微生物的纯培养和显微技术

微生物的纯培养和显微技术第1页，共29页，2023年，2月20日，星期四第一节微生物的分离和纯培一、无菌技术无菌技术（aseptictechnique）：在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术（aseptictechnique），它是保证微生物学研究正常进行的关键。1.常用器具及其灭菌：试管、玻璃烧瓶、培养皿等2.接种操作

第2页，共29页，2023年，2月20日，星期四二、细菌的群体形态（一）在固体培养基上（内）的群体形态（二）在半固体培养基上（内）的群体形态（三）在液体培养基上（内）的群体形态第3页，共29页，2023年，2月20日，星期四（一）在固体培养基上（内）的群体形态菌落（clony，纯种细胞群或克隆（clone））：以母细胞为中心的一堆肉眼可见的，有一定形态、构造等特征的子细胞集团。菌苔（bacteriallawn）第4页，共29页，2023年，2月20日，星期四

不同性状的菌落一般细菌形成光滑形菌落；有鞭毛边缘不整齐、无鞭毛细菌的菌落边缘整齐有糖被细菌的菌落：大型、透明、蛋清状有芽孢细菌菌落：外观粗糙、“干燥”、不透明且表面多褶意义：帮助鉴定菌株第5页，共29页，2023年，2月20日，星期四（二）在半固体培养基上（内）的群体形态沿穿刺线生长－－无动力扩散生长－－有动力第6页，共29页，2023年，2月20日，星期四（三）在液体培养基上（内）的群体形态

菌膜生长浑浊生长沉淀生长第7页，共29页，2023年，2月20日，星期四三微生物的保藏技术传代培养保藏

常用菌株保藏。冷冻保藏

温度越低，效果越好；常用-70保藏，但液氮保藏（-196℃）长期保藏。干燥保藏

沙土管保藏—产孢子微生物（芽孢杆菌、放线菌）；冷冻真空保藏—长期保藏。第8页，共29页，2023年，2月20日，星期四第三节显微镜下的微生物

一、细菌和古生菌:

虽然从系统发育来看，细菌和古生菌是二种完全不同的生物类群，但它们的细胞结构却基本一致，同属原核生物（Prokaryote），在显微镜下的形态也十分类似。原核生物（prokaryotes）指一大类细胞核无核膜包裹，只存在称作核区（nuclearregion）的裸露

DNA的原始单细胞生物，包括真细菌（eubacteria）和古生菌（archaea）第9页，共29页，2023年，2月20日，星期四1细菌的形态和排列细菌（bacteria）：是一类细胞细短（直径约0.5um，长度约

0.5-5um）、结构简单、胞壁坚韧、多以二分裂方式繁殖和水生性较强的原核生物。细菌的基本形态：球状：球菌（coccus）杆状：杆菌（bacillus）螺旋状：螺旋菌（spirilla）第10页，共29页，2023年，2月20日，星期四细菌的基本形态球菌：单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌和葡萄球菌

球菌的种类:1.单球菌2.葡萄球菌3.双球菌

4.链球菌5.四联球菌6.八叠球菌

第11页，共29页，2023年，2月20日，星期四球菌的分裂方式第12页，共29页，2023年，2月20日，星期四杆菌：短杆（球杆）状、棒杆状、梭状、梭杆状、分支状、螺杆状、竹节状和弯月状等；第13页，共29页，2023年，2月20日，星期四螺旋菌：弧菌（vibrio）：螺旋不足一环；螺菌（spirillum）：满2－6环的小型坚硬的螺旋状细菌；螺旋体（spirochaeta）：螺旋周数多（超过

6环）、体长且柔软的螺旋状细菌。第14页，共29页，2023年，2月20日，星期四其它形态：柄杆菌（prosthecatebacteria）：细胞上有柄（stalk）、菌丝（hyphae）、附器（appendages）等细胞质伸出物，细胞呈杆状或梭状，并有特征性的细柄；球衣菌（Sphaerotilus）：能形成衣鞘（sheath），杆状的细胞呈链状排列在衣鞘内而成为丝状；支原体（Mycoplasma）：由于只有细胞膜，没有细胞壁，故细胞柔软，形态多变，具有高度多形性；还发现了细胞呈星形和方形的细菌。第15页，共29页，2023年，2月20日，星期四柄细菌的特征形态电镜照片a）双鞘不粘杆菌（Asticcacaulisbiprosthecum）；b）游离臂微菌（Ancalomicrobiumadetum）；c）普氏绿臂菌（Ancalochlorisperfilievii）；d）柄杆菌（Caulobactersp）

