超氧化物歧化酶SOD的生产-林志豪课件

超氧化物歧化酶（SOD）的生产目录一.SOD的概况二.SOD的运用三.SOD的生产四.SOD使用及生产时的注意事项五.注意事项一.SOD的概况1.超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶，是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一。SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内6性极强的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)会立即将其分解为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧链条。2.SOD的分类按其结合的金属离子可分为Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三种二.SOD的运用1．药物类，主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关节炎、慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、肿瘤患者以及放射性治疗炎症病患者；2．用于生化制药，作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床和科研上，具有极强的抗衰老，抗肿瘤、调节人体内分泌系统作用；3．用于化妆品类，可添加在化妆品中，具有抗氧化抗腐蚀的优良性能。以SOD为主要成份的产品风靡世界，引发了化妆品历史上的一场革命，使人类永葆青春美丽梦想成真；4.用作保健食品、饮料、如SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常畅销!在饮料、糖果、糕点等食品中加入SOD既可利用其抗腐蚀性延长保质期，又可调节人体内分泌系统。

SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。全球118位科学家发表联合声明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。体内的SOD活性越高，寿命就越长。三.SOD的生产1.SOD酶的提取

称取5克大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞

后，加入pH7.8,0.05mol/L的磷酸缓冲液

（pH7.8）15ml，继续研磨20min,使SOD酶充分

溶解到缓冲液中，然后6000r/min冰冻离心

15min，放弃沉淀，取上清液。

2.去除杂蛋白

上清液中加入0.25倍体积的氯仿——乙醇混合液

搅拌15min,6000r/min离心15min，放弃沉淀，

得到的上清液即是粗酶液

3.SOD酶的沉淀分离

粗酶液在搅拌下缓慢加入固体硫酸铵至饱和浓

度60%，持续搅拌15min，6000r/min离心

15min，得到SOD酶沉淀4.

将沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸缓冲液

5mL中，然后6000r/min离心15min，放弃沉

淀，取上清液，用凝胶sephacylS-200进行纯

化，然后超滤浓缩。5.

用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含量6.

将浓缩冷冻干燥后即得成品。

仪器

紫外分光光度计、pH计,离心机试剂

⑴0.05mol/L连苯三酚溶液：称取3.15g连苯三酚用

0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至500ml

⑵pH=8.3Tris-HCl缓冲溶液

①0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液:

NH2C(CH2OH)3121.14

取12.114g,溶解，定容至100ml

②0.1mol/L盐酸:取8.6(9)ml浓盐酸，稀释至

1000ml

③50毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶

液

19.9_毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100

毫升。

(保存温度:常温密封避光保存)

冲液，迅速摇匀倒入光径1cm的比色杯中，在325nm波长下于恒温池中每隔30s测A值一次计算线形范围内，每1minA的增值，此即连苯三酚的自氧化速率，要求自氧化速率控制在0.07OD/min3.酶活测定测定方法与测连苯三酚自氧化速率相同，取1.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入3ml酶液，加入10连苯三酚液，迅速摇匀空白：取1.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入3ml酶液，加入10缓冲液，迅速摇匀计算加酶后连苯三酚自氧化速率

4.结果计算样品酶活单位表示，SOD酶活单位（U）/g鲜重样品酶活单位=式中——酶样品在325nm处每分钟光密度变化值V——反应液体积n——酶液稀释倍数（若酶液足够多，可不稀释即n为1）五.注意事项1.SOD的安全性大量试验和临床应用表明，无论何种给药方式，除罕见的超敏反应外，SOD对人体无毒性。虽然SOD是Mr在30000以上的蛋白质，但却未发现具有抗原性，其原因也正在进一