基因工程的原理和技术_第1页
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基因工程的原理和技术第1页/共12页第2页/共12页基因工程的基本操作步骤1）获取目的基因2）形成重组DNA分子3）将重组DNA分子导入受体细胞4）筛选含有目的基因的受体细胞5）目的基因的表达第3页/共12页目的基因一、获得目的基因就是人们所需要的基因。1、化学方法合成2、利用PCR技术扩增目的基因3、从基因文库中获取目的基因获取方法第4页/共12页循环变性退火延伸PCR技术第5页/共12页基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。某生物体内全部DNA

许多DNA片段受体菌群体限制性核酸内切酶与载体连接导入某种生物某个时期的mRNAcDNA反转录受体菌群体与载体连接导入基因组文库部分基因文库（cDNA文库）第6页/共12页二、形成重组ＤＮＡ分子1）用一定的限制性核酸内切酶切割质粒，使其出现一个切口，露出粘性末端。2）用同一种限制性核酸内切酶切断目的基因，使其产生相同的粘性末端。3）用DNA连接酶将切下的目的基因片段和载体ＤＮＡ形成了一个重组DNA分子（重组质粒）第7页/共12页三、目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：

有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。第8页/共12页1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。

2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。

3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。三、目的基因导入受体细胞例如，用质粒作为载体，宿主细胞应该选择大肠杆菌。第9页/共12页四、筛选含有目的基因的受体细胞四环素抗性基因氨苄青霉素抗性基因第10页/共12页受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。五、目的基因的表达若不能表达

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