细胞培养小分子药物配制方法解析

———细胞培养小分子药物配制方法解析

科研实验中我们经常需要配制各种浓度的试剂。例如细胞实验一般需要加入小分子激动剂/抑制剂；分子转化实验一般会加入抗生素；免疫实验需要加入免疫刺激物/免疫佐剂等。这些昂贵的试剂浓度一旦计算错误，不仅挑灯夜战得来的数据毁于一旦，早日发文的愿望也随之破灭，可谓一失足成千古恨。今天小爱就为大家解决这一难题，让我们学会快速换算试剂浓度，摆脱科研失误。

案例一抑制剂储存液配制我们买来的小分子抑制剂一般是冻干粉，需要把它配制成溶液。首先，我们应该知道药物的分子量、溶解度以及规格。如果是毫克级小包装，一般不需要称量分装，直接在原瓶中溶解配成储存液。

以ROCK抑制剂Y-27632为例,该药物推荐溶剂DMSO，同时，最大只能配成129.38mM的储存液。这一点非常重要。有些人没有注意药物溶解性，直接在非水溶性药物中加入PBS配置，结果药物不溶，"损失惨重'。假如我们需要配置10mM储存液，计算公式如下：

质量（mg）=浓度（mM）x体积（L）x分子量（1）

5（mg）=10（mM）x?（L）x247.34即向含5mgY-27632的原瓶中加入2.02mLDMSO，即可配制成10mM溶液。（注：此处要预估原瓶的容量，如果原瓶容量小于2mL，应考虑配置更大浓度的储存液，如20mM，加入1.01mLDMSO）。

此外，我们也会经常遇到质量浓度和摩尔浓度单位转换，同样以10mMY-27632为例：

10mM=10mmol/L，化合物分子量为247.34，即247.34g/mol=247.34mg/mmol

10mmol/Lx247.34mg/mmol=2473.4mg/L=2.4734mg/mL

即10mMY-27632溶液相当于2.4734mg/mL浓度快速换算法则：

1）mM转换mg/mL，摩尔浓度数值乘以分子量再除以1000；

2）mg/mL转换mM，质量浓度数值除以分子量再乘以1000。

案例二抑制剂储存液稀释我们买来抑制剂的冻干粉，配制储存液的浓度为10mM，如果需要使用终浓度为25uM进行细胞实验，需要加入多少抑制剂储存液呢？记住下面这个稀释公式就可以了：

起始浓度x起始体积=最终浓度x最终体积

C1（mM）xV1（mL）=C2（mM）xV2（mL）（2）

首先，注意单位，我们假设最终体积为2mL，代入公式：

10（mM）xV1（mL）=0.025（mM）x2（mL）

即我们需要吸取5uL的储存液进行实验操作。

案例三百分比浓度换算我们在使用二硫苏糖醇(DTT)做实验时，会遇到这样的问题：已发表的文献中使用0.1%的DTT溶液，而你购买的DTT为1mol/L的储存液，那么这该如何换算呢？请听小爱为您解答：

DTT的分子量为154，即154g/mol，储存液换算成质量浓度C1为

154g/molx1mol/L=154g/L

假设需配制1L的0.1%DTT溶液，即V2=1L=1000mL

0.1%DTT溶液为0.1g/100mL=1g/1000mL=1g/L，即C2=1g/L

再使用公式（2）C1xV1=C2xV2可得：

154（g/L）xV1（L）=1（g/L）x1（L）V1=6.5mL，即吸取6.5mL1mol/L的DTT储存液，加入993.5mL稀释液中即可获得0.1%的DTT溶液。

如果我们购买的是固体二硫苏糖醇，配制0.1%的DTT溶液方法如下：精确称取1g二硫苏糖醇，用水定容至1000mL即可。DL-二硫苏糖醇科普

DL-二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol，DTT)具有很强的还原性，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。DTT有抗氧化作用，它能保护酶分子上的还原性基团，维持还原性环境，稳定酶的活性。DTT中还含有一定RNA酶抑制剂，具有抑制RNA酶活性的作用。具有巯基乙醇相似的作用，但DTT的刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。用作蛋白质巯基保护剂和蛋白质二硫键的裂解和顺序分析。DL-二硫苏糖醇应用：

※作为牛奶中主要过敏原s1-酪蛋白的还原和烷基化反应物之一；

※作为精子去膜和再激活培养基的一个组分；

※因硫醇可有效保护生物催