溶血性贫血的实验室检查

溶血性贫血的

实验室检查中南大学湘雅医院血液科谭达人一、Coombs试验（抗人球蛋白试验）由于是不完全抗体，不能产生凝集，如加入Coombs血清即可形成完全抗体。Coombs血清：（抗人球蛋白血清）：正常人血清注入兔体后产生的抗人球蛋白。目的：证实有无红细胞自身抗体，用于诊断AIHA。（一）直接试验1、直接反应阳性，最常见于AIHA（其他有青霉素诱发的溶贫、阵发性冷性Hb尿、血型不合的输血）2、正常人：（阴性）目的：测定吸附于红细胞表面的不完全抗体﹡致敏红细胞：表面附有相应抗原与不完全抗体结合之后（含IgG、C3、C4多见）原理：10%红细胞悬液（生理盐水洗涤后致敏 红细胞）红细胞产生凝集加入Coombs血清结果:（二）间接试验有过剩抗体时直接、间接均为阳性。AIHA分三型：C3型12%，IgG型24%，IgG+C3型60%。冷凝集素病为IgM抗体。

目的：测定血清中游离的不完全抗体Rho（D）阳性O型正常人红细胞孵育后成致敏红细胞原理：（半抗体）加Coombs血清产生凝集（补充的抗体）加病人血清结果：间接阳性，见于AIHA，正常人为阴性。二、Ham试验（酸性溶血试验）

PNH是造血干细胞水平发生了突变，导致红细胞膜出现获得性缺陷，影响了膜的结构，使之对正常血清中的补体敏感，发生溶血的程度与高度敏感的PNH红细胞所占的比例有关。目的：了解有无PNH补体敏感红细胞原理：PNH补体敏感红细胞可被正常人新鲜血清所溶解，但在酸性条件下（PH6.4～6.5）更为显著。

①要有补体存在②有酸性环境这个试验关键有两点名词解释灭活血清：正常血清在56℃下灭活补体，不能将PNH红细胞溶解，可作为对照管50%红细胞悬液：5ml全血→去纤维蛋白→用NS洗涤3次，洗涤最后离心10分钟，弃上清液，加等量NS。酸化溶血试验操作步骤反应物待测管对照管健康人血清（ml）0.50.5患者50%红细胞悬液(ml)0.025--健康人50%红细胞悬液(ml)--0.0250.25mol/LHCL0.5--上清液红色，按溶血程度分为++++++++++，本试验较热溶血、蔗糖、菊糖溶血试验更为敏感。结果:阳性见于PNH，有确诊意义。正常人 阴性，上清无色透明三、高铁Hb还原试验

正常时亚铁Hb经亚硝酸盐氧化成高铁Hb，当红细胞内G6-PD含量正常时，HbFe+++可以还原为Fe++；G6-PD缺乏时，HbFe+++则不能还原为Fe++，从而间接测知G6-PD含量是否缺乏。目的：该试验用来了解G-6PD活性，是一种间 接的方法红细胞对Glu的代谢有2个途径1、糖酵解2、已糖磷酸旁路

原理：G-6PD高铁HB还原酶G6PNADP还原型美兰高铁Hb（Fe3+）为暗棕色G6-PANADPH氧化型美兰氧合HB（Fe2+）红色结果：光电比色法，正常还原率＞75%，低于75%为异常，提示G6PD活力↓，74～31%为G-6PD缺乏的杂合子（红棕色），30%以下为显著缺陷的纯合子（为棕色—目测比色法）。四、红细胞渗透脆性试验 （简易半定量法）目的：了解红细胞的渗透脆性--即抵抗力。（当＞原体积的75%时红细胞破裂而发生溶血性）原理：

