、氧化酶阴性伤寒沙门菌

KIA（KA－＋）

MIU（+--）伤寒沙门菌

IMViC试验（－＋－－）（KA－＋）表示葡萄糖+、乳糖-、不产气、产H2SMIU表示动力、吲哚、尿素IMViC表示吲哚、MR、VP、枸椽酸盐常见沙门菌的主要生化特性微生物学检验一、标本采集二、检验程序及鉴定步骤三、抗体检测（肥达反应）伤寒病人标本采集原则伤寒和副伤寒食物中毒败血症第1周取血液可疑食物血第2周起取粪呕吐物第3周起取尿液 全程取骨髓

检验程序标本选择性平板、BAP生化反应血清学鉴定KIA/MIU、IMViC等玻片凝集试验增菌涂片染色药敏分离培养1、血液、骨髓胰酶大豆蛋白肉汤2、粪便、肛拭GN肉汤或亚硒酸盐肉汤肠道选择培养基：

MAC、EMB：无色半透明小菌落；

SS：无色半透明或中央黑色菌落；

XLD：红色或中央黑色菌落。床边接种生化反应1、初步生化：

KIA:葡萄糖＋

乳糖-、产气(伤寒除外）、H2S＋/-MIU:动力＋、吲哚-、脲酶-

IMViC:－＋－＋/-2、全面生化鉴定到种：生化反应

KIAMIU氧化酶触酶硝酸盐还原斜面底层产气H2S动力吲哚脲酶志贺菌KA-/+--+/---++伤寒沙门菌KA-+/-+---++乙型副伤寒菌KA+++---++志贺菌属和沙门菌属的基本生化反应

双糖铁琼脂1-对照2-铜绿3－志贺菌4－沙门菌5－大肠6-变形血清鉴定1、初步血清定群：采用多价O抗血清（A~F群）和单价O抗血清定群2、再用H单价(因子）血清结合Vi血清确定血清型沙门菌的血清学分型组菌名O抗原H抗原IH抗原IIA甲型副伤寒1、2、12a—B乙型副伤寒1、4、5、12b1、2

鼠伤寒沙门菌1、4、5、12i1、2C1希氏沙门菌6、7、Vic1、5

猪霍乱（副伤寒C)6、7c1、5D伤寒沙门菌9、12、Vid—

肠炎沙门菌1、9、12g、m—E1鸭沙门菌3、10e、h1、6沙门菌血清学鉴定：抗血清+待检细菌阳性阴性抗体检查肥达试验Widaltest原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原和甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的H抗原,检测病人血清中相应抗体的半定量凝集试验用途：辅助诊断伤寒、副伤寒肥达反应(Widaltest)O凝集（1:20～1:1280，效价1:80）H凝集（1:20～1:1280，效价1:320）肥达试验结果判断正常抗体水平

O≤1：80；H≤1：160；A、B、C≤1：80

动态观察H与O抗体的比较

O抗体：IgM型，出现早，消失快

H抗体：IgG型，出现晚，消失慢

肥达试验结果分析1、效价递增或恢复期比初次≥4倍有诊断意义2、O、H均升高：伤寒、副伤寒

O不高，H高：回忆反应

O高，H不高：感染早期或交叉反应，一周后复查，H升高可诊断3、O、H均不高者少见

结果分析入院后第4天入院后第12天TO1：801：320TH1：801：80TA（甲）1：401：160TB（乙）1：401：20TC（丙）1：401：20结果分析与报告1、从血及骨髓中分离出伤寒沙门菌应及时报告并隔离病人2、培养（-），O≥1：80，H≥1：160，伤寒

A、B、C：H≥1：80，甲、乙、丙副伤寒3、沙门菌胃肠炎或食物中毒：从腹泻患者粪便、呕吐物及残余食物中培养出非伤寒或副伤寒沙门菌4、伤寒携带者：从无症状患者粪便或胆汁中分离出伤寒沙门菌第六节耶尔森菌属

