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文档简介
#/35酶,构建重组载体P’,基因表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因,由图可知,载体P上无启动子和终止子,无法表达MT基因。通过比较载体P和载体E上的酶切位点,选取二者都含有且位于MTcDNA的核苷酸序列两侧的XhoI和PstI对重组载体P′和载体E进行酶切,将切下的MT基因和载体E用T4连接酶进行连接,将得到的混合物导入大肠杆菌,大肠杆菌需用Ca2+处理,让大肠杆菌处于感受态。故答案为:EcoRV;T4DNA;启动子;终止子;XhoI和PstI;钙。(3)成功构建能较强吸附废水中重金属的MT工程菌需要通过对工程菌进行分子水平检测和个体水平检测,由图可知,已对MT基因在工程菌的表达量进行了检测,即分子水平检测,还缺少个体检测,即对MT工程菌吸附重金属的能力的鉴定。故答案为:尚未在个体生物学水平上对MT工程菌吸附重金属的能力进行鉴定。【分析】1、基因工程技术的基本步骤:(1)目的基因的获取:方法有从基因文库中获取(基因组文库包含某种生物所有的基因,部分基因文库包含某种生物的部分基因,如:CDNA文库)、利用PCR技术扩增和人工合成。(2)基因表达载体的构建:基因表达载体的构建:①过程:用同一种限制酶切割目的基因和运载体,再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子。②目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用。③基因表达载体的组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因。a、启动子在基因的首段,它是RNA聚合酶的结合位点,能控制着转录的开始;b、终止子在基因的尾端,它控制着转录的结束;c、标记基因便于目的基因的鉴定和筛选。(3)将目的基因导入受体细胞□根据受体细胞不同,导入的方法也不一样。①将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法;②将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法;③将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法(Ca2+处理法)。(4)目的基因的检测与鉴定□分子水平上的检测:①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术;②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术;③检测目的基因是否翻译成蛋白质-抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。2、基因工程的基本工具(1)“分子手术刀”-限制性核酸内切酶(限制酶)①来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。②功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开,因此具有专一性。③结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。(2)“分子缝合针”-DNA连接酶①两种DNA连接酶(E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较:a、相同点:都缝合磷酸二酯键。b、区别:E.coliDNA连接酶来源于大肠杆菌,只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶来源于T4噬菌体,可用于连接粘性末端和平末端,但连接效率较低。②与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。(3)“分子运输车”-载体①载体具备的条件:a、能在受体细胞中复制并稳定保存。b、具有一至多个限制酶切点,供外源DNA片段插入。c、具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。②最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分。③其它载体:噬菌体的衍生物、动植物病毒。3、PCR技术(1)概念:PCR全称为聚合酶链式反应,是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。(2)原理:DNA复制。(3)前提:要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一对引物(4)条件:模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚台酶(T叫酶)。(5)过程:①高温变性:DNA解旋过程;②低温复性:引物结合到互补链DNA上;③中温延伸:合成子链。PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶,高温条件下氢键可自动解开。试题分析部分1、试卷总体分布分析总分:100分分值分布客观题(占比)40.0(40.0%)主观题(占比)60.0(60.0%)题量分布客观题(占比)16(76.2%)主观题(占比)5(23.8%)2、试卷题量分布分析大题题型题目量(占比)分值(占比)非选择题:本题共5小题,共60分5(23.8%)60.0(60.0%)单项选择题:本题共16小题,其中,1~12小题,每题2分;13~16小题,每题4分,共40分。在每小题给出的四个选项中,只有一项是最符合题目要求的。16(76.2%)40.0(40.0%)3、试卷难度结构分析序号难易度占比1普通(90.5%)2容易(4.8%)3困难(4.8%)4、试卷知识点分析
序号知识点(认知水平)分值(占比)对应题号1动物细胞培养技术13.0(13.0%)202物种的概念与形成2.0(2.0%)53生长素的作用及其作用的两重性4.0(4.0%)144生态系统的能量流动2.0(2.0%)65遗传信息的翻译2.0(2.0%)36非特异性免疫4.0(4.0%)157原核细胞和真核细胞的形态和结构的异同2.0(2.0%)18稳态的生理意义2.0(2.0%)99中心法则及其发展2.0(2.0%)310影响光合作用的环境因素14.0(14.0%)8,1711有氧呼吸的过程和意义2.0(2.0%)912自然选择与适应4.0(4.0%)5,813其他植物激素的种类和作用4.0(4.0%)1614免疫功能异常4.0(4.0%)1515探究酵母菌的呼吸方式2.0(2.0%)716受精作用4.0(4.0%)1317现代生物进化理论的主要内容2.0(2.0%)518生态系统的物质循环2.0(2.0%)619生物膜的探索历程2.0(2.0%)420减数第一、二次分裂过程中染色体的行为变化2.0(2.0%)1221稳态的调节机制13.0(13.0%)2022血糖平衡调节2.0(2.0%)223ATP与ADP相互转化的过程12.0(12.0%)1724基因突变的特点及意义4.0(4.0%)1625遗传信息的转录2.0(2.0%)326生态系统中的信息传递12.0(12.0%)6,1827激素与内分泌系统2.0(2.0%)428光合作用的发现史2.0(2.0%)429免疫系统的结构与功能4.0(4.0%)1530植物生长素的发现和作用2.0(2.0%)831植物体细胞杂交的过程及应用2.0(2.0%)1132PCR技术的基本操作和应用12.0(12.0%)2133基因频率的概念与变化2.0(2.0%)534基因工程的操作程序(详细)12.0(12.0%)2135精子和卵细胞形成过程的异同2.0(2.0%)12
36杂交育种13.0(13.0%)1937影响细胞呼吸的因素12.0(12.0%)1738基因工程的基本工具(详细)12.0(12.0%)2139种群的特征2.0(2.0%)1040基因的自由组合规律的实质及应用15.0(15.0%)12,1941人类遗传病的类型及危害4.0(4.0%)1342生长素的产生、分布和运输情况4.0(4.0%)1443酶的相关综合12.0(12.0%)1744DNA分子的复制
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