检测红细胞对不同浓度低渗盐水的抵抗力。红细胞在低渗盐水中，当水渗透其内部达到一定浓度时，红细胞发生膨胀破裂。根据不同浓度低渗盐水中红细胞溶血的情况，反映红细胞表面积与容积的比值。比值越小，红细胞抵抗力越小，渗透脆性增加；反之抵抗力增大。脆性增高：遗传球（椭）、AIHA伴球形细胞增多（在0.52%或0.72%开始溶血）脆性减低:各型地中海贫血、重度缺铁性贫血、血红蛋白C、D、E病和肝疾病等。

试验用各种不同浓度的低渗盐水，从0.2%开始，每次递增0.04%，共14次，最后为0.72%（14管）结果：

正常人开始溶血0.40～0.44%，完全溶血0.32～0.28%（患者与对照相差0.04%以上即为阳性）五、自身溶血试验（及纠正试验）原理：红细胞在（37℃）自己的血清中孵育48h，会逐渐发生溶血，遗传球及某些先天性非球形细胞性溶血性贫血这一现象较正常人发生早而明显。溶血的机理可能为：膜异常引起钠内流增加，钠泵功能增强，ATP消耗过多；或糖酵解途径酶缺乏引起ATP生成不足等原因导致溶血。称为自身溶血试验。在孵育时，加入葡萄糖或ATP作为纠正物，观察溶血能否纠正（纠正试验）。

目的：了解自发产生溶血的程度。1.正常人红细胞48小时（37℃孵育）不加Glu溶血应＜3.5%，加入应＜1.0%，加入ATP应＜0.8%2.遗传球细胞增多症的溶血，加入葡萄糖或ATP均可纠正。3.G-6PD缺乏症等戊糖旁路代谢缺陷的病人的溶血，加入葡萄糖可纠正。4.丙酮酸激酶缺乏的溶血，加葡萄糖不能纠正，加ATP可纠正。结果

六、血红蛋白电泳

*蛋白质的两性性质—是由氨基酸的NH+与COO-

决定的。

*等电点—调节水溶液的PH，能使蛋白质的NH+与COO-数目相等呈电中性，此时蛋白质无电泳，在水中电解度小，并发生沉淀。电泳：一个带电荷的离子或胶体颗粒在电场中可向一极移动， 此现象称为电泳。

原理：在一定的PH缓冲液中，缓冲液的PH大于Hb等电点，其带负电，在电场中向阳极移动；反之向阴极移动。由于各种Hb珠蛋白肽链结构不同，其等电点不同，电泳方向和速度亦不同，故可分离出不同的区带，对区带进行电泳扫描，可进行Hb定量分析。(-)A2SGAJH(+)CDFIE1.HbH增多是HbH病，为α-地中海贫血的一种；HbA2明显增高见于轻型β地中海贫血；HbF明显增高见于中重型β地中海贫血。电泳结果2.出现HbS，它是引起镰形细胞性贫血的异常Hb。3.正常值：醋纤法（PH8.6）HbA96%~98%，HbA21.0%~3.1%，HbF＜2%七、异丙醇试验不稳定Hb（UHb）：UHb已发现80余种，用通常的电泳方法不能将它们与HbA分离，需进行有关检查。

结果：

正常Hb不易沉淀，多在30’内不沉淀，属阴性；而UHb在5’时出现沉淀，20’开始出现绒毛状沉淀为阳性，阳性还见于HbH、HbE、HbF。原理：

不稳定Hb在非极性化合物异丙醇溶液中，其氢键结合减弱，Hb的稳定性降低，发生沉淀。目的：检查有无不稳定Hb存在，是其筛选试验。八、变性珠蛋白小体生成试验又称“红细胞包涵体”、“赫恩小体”、“Heinz小体”、“海因小体”原理：G-6PD缺乏及不稳定Hb病患者Hb易被氧化，其珠蛋白变性沉着于红细胞膜上。 其Hb氧化成Heinz小体（用结晶紫、甲紫或煌焦油兰染色，油镜观察）

抗凝血+乙酰苯肼37℃温育2～4h充分的氧化1.正常人占0～8%（平均11.9%），或应＜30%2.G6PD缺乏者4