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文档简介

吲哚乙酸氧化酶活力的测定P144熟悉运用比色法测定吲哚乙酸氧化酶活力的方法，并掌握测定酶活力的基本要求。实验目的实验原理吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活力。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平起着重要的作用，从而影响植物的生长。酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。IAA+FeCl3→红色螯合物②处理：在试管中加入：MnCl21ml+2，4-二氯酚1ml+IAA2ml+酶液1ml+磷酸缓冲液5ml

对照：在试管中加入：MnCl21ml+2,4-二氯酚1ml+IAA2ml+磷酸缓冲液6ml①称取1g下胚轴，置于研钵中，加入预冷的磷酸缓冲液(pH=6.1)1ml，研磨成匀浆，再用9ml分2次冲洗，总体积为10ml。离心4000rpm10min，所得的上清夜即为粗酶液。IAA含量的测定方法步骤标准曲线的绘制。IAA氧化酶需要两个辅助因子：一元酚和二价离子Mn计算时间(h)IAA氧化酶活力=(μg·IAA/h·ml)对照—处理(μg/ml)

×10保温：30℃温箱中30min；显色：三支试管中分别加入处理液、对照液、蒸馏水各2ml后，再分别加入试剂A8ml，摇匀，40℃黑暗处30min(15-20min)；用分光光度计在530nm波长处测A值；查标准曲线；简述IAA氧化酶活力测定的原理。制备酶液时，为何加入pH6.1的磷酸缓冲液。酶促反应时，为何要加入MnCl2和2，4-二氯酚。比色时，为何要选在530nm波长处？现有黄豆芽、绿豆芽两种材料，测定黄豆芽的吸光度值为A1，绿豆芽的吸光度值为A2，且A1>A2，试比较这两种材料下胚轴中哪个IAA氧化酶活力大，为什么？思考题结果总结培养基接种数(瓶*片）最早出愈时间（d）出愈率（%）污染率（%）愈伤生长情况MS+2,4-D1.013*31897.437.69

切口处较多出愈，黄色颗粒状，偶见灰白色愈伤

MS+2,4-D1.0+6-BA0.412*3171000切口及与培养基接触处生长愈伤，黄色透明，较湿润

MS+2,4-D1.0+6-BA1.012*3161000切口及与培养基接触处生长愈伤，黄白色，湿润

不同培养基对怀地黄愈伤组织生长情况的影响结果总结I型愈伤组织Ⅱ型愈伤组织Ⅲ型愈伤组织培养基（mg/L)接种数（瓶*株）出芽时间(d)平均叶片数（个/株）增值系数MS+NAA0.0213*32022MS+NAA0.02+6-BA0.

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