p38MAPK抑制剂对重症胰腺炎大鼠急性肺损伤的作用机制,急诊医学论文

p38MAPK抑制剂对重症胰腺炎大鼠急性肺损伤的作用机制,急诊医学论文急性胰腺炎(acutepancreatitis,AP)是一种常见的急腹症,分为轻症急性胰腺炎(mildacutepancre-atitis,MAP)和重症急性胰腺炎(severeacutepancre-atitis,SAP)。华而不实轻症急性胰腺炎异常感觉和状态较轻,预后较好,死亡率低。而重症急性胰腺炎由于炎症扩大作用,常引起全身炎症反响综合征(systemicinflam-matoryreactivesyndrome,SIRS),危及到机体多个器官,病情凶险,进展迅速,病死率极高。华而不实急性肺损伤(acutelunginjury,ALI)是重症急性胰腺炎常见的并发症之一,也是患者早期死亡的主要原因,其发病机制尚未说明,所以当前仍无有效的特异性的治疗方式方法。而近年来研究显示p38MAPK信号转导通路是重症急性胰腺炎并发急性肺损伤的重要机制,所以本文通过实验研究讨论分析p38MAPK抑制剂对重症胰腺炎大鼠急性肺损伤的保卫作用,现将结果报道如下。1、资料与方式方法1.1一般资料选购哈尔滨医科大学动物实验中心雄性健康SPF级Sprague-Dawley大鼠60只,体重200~250g,平均体重(22020)g。所有动物于实验前12h禁食,不禁水,饲养环境为标准明暗周期。实验试剂主要有牛磺胆酸钠,p38MAPK抑制剂SB203580,均由美国Sigma公司提供。1.2实验方式方法1.2.1动物分组及模型建立采用随机数字表法将60只健康成年的雄性SD大鼠分为三组,A组为假手术组,B组为重症胰腺炎模型组,C组为重症胰腺炎模型加p38MAPK抑制剂SB203580组。A组动物开腹后进行胰胆管注射生理盐水,并将十二指肠和胰腺进行翻动。B组动物开腹后进行胰胆管逆行穿刺注射5%牛磺胆酸钠,建立重症急性胰腺炎模型。C组动物在进行造模前1h向所有动物体内注射p38MAPK抑制剂SB203580,剂量为1mLkg-1体重,然后同B组动物建立重症急性胰腺炎模型。1.2.2检测方式方法分别于模型建立后0.5、6、12h取动物的肺脏组织进行观察指标的检测。取肺组织进行HE染色切片制作(全部动物均未死亡,取材于动物麻醉下施行),光学显微镜下观察肺组织病变,并根据Hofbaue法以肺本质组织和空肺泡面积百分比对肺损伤进行病理学评分。取固定量肺组织先称量出组织的湿重,然后将组织置于烤箱中烘烤后,称量组织的干重,计算出肺组织湿干重比。采用紫外分光光度计检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)的活性。采用RT-PCR法检测肺组织中p38MAPKmRNA的表示出水平,GAPDH和p38MAPK上下游引物序列如下:GAPDH:F:5-TGAAGGTCG-GTGTCAACGGATTTGCC-3,R:5-CATGTAGGC-CATGAGGTCCACCAC-3,产物长度为999bp。p38MAPK:F:5-GTGTCGGTGATGTCAGATGG-3,R:5-CAGTATGCAGTCCAGCTCCA-3,产物长度为687bp。1.3统计学方式方法应用SPSS19.0软件进行数据分析。观测资料主要是计量数据,采用均数标准差(xs)表示。多组间的比拟为单因素方差分析,两两组间的比拟为成组t检验。总显著性水准=0.05。2、结果2.1大鼠肺组织损伤病理学检查三组大鼠肺组织损伤病理学评分结果见表1,得出随着时间的推移B组和C组大鼠肺组织损伤病理评分均逐步升高,P0.05,差异具有统计学意义;同时B组与A组相比,大鼠肺组织损伤病理评分于三个时间点都显著升高,P0.05,差异具有统计学意义;而C组与B组相比,大鼠肺组织损伤病理评分于三个时间点有所降低,P0.05,差异具有统计学意义。病理变化见图1~3。2.2大鼠肺组织湿干重检测三组大鼠肺组织湿干重比拟结果见表2,得出随着时间的推移B组大鼠肺组织湿干重比逐步升高,P0.05,差异具有统计学意义;同时得出B组大鼠肺组织湿干重比于三个时间点都显著升高于A组,P0.05,差异具有统计学意义;而C组大鼠肺组织湿干重比于三个时间点都低于B组,P0.05,差异具有统计学意义。2.3大鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性检测三组大鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性检测结果见表3,得出随着时间推移A组、B组及C组大鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性逐步升高,P0.05,差异具有统计学意义;同时得出B组大鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性于三个时间点都显著升高于A组,P0.05,差异具有统计学意义;而C组大鼠肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性于三个时间点都低于B组,P0.05,差异具有统计学意义。