加压毛细管电色谱仪的课件

加压毛细管电色谱仪的

原理及应用

CapillaryElectrochromatography

AdvancesandApplications分子生物研究中心CEC基本原理1微型分离技术2micro-HPLC和CE的结合3电渗流(EOF)为流动向的推动力4二维分离机理：液相色谱和电泳之和（分配和电泳淌度）用途:分析生物活性肽中草药多糖等的成分分析.建立中草药的指纹图谱.药品的质量监控.结合高电压系统可提高分析效率.并使图谱更清晰明了.图形分析:黑色代表普通HPLC的血清肽图谱.粉色代表加-10KV电压后血清肽图谱.黄色代表加+20KV电压后血清肽图谱.说明分析:加负电压后血清肽的出峰时间向后延迟,加正电压后出峰时间向前平移.表明血清肽合流动相后显负电性.样本在淌度和电压共同作用下谱图有变化.可以发现更多成分.同时提高分离效率.因为同一成分在流动相相同的情况下只是淌度不同.现在加了高电压.使以前需很长时间才能出现的峰现在只需很短时间就可出现.黑色代表普通HPLC的脾肽图谱.蓝色代表加-5KV电压后脾肽图谱.粉色代表加-10KV电压后脾肽图谱.黄色代表加-15KV电压后脾肽图谱.出峰时间从5.6分提前到了3.4分.效率几乎底稿50%.而且各主要成分均完美再现.没有漏掉主要的峰.TriSepTM-2100加压毛细管电色谱仪操作流程

准备工作：样品：过滤（0.45或0.22μm滤膜）流动相：过滤（0.45或0.22μm滤膜），脱气,(注意：超声脱气时，水太热了要换)仪器

主要包括四个模块：流体输送单元（SolventDeliveryModule）；微流控制单元（MicroFlowControlModule）；高压电源（HighVoltageModule）；检测器（DetectionModule）和数据采集软件。各部分分别开关、设置工作参数和程序。使用温度10-35℃，相对湿度不大于75%。可以进行毛细管微柱色谱、毛细管电色谱、加压毛细管电色谱、毛细管电泳分析。1．2输液方式

1．2．1单泵恒比例送液：使用两个溶剂输送单元中的一个，按比例配好流动相并超声脱气，设置流速，按PUMP开始输液1．2．2双泵恒比例送液：一种方式是分别在两个溶剂输送单元上分别设置流速，输送需要混合的A、B两种溶剂；另一种方法是设置主泵和从泵：FUNC/BACK滚动至SYS项，将主泵设为2，（从泵此项为1），此时主泵面板上的G.E.灯亮，在主泵面板上设置两种溶剂的比例CONC和总流速FLOW后，按主泵PUMP开始送液（注意，辅泵的流速是总流速乘梯度的比例后的值，此值最好不要小于0.005mL/min,否则辅泵流速不稳，影响梯度基线）1．2．3编辑梯度送液程序：在主泵上设置流速FLOW、基本输液比例CONC，编辑时间程序：

EDIT进入编辑状态，输入时间数值，滚动FUNC/BACK到BCNC输入B相的梯度比例数值，按ENTER确认。常用的参数如BCNC（A、B液比例）、FLOW（流速）、STOP（停止程序）…等。程序编好后，反复按ENTER查看，按DEL清除错误的程序步。按主泵RUN键运行时间程序,关掉RUN键，泵按梯度初始化条件走。

确认各溶剂系统互溶、缓冲溶液中溶质不会析出结晶！1．3系统排气或快速更换溶剂系统

把泵的吸滤头放进已经过滤并除气后的流动相中，加电时出口缓冲瓶中也装满相同的缓冲溶液。将Drain阀向OPEN方向（逆时针）旋转180度，按Purge键，约3分钟后自动停止，

也可自己调整Purge时间，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止。CloseDrain阀。把流速调成1ml/min，把四通处连接反压阀的peek螺丝松开，十分钟后再把流速调成0.05ml/min,把反压阀的peek螺丝拧紧。

3．高压电源

输出电压：0-30kV；电流：0-100μA；最大功率：1W

注意：当设置10kV以上电压时，应设置较长升压时间（如10秒），突然升压可导致破坏性后果；当环境潮湿时，不要设置超过10kV的电压。

3．1开机后，按MENU，以上下箭头选择分析模式：电色谱<CEC>或电泳<CE>，ENTER确认

3．2以上下左右箭头输入电压（最小单位100V）、升压时间和电场方向<+>/<->，ENTER确认。确认检测器和微流控制单元仓门关闭、背板电缆连接正确，按RUN执行

注意，改变电压输出极性时，还要改变后面板高压线的插孔位置，设置输出为正电压时，后面板高压线插在“HV+”孔，设置输出为负电压时，后面板高压线插在“HV-”孔，地线始终接在“HV0”孔不变；设置好输出电压极性，按ENTER键

确定

3．3<CE>模式下，还需输入电动进样的电压和时间。把进样条件和运行电泳的条件设好后，首先运行一下RUN，按RESET键断电后按INJECT，系统执行进样设置，完成后电压降至0。（每次改条件后都要先运行一下RUN后才能进样）

3．4RESET键：进样、升压时按下，电压降至0；分析完成，按此键退至上级菜单。

分析样品

1．确认各部分正确连接，开启电源，启动数据采集软件UnimicroTriSepWorkstation。设置参数及程序，平衡色谱柱2．设置工作站信号采集时间等，工作站工具栏绿色示意灯状态，准备采集信号3．当进样控制面板的LOAD灯亮时，用微量进样器进样，此时，样品被注入到进样阀的定量环中，定量环的体积是固定的2

l（本系统中见入毛细管柱内的样品量通常是10

L或20

L），与实际进样量无关，多余的样品会流到样品废液瓶中。但应注意，由于在进样孔与进样阀之间存在一个连接管，其体积约10L，因此，每当进一个新的样品时，第一次进样的进样量要大于40L，以确保样品置换了进样管路里所有的溶液到达进样阀的定量环，以后每次进样，进样量只须5L即可。要将样品注入色谱柱中时，按进样控制面板上的按键，经过约1s后，INJECT灯亮，表