第二人民医院ABO正定型和Rh血型鉴定

市第二人民医院ABO正定型和Rh血型鉴定

（微柱凝胶检测法）.原理ABO血型系统的红细胞遗传表型是根据每个人红细胞上是否存在A和/或B抗原以及血清中相应的抗体来决定的，将人分为四种血型：A型、B型、AB型和O型。红细胞上有A抗原的A型血清中有抗B，红细胞上有B抗原的B型血清中有抗A，红细胞上有A和B抗原的AB型血清中无抗A和抗B，红细胞上无A和B抗原的O型血清中有抗A和抗B。Rh血型系统的鉴定是根据是否存在D抗原来决定的。微柱凝胶检测法是凝胶分子筛技术和免疫学抗原抗体反应相结合的产物，通过调节凝胶（葡聚糖）的浓度，控制凝胶间隙大小，只允许游离红细胞通过，从而达到分离游离红细胞和凝集红细胞的目的。如果红细胞沉积在凝胶管底部，表明红细胞未发生凝集，即凝集实验阴性；如果红细胞聚集在凝胶上部或中部，表明红细胞发生凝集，即凝集实验阳性。.标本采集标本种类：新抽取的抗凝血标本要求：抗凝剂：EDTA（浓度15g/L）或枸椽酸钠（浓度32g/L）抗凝采血量：至少不低于5ml的静脉血（加入试管后注意于抗凝剂混匀）离心要求：转速必须大于3500转/分，时间必须大于15分钟.标本储存：待测标本在2-8℃下的保存时间为48小时.标本运输：室温保存.标本拒收标准：不可使用溶血或受污染，或者含有凝块的样品。.试剂试剂名称：DianaGelConfirm凝胶卡、DianaSol1号试剂试剂生产厂家：DiagnosticGrifols,S.A.（西班牙）试剂说明：每张DianaGelConfirm凝胶卡由8个微孔管组成（A-B-D-Ctrl-A-B-D-Ctrl），微孔管内含缓冲液浸泡的微粒筛，加上不同的试剂，试剂为：A:单克隆抗一B：单克隆抗一B（克A(克隆16243G2+16247E6)隆9621A8-）,DB：单克隆抗一B（克P3X290+P3X35+P3X61+P3X21223B10） ,质控孔（Ctrl）:无抗体的胶溶液微孔管做质控。.操作步骤将样品、DianaSol1号试剂和DianaGelConfirm凝胶卡达到室温；将新DianaGelConfirm凝胶卡离心；红细胞悬液的制备：用Diana1号试剂来配制2-3%的血红细胞稀释液（25Ml压积极红细胞加入1ml的Diana1号试剂中）；在相应的微孔（1-6微管）中分别加入25ml的2-3%的红细胞悬液；在DianaFuge离心机中离心9min；判读结果。.结果判断模式.临床意义：ABO、Rh血型鉴定不合出现溶血性输血反应。.操作性能为国际安全输血检查的推荐方法;操作简便方便;可节省样品红细胞和血浆；灵敏度高、特异性高、重复度好；客观性好，避免主观判读结果的影响；检测结果可较长时间保存；操作者更少接触血液标本。.超出范围结果处理红细胞自凝：冷凝集素增高是最为常见的原因。用37-40℃生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷凝集素，可获得可靠的正定型。正反定型结果不一致原因自身免疫性溶血性贫血引起的红细胞被自身抗体包被；红细胞A或B抗原的弱化；红细胞悬液浓度过浓或过淡；红细胞抗原位点过少或抗原性减弱；病人感染细菌或病毒后，细菌或病毒产生的酶使红细胞上掩蔽的T抗原暴露激活，由于正常人血浆中都含有抗T抗体，因此可于正常人血浆中产生凝集反应，正定型实验假阳性；严重感染的病人，其血浆中白细胞过多，堵塞凝胶筛间隙，影响红细胞的沉降，引起假阳性。12方法局限性：变质的或受到细菌等物污染的样品，试剂可能会带来错误的阴或阳性结果；因为储运不当的原因，有时会发现在微管的顶部存有小水珠或在胶泡，在使用类似的凝胶卡前先离心，消除这类问题，如果无法消除，请弃之不用；如果发现有管内胶量不足或干裂，请不要用之;如果所用的红血球的悬液浓度与建议使用的浓度不符，可能会引起错误结果；使用非原厂的稀释液来配制红血球悬液可能会导致不良结果；质