Yersinia法国学者耶尔森，1894年发现鼠疫杆菌（鼠疫巴斯德氏菌，又称鼠疫耶尔森菌）。日本的北里柴三郎也几乎同时在香港作出同一发现。鼠疫耶尔森菌的发现从公元6～19世纪发生过3次大流行哈尔滨1910年鼠疫事件卷走了6万余人性命的灾难。目前我国在青海和其他个别地区有少数散在病例。伍连德鼠疫耶尔森菌的流行情况2014年7月，酒泉玉门市发生一例鼠疫病例。鼠疫耶尔森菌的流行情况一、分类：11个菌种引起人类致病的有3种：鼠疫耶尔森菌(Y.pestis)、小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)、假结核耶尔森菌(Y.pseutuberculosis)。耶尔森菌属(Yersinia)鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)概述

鼠疫耶尔森菌（Y.pestis），俗称鼠疫杆菌，是鼠疫的病原菌。鼠疫是一种人兽共患的自然疫源性烈性传染病，人类鼠疫多为疫鼠的跳蚤叮咬而感染，是我国法定的甲类传染病。此菌引起的是啮齿动物中的自然疫源性疾病，传染性强，病死率高，易酿成大流行。此菌主要累及皮肤和淋巴结，其次为败血症、肺炎、脑膜炎。鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)传染源：患病的鼠类和人传播媒介：鼠蚤传染途径:

带菌鼠蚤的叮咬人与染疫动物（啮齿动物、黄鼠属、旱獭属）接触或与病人接触所致。鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)临床类型⑴腺鼠疫－嗜淋巴组织性→特征性淋巴腺肿局部淋巴结肿胀、坏死和脓肿。传播途径：鼠-蚤-人鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)⑵败血性鼠疫－最严重，可发展脑膜炎鼠疫，2-3天内死亡。⑶肺鼠疫－继发、原发。

传播途径：人-人呼吸道传播鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)少见的－皮肤鼠疫、肠鼠疫、脑膜炎鼠疫、眼鼠疫。鼠疫常常发展为外周血管坏死性损伤，皮肤变黑→黑死病鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)临床意义⒈致病因素⑴内毒素：引起典型病理生理变化鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)⑵鼠毒素可溶性蛋白抗原（Pst1抗原），剧毒，可制成类毒素、抗毒素。细胞裂解或自溶后释放。抑制心肌细胞线粒体的呼吸作用，引起不可逆休克及死亡。鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)⑶Fra1抗原（FI封套抗原）：（蛋白多糖复合物），荚膜抗原。抗吞噬作用,高度特异性→产生保护性抗体⑷VW表面抗原：V－蛋白质，W－类脂蛋白菌体表面抗原（毒力抗原）抗吞噬，由质粒介导，与本菌的毒力和侵袭力有关鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)⑸其它Pgm（色素形成能力）PI鼠疫耶尔森菌素C凝固酶、F纤维蛋白因子PU嘌呤依赖性都与鼠疫耶尔森菌的毒力有关，缺一不可。鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)鼠疫的临床症状主要表现为危重的全身中毒症状。发病急剧，体温突然上升至39℃～40℃。伴有头痛，呕吐，头晕，呼吸促迫等症状并很快陷入极度虚弱状态。腺鼠疫局部淋巴结肿大肺鼠疫表现出咳嗽、胸闷、呼吸困难颜面潮红，眼结膜充血，口唇、颜面及四肢皮肤呈青紫色，可咯出鲜红色血痰，

