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实验十一病毒的血清学实验第1页/共12页实验十一病毒的血清学实验操作：血凝实验血凝抑制实验第2页/共12页实验目的血凝试验：滴定病毒的血凝效价，采用一定的病毒量，通常采用4个血凝单位。血凝抑制试验：应用标准病毒液测定血清中的相应抗体或应用特异性抗体鉴定新分离的血凝性病毒。第3页/共12页0.2弃掉孔号12345678910生理盐水（ml）尿囊液（ml）0.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2病毒稀释度1∶101∶201∶401∶801∶1601∶3201∶6401∶12801∶2560对照补充液（ml）各0.2ml鸡红血球细胞悬液（ml）各0.4ml血凝试验（血凝效价的滴定)将有机玻璃板孔从1~10进行编号，从第1孔起至第10孔，每孔加生理盐水0.2ml。将尿囊液按下表进行稀释。自第10孔开始反方向向前每孔补充0.2ml生理盐水。(WHY?)自第10孔开始反方向向前每孔加入0.5%鸡红血球0.4ml，摇匀后放置室温45分钟第4页/共12页0.2弃掉孔号1234567血清对照病毒对照红细胞对照生理盐水（ml）抗血清（ml）0.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.2+0.20.20.4抗血清稀释度1∶101∶201∶401∶801∶1601∶3201∶6404个单位病毒液（ml）各0.2ml0.2ml鸡红血球细胞悬液（ml）各0.4ml血凝抑制试验从第1孔起至第9孔，每孔加生理盐水0.2ml，第10孔加0.4ml。抗血清按下表进行稀释，第8孔为血清对照。于第1孔至第7孔中各加入0.2ml4个血凝单位的病毒液，第9孔亦加入0.2ml病毒液作病毒对照。稍加震摇后，每孔加入0.5%鸡红细胞0.4ml，室温静置45分钟。第5页/共12页血凝试验原理血凝素（hemagglutininHA）：由病毒基因编码的糖蛋白刺突。与病毒吸附和传入宿主细胞有关。HA能与人或其它动物多种红细胞表面N－乙酰神经氨酸酶受体结合引起红细胞凝集。第6页/共12页第7页/共12页血凝试验结果判定效价判定：凝集特别显著：“＋＋＋＋”凝集现象次之：“＋＋＋”凝集清楚可见：“＋＋”稍显凝集者：“＋”血凝效价：呈“＋＋”凝集时的最高稀释度。此时的稀释度即为1个血凝单位。第8页/共12页血凝抑制试验原理病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所抑制，称血凝抑制。利用血凝素特异性抗体与病毒表面相应的HA相互作用，使病毒血凝现象抑制的试验称血凝抑制试验。第9页/共12页血凝原理血凝抑制原理第10页/共12页血凝抑制试验结果判定测定孔RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)

凝集（-）血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝病毒对照孔：凝集RBC对照孔：无自凝血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制使的最高血清稀

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