第16页，共29页，2023年，2月20日，星期四放线菌的形态构造孢子丝形态（链霉菌属Streptomyces为例）第17页，共29页，2023年，2月20日，星期四孢子形态：多形态---球、椭圆、杆、圆柱、瓜子、梭或半月状孢子颜色：多种，与表面纹饰相关孢子纹饰：光滑、皱、疣、刺（粗细、大小、长短和疏密之分）、发或鳞片状；链霉菌的孢子表面图第18页，共29页，2023年，2月20日，星期四2古生菌古生菌与细菌具有类似的个体形态；它们多生活于一些生存条件十分恶劣的极端环境中，例如高温、高盐、高酸等；

从太平洋海底“黑烟囱”火山口附近分离的“121株”能在121℃下生长；隐蔽热网菌（Pyrodictiumoccultum）它的最适生长温度为105℃。隐蔽热网菌：a）暗视野下的形态；b）电镜超薄切片。第19页，共29页，2023年，2月20日，星期四极端嗜盐古菌呈方形（方形细菌，square-shapedbacteria）热原体（Thermoplasma）没有细胞壁，其形态象细菌中的支原体一样呈多形性。第20页，共29页，2023年，2月20日，星期四3.原核生物的细胞大小度量单位：

细菌大小单位――um（微米，10－6m）；亚单位大小单位――nm（纳米，10－9m）大小：

球菌――葡萄球菌直径1um；杆菌――大肠杆菌0.5×2um。第21页，共29页，2023年，2月20日，星期四细菌的大小菌名直径或宽*长度（μm）肺炎球菌

酿脓链球菌

金黄色葡萄球菌

最大八叠球菌

大肠杆菌

普通变形杆菌

伤寒沙门氏菌

嗜酸乳细菌

枯草芽胞杆菌

炭疽芽胞杆菌

霍乱弧菌

迂回螺菌0.5～1

0.6～1

0.8～1

4～4.5

0.5*1～3

0.5～1*1～3

0.6～0.7*2～3

0.6～0.9*1.5～6

0.8～1.2*1.2～3

1～1.5*4～8

0.3～0.6*1～3

0.5～2*10～20

第22页，共29页，2023年，2月20日，星期四特殊大小细菌―――费氏刺尾鱼菌（Epulopisciumfishelsoni）:

1985年以来，红海和澳大利亚海域，刺尾鱼肠道中分离得到，长度200－500um

纳米比亚嗜硫株菌（Thiomargaritanamibiensis）:

1997年，德国科学家，非洲西部大陆架土壤中分离到，利用硫化氢，长度0.32-1.0mm

纳米细菌（nanobacteria）:1998年报道，芬兰学者，直径仅大肠杆菌的1/10(50nm,或0.05um)，可引起尿结石图中箭头所指的是直径在0.5mm的一个Thiomargaritanamibiensis菌体，其体积几乎与果蝇头部的大小相当。第23页，共29页，2023年，2月20日，星期四二、真菌

1.霉菌霉菌（mold）：一些“丝状真菌”的统称，不是分类学上的名词霉菌菌体均由分枝或不分枝的菌丝（hypha）构成菌丝体：许多菌丝交织在一起，称为菌丝体（mycelium）菌丝的形态：在光学显微镜下呈管状菌丝的大小：直径约为2~10um，比一般细菌和放线菌菌丝大几到几十倍。第24页，共29页，2023年，2月20日，星期四霉菌菌丝有两类：无隔膜菌丝－－整个菌丝为长管状单细胞，细胞质内含有多个核；其生长过程只表现为菌丝的延长和细胞核的裂殖增多以及细胞质的增加；如根霉、毛霉、犁头霉等。有隔膜菌丝－－

菌丝由横隔膜分隔成成串多细胞，每个细胞内含有一个或多个细胞核；如青霉菌、曲霉菌、白地霉等绝大多数霉菌菌丝均属此类。霉菌菌丝示意图：A无隔多核菌丝B有隔单核菌丝C有隔多核菌丝第25页，共29页，2023年，2月20日，星期四营养菌丝：部分菌丝伸入培养基内吸收养料，称为营养菌丝；气生菌丝：一部分则向空中生长，称为气生菌丝；繁殖菌丝：有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成繁殖菌丝。在固体培养基上：第26页，共29页，2023年，2月20日，星期四2.酵母菌酵母菌（yeast）：是一群单细胞的真核微生物。通常用于以芽殖或裂殖来进行无性繁殖的单细胞真菌，以与霉菌区分开极少数种可产生子囊孢子进行有性繁殖。排列：大多数酵母菌为单细胞，有些酵母菌细胞与其子代细胞连在一起成为链状，成为假丝酵母形态：一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬形大小：大小约为1~5×5~30um，最大可达100um。。第27页，共29页，2023年，2月20日，星期四A酿酒酵母（Saccharomycescerevisae）;B路德酵母（Saccharomycesludwigii）;C白地霉（