㈠生物学性状⒈形态结构：G-b、G-cb，两极浓染，有荚膜无芽胞，无鞭毛陈旧物：多形性鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)2.培养特性：兼性厌氧，耐低温，4～43℃生长普通培养基：可生长，但缓慢。血平板：典型→培养48小时后为柔软、粘稠、粗糙菌落。大菌落有一个锯齿样花边MAC：不分解乳糖小菌落鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)鼠疫耶尔森菌落有一个锯齿样花边鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)肉汤培养基：24小时----沉淀生长48小时----菌膜轻摇-------“钟乳石”状下垂鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)生化特性：25℃和37℃动力阴性IMVC为－＋－－分解葡萄糖产酸不产气赖氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸脱胺酶、脲酶、硫化氢均阴性。鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)（四）微生物检验安全规则①鼠疫耶尔森菌：生物危险二类病原体②生物安全级别：二级生物安全操作室③试验人员：穿隔离衣戴手套和防毒面具《人间传染的病原微生物名录》1.标本采集：血液→24h内取三份腺肿抽取液→注射1ml无菌生理盐水，立即抽取痰、咽拭子、皮肤拭子或刮取物、脑脊液。动物（死、活）跳蚤→采集前必须用消毒剂处理。鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)2.标本直接检查：⑴革兰、吉姆萨或瑞氏染色

临床标本：形态→两极浓染⑵荧光抗体染色：检测F1抗原⑶酶联免疫吸附：检测F1抗原F1抗原主要在37℃表达。冷冻30h以上及35℃以下培养→F1阴性鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)3.分离培养与鉴定⑴分离培养：血液、无菌体液：增菌（脑心浸液）或商品试剂→血平板痰、拭子(污染）：MAC、CIN鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)⑵鉴定：初步鉴定：菌落特征、菌体形态、肉汤生长特点及生化特征，结合临床流行病学资料综合分析判断最终鉴定：噬菌体裂解试验动物实验：小白鼠豚鼠免疫学方法：双份F1抗体滴度检测鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)一旦疑为本菌，立即向本地区疾控中心报告。并立即将菌株上送疾控中心鉴定!!预防：严格控制传染源管理患者、消灭啮齿动物切断传播途径：灭蚤鼠疫耶尔森菌(Yersinia

pestis)小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)小肠结肠炎耶尔森菌天然寄居在多种动物体内，如猪、鼠、家畜和兔等传播途径：通过污染食物和水源经粪-口途径或直接接触感染动物感染所致疾病⑴小肠炎、结肠炎回肠盲端炎症肠系膜淋巴结炎→假性阑尾炎：发热、呕吐、黏液便、水样便（血水便成人）及腹痛⑵菌血症⑶免疫性疾病：结节性红斑、反应性关节炎等小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)微生物特性⒈形态结构：G-b，无芽胞，无荚膜

22～25℃培养有鞭毛，翻滚螺旋运动。35℃无鞭毛。

2.培养特性：兼性厌氧菌，耐低温，4～40℃生长最适温度22－28℃。普通琼脂基：生长良好MAC－乳糖不发酵菌落小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)小肠结肠炎耶尔森菌菌落特征（MAC）

乳糖不发酵，无色，半透明小菌落小肠结肠炎耶尔森菌菌落特征（CIN琼脂平板)

粉红色菌落3.抗原成分O抗原：50种以上只有几种血清型与致病性有关我国主要为O9、O8、O5、O3小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)⒋生化特性：脲酶阳性、鸟氨酸脱羧酶阳性动力、V-P、ONPG：

22℃-25℃阳性，35℃阴性吲哚阴或阳性小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)㈢、微生物检验1、标本采集：粪便或食物、血液2、标本直接检查3、冷增菌：粪便标本可用5～7mlPBS4℃冷增菌2-3周。小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)4、分离培养与鉴定⑴分离培养：接种MAC、NYE或CIN平板⑵初步鉴定：嗜冷性典型生化：动力、V-P22-25℃阳性脲酶阳性、鸟氨酸脱羧酶阳性、

IND-/+、KIA→KA--或AA--小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica)5、血清学试验血清群：O3、O9、O5、O8O抗原的抗体滴度≥1:40H