染色体标本制作与观察实验报告

【实验题目】【实验目的】【实验材料与用品】胶头滴管、离心管、离【实验原理】一、制作染色体标本的先决条件细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药细胞分裂(PHA)染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。应用。染色体特征：数目、长度(绝对长度、相对长度)、着丝粒位置(M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析体的四个参数：以粒指数=(断臂长度)/(染色体全长)*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位④染色体臂数(NF)，根据着丝粒的位置来确定。作原理小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织(由于分裂活动旺盛，睾丸也可)利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但基本程序并不复杂。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得仙素作为有丝分裂的抑制剂，将其注入到小鼠腹腔中，可以阻止分裂细胞纺锤体的形成。渗、固定、制片染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可了解染色体的特征(形态、大小、数目)——绘制染色体组型图②遗传病的诊断和研究：三体综合征(含三条21号染色体)、卵巢退化症(含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体)、睾丸退化症(含47条染色体，比正常人多一条XY以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期HA2)秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，大量细胞停止在分裂中期3)低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间距拉大，易于分散开4)空气干燥：使细胞和染色体展开体内的组蛋白来讲，变性后硬度增加，保持了染色体的即时形态，对细胞膜蛋白来讲，【实验步骤】本制作步骤丸用生理盐水(%NaCl溶液)洗去血污。KCl溶液至4mL。(4)37℃静置30min，低渗处理。rmin。2mL甲醇.冰醋酸固定液(3:1)，并用吸管至管底吹气，轻轻打(9)取去洁净的低温预冷载片，取出后立即用吸好细胞悬液的滴管在距载玻片10-15cm的(10)用滤纸擦去载片上的多余液体，空气干燥。Giemsa，细水流反面冲洗载玻片以洗去多余染液，自然晾(12)镜检。低倍镜下寻找分散良好，染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观察染色体【实验结果与分析】1)在制备细胞悬液过程中有染色体的丢失。如用吸管吹散细胞时用力过大造成细使得染色体弥散在溶液中，在随后的离心中将会丢失。2)在距离载玻片一定高度滴片时因高度过高，使得染色体过于分散而导致丢失。3)滴完片在敲打载玻片的过程中导致染色体的丢失。4)染色时，由于在染液中染了30min，部分染色体可能会随染液丢失。1)低渗处理过程。低渗溶液的量、处理时间均与细胞的数量有关。低渗过度，细胞会2)离心速度以及离心时间也能影响染色体标本的制备。离心速度过大或离心时间过长,破裂；反之,离心速度过小或离心时间过短,则细胞沉降不下来,则会引起3)固定液要随用随配。固定彻底后再打散细胞团块，否则细胞容易破碎，染色体分散4)用吸管吹散细胞时用力必须尽量轻柔。用力过大则会造成细胞破裂，而染色体也会。5)载玻片要预冷。拿出预先冰好的载玻片后要立即滴加细胞悬液，这就需要在拿载玻面原因。首先，如果在剪碎组织时没有剪好，则会导致细胞匀浆中含有大量细胞团，由匀，则会导致细胞聚集在一起，敲细胞时很难敲碎，同样观察不到理想的效果；如果吹高度不够，细胞分散不好，也很能破碎，染色体也就不能很好地展开。【注意事项】1、注射秋水仙素：应选择腹腔注射，如果观察到小鼠被注射后皮肤隆起，则表明注射到皮下，应重新注射；如果在拔出针时观察到有血珠溢出，则是因为注射时损伤了部分器官或血管，秋水仙素会随血液传递到全身，其传递速度会加快，其死亡时间可能小于死亡时间变慢。因此应根据具体实验，适当调整注射时间秋水仙素的作用发挥则小心