实验五激素对血糖浓的影响及血糖浓的测定

实验五激素对血糖浓的影响及血糖浓的测定第1页/共28页实验性质：综合性

实验：激素对血糖浓度的影响

---------------邻甲苯胺法测血糖一、目的及要求

1．掌握血糖的测定原理及方法。2．掌握血糖的正常范围及意义。3．熟记胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响并解释其作用机制。第2页/共28页二、原理:

3H2O

冰乙酸，沸水浴1）葡萄糖5-羟甲基-2-呋喃甲醛2）5-羟甲基-2-呋喃甲醛+邻甲苯胺西夫氏碱（蓝绿色）3）同样处理标准管与样品管第3页/共28页三、试剂：（略）

四、操作步骤：

实验分组：2大组

/

实验室，即胰岛素组和肾上腺素组。

4或5小组

/大组，即胰前和胰后组或肾前和肾后组。第4页/共28页1、取预先饥饿14-16小时的正常家兔2只，称重。

2、从耳缘静脉采血：剪毛→二甲苯棉球擦拭→干棉球擦干→碘酒、酒精消毒→

7号针头穿刺取血→放入加有抗凝剂（草酸钠：2mg/ml）的烧杯中→摇匀。第5页/共28页3、1只家兔肌肉注射胰岛素（5U/Kg,规格：

5U/ml），另一只家兔皮下注射肾上腺素（0.5mg/只，规格：mg/ml）。

4、30分钟后，分别从耳缘静脉取血或心脏取血。第6页/共28页5、无蛋白血滤液的制备：

取短试管

4只，各加胰前、胰后、肾前、肾后等抗凝血0.4ml，用滤纸擦净粘附于吸管尖端外表面的血液，再加入

5%三氯醋酸3.6ml，边加边摇，充分混匀。待血液由鲜红色变为暗红色（或酱油色），3000rpm离心5min，上清即为无蛋白血滤液。第7页/共28页6、取试管6支，编号，按下表操作（单位：ml）

H2O

1.0

——

—

—

—

标准液

—

1.0

—

—

——

胰前无蛋白血滤液

——

1.0

—

—

—

胰后无蛋白血滤液

——

—

1.0

——

肾前无蛋白血滤液

———

—

1.0

—

肾后无蛋白血滤液

——

—

—

—

1.0

邻甲苯胺试剂

2.52.52.52.52.52.5

空白管标准管胰前管胰后管肾前管肾后管第8页/共28页

各管分别混匀，同时置于100℃水浴加热8分钟，流水冷却

。630nm进行比色，以空白管校正零点，读取各管光密度。第9页/共28页五、计算血糖(mg％)=

O.D测定/O.D标准×0.1×1×1/0.1×100

=O.D测定/O.D标准×100第10页/共28页六、注意事项:

1、采血及注射激素时，应尽量使家兔保持安静。2、由于血细胞不断从血浆摄取葡萄糖加以利用，因此,采血后及时进行检测，否则血糖浓度将逐渐降低。3、取血量要准确。第11页/共28页4、无溶血现象及高脂血症时，可以不制备血滤液，而用血清或血浆直接检测。5、邻甲苯胺是一种带微黄色的油状液体，久放后于光线或空气接触易氧化变质；如色泽变红，最后变棕黑色，此时必须重新蒸馏提纯。第12页/共28页6、硫脲是抗氧化剂，可使邻甲苯胺试剂稳定，减低空白管读数，并使反应化合物呈现纯兰绿色。七、临床意义：

正常情况下，血糖浓度在各种因素调解下，维持相对恒定；一旦调节发生紊乱，可导致高糖血症或低糖血症。第13页/共28页1、生理或暂时性高血糖：

餐后1～2小时，注射葡萄糖后，情绪紧张激动时，肾上腺素分泌增多或注射该药后，可出现暂时性高血糖。第14页/共28页2、病理性高血糖：

多见于胰岛素相对或绝对不足（糖尿病）。其它内分泌系统的疾病，如甲状腺功能亢进、垂体前叶功能亢进（巨人症或肢端肥大症）、肾上腺皮质功能亢进（库欣综合征）、嗜铬细胞瘤、胰岛-细胞瘤等。第15页/共28页3、生理性低血糖或暂时性低血糖：

见于饥饿或剧烈运动后，注射胰岛素或口服降糖药后（多见于药物反应或超量用药）。第16页/共28页4、病理性低血糖：

可见于胰岛细胞瘤引起的胰岛素分泌过多症，严重肝病由于肝的生血糖作用降低而使血糖来源减少，对抗胰岛素的激素分泌不足如垂体、肾上腺皮质或甲状腺功能减退等。第17页/共28页八、思考题：1、血糖的来源与去路有哪些？2、调节血糖的激素主要有哪些？其作用机制如何？3、在实验中应注意哪些问题？第18页/共28页九、实验报告：

10分

实验报告按医学论文格式书写，包括中文摘要（目的、方法、结果、结论四部分，2分）、材料（1分）、方法（2分）、结果（2分）、讨论（3分）和参考文献等部分。第19页/共28页电动离心机的使用：

离心机是利用离心力对混合液体进行分离沉淀的一种专用仪器。利用电动离心机可使混合液体中的悬浮微粒快速沉淀，借以分离各种物质成分。第20页/共28页按离心时转速的不同，离心机可分为：

离心机转速/分

普通（低速）4000rpm

高速20000rpm

超速70000rpm第21页/共28页低速离心机的使用：1、使用前先检查变速旋纽是否在“0”处，离心机套管底部需放有橡皮垫。2、选择大小合适的离心管（用小试管代替），待离心溶液盛量占管2/3体积为宜。第22页/共28页3、将盛有待离心溶液的两支离心管连同套管置台秤上，调节两边重量使之达到平衡。如不平衡，可调整离心管内容物量或加减离心管套管内水量。每次操作都必须严格遵守平衡的要求，否则离心管破裂，损伤离心机部件，甚至造成严重事故，应十分小心。

第23页/共28页4、平衡好的离心管及管套，按对称方位放到离心机插孔中。不用的离心套管取出，盖严离心机盖。第24页/共28页5、开动时，慢慢拨动旋钮使逐渐增加到所需的速度。当到达离心机所需的时间后，再调旋钮，进行逐渐减挡降速，最后将旋钮拨到“0”,待离心机自动停止后，才能打开离心机盖取出样品，不连续使用时拔下插头。第