免疫组化结果判断及常见问题的分析优秀课件

免疫组化结果判断及常见问题的分析第1页，共47页，2023年，2月20日，星期三第2页，共47页，2023年，2月20日，星期三肝脏：CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性，肝细胞呈不同层次阳性。第3页，共47页，2023年，2月20日，星期三

panCK（AE1/AE3）在肝脏理想的染色，采用了热修复。肝细胞膜、胆管强而清晰的着色。背景干净。第4页，共47页，2023年，2月20日，星期三一、特异性染色的判断1.特定的定位

细胞阳性——根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型或胞核型间质阳性——表现为细胞外着色，局限性或弥散性2.染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少3.排除人为造成的非特异性染色

切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。4.颗粒性显色

DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。第5页，共47页，2023年，2月20日，星期三免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER第6页，共47页，2023年，2月20日，星期三第7页，共47页，2023年，2月20日，星期三第8页，共47页，2023年，2月20日，星期三第9页，共47页，2023年，2月20日，星期三第10页，共47页，2023年，2月20日，星期三第11页，共47页，2023年，2月20日，星期三合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不合格的免疫组化染色切片

容易导致误判第12页，共47页，2023年，2月20日，星期三C-erbB-2优良中差第13页，共47页，2023年，2月20日，星期三4321ER第14页，共47页，2023年，2月20日，星期三子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR染色，修复良好

PR第15页，共47页，2023年，2月20日，星期三编号阳性片待检片阴性对照结论12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失误，抗体失效非特异性着色阳性片不含靶抗原待检片不含定位抗原待检片含定位抗原二、染色结果的判断第16页，共47页，2023年，2月20日，星期三PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM阳性强度20×10视野下，随机选取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。三、结果分析第17页，共47页，2023年，2月20日，星期三P53阳性细胞百分比计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）第18页，共47页，2023年，2月20日，星期三PCNABarnes法A：瘤细胞显色有无及深浅0（不着色）1（浅黄色）2（棕黄色）3（棕褐色）B：显色细胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）评分=A×B0分：阴性1~4分：弱阳性＞4分：强阳性第19页，共47页，2023年，2月20日，星期三胶原染色阳性面积百分比40×10视野，选取5个视野，计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。第20页，共47页，2023年，2月20日，星期三CD34Weidner法（MVD计数）孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。低倍镜下找到组织内密度最高区域。40×10视野下计数微血管数目。第21页，共47页，2023年，2月20日，星期三K-rasVEGF第22页，共47页，2023年，2月20日，星期三附：定量分析——图象处理系统

1、图象处理：利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。

第23页，共47页，2023年，2月20日，星期三2、图象处理系统组成图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出

第24页，共47页，2023年，2月20日，星期三

3、图象处理系统功能

几何形态学定量分析细胞核、浆的大小、面积、核浆比；细胞分布密度、个数；血管、腺体的面积、密度；间质的面积

免疫组织化学分析按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞DNA含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图

AgNOR分析颗粒分析：数目、大小、面积、比例

第25页，共47页，2023年，2月20日，星期三第26页，共47页，2023年，2月20日，星期三四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥第27页，共47页，2023年，2月20日，星期三内源性生物素—肾小管第28页，共47页，2023年，2月20日，星期三内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌第29页，共47页，2023年，2月20日，星期三蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色第30页，共47页，2023年，2月20日，星期三嗜酸性粒细胞中细胞色素显色第31页，共47页，2023年，2月20日，星期三吞噬细胞内

含铁血黄素

第32页，共47页，2023年，2月20日，星期三坏死组织着色：AE1/AE3第33页，共47页，2023年，2月20日，星期三坏死组织着色第34页，共47页，2023年，2月20日，星期三交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色第35页，共47页，2023年，2月20日，星期三黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色第36页，共47页，2023年，2月20日，星期三灶状着色：机械原因着色第37页，共47页，2023年，2月20日，星期三CyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色第38页，共47页，2023年，2月20日，星期三全片着色第39页，共47页，2023年，2月20日，星期三边缘着色第40页，共47页，2023年，2月20日，星期三“阴阳脸”着色第41页，共47页，2023年，2月20日，星期三气泡第42页，共47页，2023年，2月20日，星期三非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥非特异性着色及其对策第43页，共47页，2023年，2月20日，星期三无信号片CD30第44页，共47页，2023年，2月20日，星期三2.染色的假阴性及其对策染色假阴性原因对策组织处理不当（固定、浸蜡）改善条件，重取材一抗与二抗种属连接错误确定抗体种属无误抗体失效不得使用过期的试剂盒显色系统不相适配更换适配的显色系统操作不当，遗漏重要步骤严格遵守操作规程第45页，共47页，2023年，2月20日，星期三无色或浅色片MCL理想的CD5着色。所有的瘤细胞都着色很强。散在的T细胞着色比瘤细胞深。MCL的CD5染色不足(一抗浓度太低)。MCL瘤细胞几乎都没有着