DB21T 3084-2018羽绒制品中鹅绒的鉴别PCR法和实时荧光PCR法

ICS9.080W59辽宁省地DB21方标准DBT3084—2018dentificationofGooseDownFiberinFeatherandDownProductsmethodandrealtimefluorescencePCRmethod辽宁省市场监督管理局发布前言中华人民共和国大连海关提出并归口。草单位：辽宁出入境检验检疫局检验检疫技术中心。R范性引用文件(包括所有的修改单)适用于本文件。GBT682分析实验室用水规格和试验方法定义3.1聚合酶链式反应polymerasechainreactionreaction4缩略语。bp：碱基对(basepair)Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数(cyclethreshold)DNA：脱氧核糖核酸(deoxyribonuleicacid)DTT二硫疏糖醇dNTP氧核苷酸三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphate)5原理试剂GBTZ组织和毛发提取试剂盒TaKaRaMiniBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0(TaKaRaV00%乙醇。g化乙锭溶液。DNALaddarMarker。LL.LPCR仪LtLV仪L.g冰箱：4℃~20℃LL机L干浴器或水浴锅L心机LL混合器LLLmL磁分离架LLtmL离心管，2.0mL离心管LLVPCRLL工作台8取样6制样GLLKProteinaseKµL的核糖核酸酶A(RNaseA，10mg/mL)，于56℃钟，去除杂质之后再进行后续操作。向裂解液中加入200µL缓冲液GB(BufferGB)和200µL100%SpinColumn)安置于收集管(CollectionTube)上，溶液移至核酸纯化柱中，12,000灭菌水或洗脱液(ElutionBuffer)，室温静置5分钟。.1引物见表1。bp鹅GoosecytbF5’-GCTACTAGCCATACACTAC-3’GoosecytbR5’-GTTGGATTGTCTACTGAGA-3’µg/µL)中浸泡30min。用凝胶成像系统观察、拍照、记录与分析电泳结果。bp鹅oosecytbF5’-GCTACTAGCCATACACTAC-3’oosecytbR5’-GTTGGATTGTCTACTGAGA-3’oosecytbP5’-(FAM)CGCAGACACTTCACTCGCCT(Eclipse)-3’定该样品检出鹅源性DNA成分；再次TA(资料性附录)组成(50次)PartI20℃保存PartII室温(15-25℃)保存LBWA×1WB×2elutionbuffer)离心管(SpinColumns)收集管(Collectiontubes)LRaCodeRRAL次)PremixExTaq(ProbeqPCR)(2×Conc.)×11.0mL×5支(资料性附录)序列鹅扩增产物序列(375bp)Attcctagccatgcactactcaccagacgcctcaaccgccttttcatcaatcgcccacatcactcgagacgtaaattatggctgagctaccttcacgccaatggcgcctcaatattctttatctgcctcttcctacacatcgggcgaggcctatattacggatcattaacctgaaacatcggcattatcctcctgcttgcaactatagcaacagccttcataggctatgtcctcccgtgaggccattctgaggggccacagtaattacaaacttactatccgccatcccatacat