产淀粉酶芽孢杆菌的筛选与鉴定

2011届本科毕业论文（设计）产淀粉酶芽孢杆菌的筛选与鉴定姓名：系 别：—生命科学学院 专 业：―生物技术10-1―学 号： 100914051指导教师：2012年10月31日产淀粉酶芽孢杆菌的筛选1实验意义用于后期发酵。从环境中采集样品并从中分离纯化出能产生淀粉酶的芽孢杆菌，用于后期发酵。2实验器材2.1土样□□□□□□□□ 5-8cm□□□□,□□□□□2.2培养基的配方：筛选培养基：淀粉10.0g,酵母膏 2.50g,蛋白胨 5g,Na2HPO42.50g,MgSO4•7H2O0.05g,NaCl0.05g,琼脂10.0g,水500mL,pH7.0□7.42.3器材：40个培养皿、酒精灯、接种环、 14个试管、5个三角瓶（250ml）、涂布棒、移液管、恒温水浴锅、恒温培养箱、高压灭菌锅、超净工作台2.4试剂淀粉酶活力测定：碘液革兰氏染色：卢戈氏碘液、 95%乙醇、香柏油、乙醇乙醚3实验步骤培养基的制备及其仪器的灭菌量取500ml水,按培养基配方比例依次准确地称取淀粉（先将淀粉用水搅成糊状） 、酵母膏、蛋白胨、 NaCl放入烧杯中,加少量水熔解 ,再加入琼脂加热溶化, 不行搅拌, 最后补充水分, 分装入试管内或三角烧瓶内, 加塞包扎。□□□□□□□□ 3ml,再和剩余培养基、平板、口液管用报纸包扎好，于121℃, 30分钟高压蒸汽灭菌。倒平板将灭菌的培养基冷至 50℃左右,在超净工作台上,试管棉塞端搁在玻棒上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 三角瓶中的培养基倒平板, 约10ml,□□□□□4.1产淀粉酶菌株的分离、纯化41.1采集土壤样本：用塑料袋在预处理处取样4.1.2稀释称取土样 5g,放入口有45ml□□□□□□□, □□□□□□□□□□□□□,摇约10分钟，制成土壤悬浮液。然后将菌悬液置于 80℃水浴锅中， 20min。用一只无菌吸管吸取 0.5ml土壤悬浮液加入盛有 4.5ml含有无菌水的试管中充分混匀，此为 10-1稀释液，依此稀释 10-2、10-3、10-4、10-5几种稀释度的土壤溶液，分别编号为 1、2、3、4、5。初步筛选用稀释样品的不同吸管分别依次从 10-5、10-4、10-3样品稀释液中，吸取0.2mL于冷却凝固的平板上（每个梯度重复两次） ，用涂布棒涂抹均匀。记好编号。倒置于 37℃温箱中培养 24小时。培养24小时后，取出平板，挑取 6株菌落（对光观察菌落旁有小透明圈或表面光滑的菌落） ，分别为1、2、3、4、5、6，进行三区划线培养 24h。□□□□□□□□□□□ 1-2ml□□,□□□□□□,□□□□□□□□,□菌落周围有透明圈，说明该菌能产生淀粉酶使其水解。记下菌株号 1、2、3、6。观察透明圈一号菌株最大。分离纯化□□□□□□□□□□□□□□□□□□,□□□□□□□养24h,并保存。□□□□□□□□,□□□□□□,□□□□□ 3□□□□□□□,□□□□□□,□□□□□□□□ ,123□□□□□□, 146□□□□□□,□□□3次，培养 24h，48h、60h。将上述不同时段平板中 3种不同单菌落挑取，进行卢戈碘液染色观察其形态和芽孢。4.3.3.1涂片：用牙签沾取少量菌体，涂在洗净的载玻片上4.3.3.2染色：滴一滴卢戈碘液于菌体上，染色一分钟，在水龙头下慢慢冲洗染液。4.3.33镜检：先用低倍观察，再用油镜滴加香柏油观察染色结果。菌体周围为紫色，内部有小部分无色，为芽孢。最后用乙醚乙酯擦净镜头。观察结果：24h菌体较小，基本无芽孢。 48h后观察菌体形态较大，可以看清有芽孢的 1和3号。60h后染色观察，菌体变大了。 1和3及4号可见芽孢。4.4高活力淀粉酶菌株的筛选：每染过一次后， 就在菌落的周围滴加碘液， 用尺子量取淀粉水解圈直径数据如下：1 2 3 4 6 1

24h48h60h10mm 无 12mm 5mm 无 无无 8mm 14mm 12mm 10mm 19mm无 无 17mm 11mm 13mm 22mm数据分析：“无”可能