2.4大鼠肺组织p38MAPKmRNA的表示出水平检测三组大鼠肺组织p38MAPKmRNA的表示出水平检测结果见表4,得出随着时间推移A组、B组及C组大鼠肺组织p38MAPKmRNA的表示出水平呈现先上升再下降的变化趋势,P0.05,差异具有统计学意义;同时得出B组大鼠肺组织p38MAPKmRNA的表示出水平于三个时间点都显著升高于A组,P0.05,差异具有统计学意义;而C组大鼠肺组织p38MAPKmRNA的表示出水平于三个时间点都低于B组,P0.05,差异具有统计学意义。见图4和图5。3、讨论随着我们国家生活水平不断提高,人们的饮食习惯和构造发生了很大变化,也由此导致急性胰腺炎的发生率呈不断上升的趋势。急性胰腺炎中有约10%左右的患者为重症急性胰腺炎,其病情凶险,病死率较高,已严重威胁到患者的生命健康。重症急性胰腺炎的发展与患者全身的炎症反响密切相关。研究显示重症急性胰腺炎患者病程之所以进展迅速主要是由于患者体内的炎症介质被激活,并不断激活和扩增其他炎症介质,导致炎症反响被放大化,引起全身炎症反响综合征(SIRS)。而SIRS又是引起急性肺损伤以及全身多器官功能损伤的主要原因。所以对于控制重症急性胰腺炎的一个重要方向即是抑制体内的炎症反响。而当前所了解到的炎症介质已有30多种,华而不实肿瘤坏死因子TNF-被以为是主要作用因子,尤其对于早期炎症的发生起到重要作用。TNF-主要是由被激活的巨噬细胞产生,国内外有报道显示TNF-的基因表示出在急性重症胰腺炎大鼠模型中随着肺损伤程度的增加,其表示出水平不断升高,讲明TNF-是重症急性胰腺炎并发急性肺损伤的重要因素。而机体对于TNF-的调控,主要是通过p38MAPK信号转导通路进行调节的,研究表示清楚p38MAPK调节着TNF-的转录和翻译经过,直接影响着TNF-的合成水平。p38MAPK是一种细胞内丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是一类重要的信号转导酶,通过将细胞外信号转导至细胞核内,进而调控着基因的转录与翻译经过。p38MAPK尤其在机体的应激和炎症反响中具有重要的调控作用,其被磷酸化激活后,可导致细胞释放大量的炎性因子,并使之不断产生,进而导致机体炎症反响调控失衡,引起了炎症的级联瀑布效应。随着研究不断深切进入,现已证实可将p38MAPK信号转导通路作为重症急性胰腺炎并发急性肺损伤时的治疗靶点,所以p38MAPK抑制剂成为治疗的重要方向。SB203580即是一种p38MAPK抑制剂,属于吡啶异咪达唑类化合物,可在体内结合p38MAPK的非活化形式,同时与ATP的活性位点T106相结合,进而降低p38MAPK与ATP的结合能力,可阻断炎症反响时p38MAPK对巨噬细胞释放TNF-的调控,进而降低了炎症反响的发生。本文通过大鼠实验,研究发现经过重症急性胰腺炎造模后的大鼠与正常大鼠相比,其肺组织损伤病理评分、肺组织湿干重比、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性以及肺组织p38MAPKmRNA的表示出水平均显著升高,而给予SB203580的大鼠与重症急性胰腺炎的大鼠相比上述指标均有所下降,P0.05,讲明SB203580对炎症起到了抑制作用。综上所述,p38MAPK抑制剂能减少TNF-的释放,降低炎症反响,为临床上治疗重症急性胰腺炎并发急性肺损伤的提供新的方向。以下为参考文献:[1]徐化恩,张水军,张弓.P38丝裂原活化蛋白激酶抑制剂对大鼠重症急性胰腺炎的作用[J].中国实用医刊,2018,38(6):23-25.[2]吴彪,王春友.急性胰腺炎肠道屏障功能损伤时血浆内毒素和D-乳酸的变化[J].中国普通外科杂志,2018,18(3):224-227.[3]林葆,黄鹤光,陈志耀,等.重症急性胰腺炎大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶的表示出与肺毛细血管内皮屏障损伤[J].中国普外基础与临床杂志,2020,20(3):259-264.[4]BaiY,YaoHX,HuML,etal.Effectsofshenmaiinjectiononpul-monaryaquaporin1inratsfollowingtraumaticbraininjury[J].ChinMedJ,2018,124(3):457-460.[5]王锋,黄鹤光,陆逢春,等.胆胰管结扎法制作大鼠胰源性肺损伤模型[J].中国普外基础与临床杂志,2020,19(1):25-30.[6]刘伯毅,郑翔,刘培,等.转化生长因子-1在呼吸机相关肺损伤中的作用[J].安徽医药,2020,16(12):1749-1751.[7]马明生,伍火志,陈鑫,等.缺血后处理对再灌注损伤鼠肺IL-17和IL-8的影响[J].安徽医药,2020,16(6):752-754.[8]潘彩飞,祝胜美.异丙酚通过抑制p38激活下调氨处理的大鼠脑星形胶质细胞AQP4的表