动物细胞融合和单克隆抗体课件

专题2细胞工程2.2.2动物细胞融合和单克隆抗体学习目标:1.了解动物细胞融合的原理、过程和意义2.举例说出单克隆抗体制备的原理和应用重点：单克隆抗体的制备过程难点：单克隆抗体的制备过程2002年12月30日，

两场筹备了10年的“太空婚礼”首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞“新人”—黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞原生质体，动物细胞“新人”是小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，两批新人同时在“产房”—电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼”这两场“太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术？植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术１动物细胞融合过程思考：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？2.概念：3.结果：杂交细胞4.原理：细胞膜的流动性6.意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体7.应用：5.诱导方法：物理法;化学法和生物法活动1：请同学们快速阅读课本P52

动物细胞融合也称________。是指_________动物细胞结合成一个细胞的过程。形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的

____细胞，称为________。两个多个或单核细胞杂交

处理方法诱导手段结果原理活动２:阅读P５３找一找：科学家发现B淋巴细胞有什么特点？并讨论：怎样才能获得大量的单一抗体？体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖问题１：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的问题２：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和无限增殖能力同时具备科学家发现：１.体内产生的特异性抗体种类多达百万种以上２.每个B细胞只分泌一种特异性的抗体单克隆抗体克隆一个B淋巴细胞

细胞群抗体遗憾：癌细胞动物细胞融合一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂交细胞动物细胞培养１.实验原理：动物细胞融合单克隆抗体既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体1975年，米尔斯坦和柯勒1984年，诺贝尔生理学或医学奖杂交瘤细胞模拟单克隆抗体的制备过程4人一组使用一套细胞模型，完成模拟制备流程。小组探究活动注射羊红细胞２.单克隆抗体的制备过程．．．．．．抗羊红细胞的单克隆抗体活动３：第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。实验评价已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠B淋巴细胞选择培养基必须经过克隆化培养和专一抗体检验阳性1.下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。小结[变式练习]２.如图为细胞融合的简略过程，请据图回答：⑴若A、B是植物细胞，在细胞融合之前用

处理，除去了

；A、B到细胞C的过程中，常用的化学方法是用

诱导．

⑵若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用

技术把D培养成植株。⑶若A、B是动物细胞，一般用

，使其分散开来，A、B到C的过程中，常用的不同于植物细胞的诱导因素是

，所形成的D称为

。⑷若该过程是制备单克隆抗体，A为B淋巴细胞，在获得此细胞之前，小鼠已被注射了

。在A、B到C的过程中，所形成的C有

种，用来培养的D细胞应该是

。纤维素酶和果胶酶细胞壁聚乙二醇植物组织培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶灭活的病毒杂交细胞特定抗原３杂交瘤细胞小结B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC

[自我评论]

3、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的实验方案。2、该方案能达到预期效果吗？为什么？3、图中B为________过程，特有的诱导方法_________。该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是

４、C过程指细胞培养此细胞的分裂方式

___________。制备单克隆抗体动物细胞融合灭活的病毒双亲细胞产生专一抗体迅速大量增殖不能没有将抗原注小鼠体内,无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞有丝分裂小结单克隆抗体筛选二杂交细胞等杂交瘤细胞体外或体内培养筛选一骨髓瘤细胞

诱导融合分泌特异抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞群提取已免疫的B淋巴细胞动物细胞融合技术动物细胞培养技术单克隆抗体的制备既能迅速大量繁殖又能产生专一抗体特异性强灵敏度高可大量制备课堂注射抗原课后作业：１.除通过杂交瘤细胞产生单克隆抗体外，还有什么方法获得化学性质单一的单克隆抗体？２.单克隆抗体有什么应用？感谢各位莅临指正！下课啦结合同位素的单抗-----生物导弹单抗放射性同位素练习：３、(2006，广雅中学考题)研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合４.根据下图，回答相关问题(1)若A细胞是小鼠骨髓瘤细胞，则B细胞是取自小鼠体内的

细胞，从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_____________类物质。（2）d过程是一个_____________过程，该过程的进行常用_____________或_____________的诱导。(3)假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成

种类型的C细胞，因此需用__________培养基筛选出D细胞用于培养，D细胞的名称是

，其特点是_________________________________________。浆

抗原

动物细胞融合

聚乙二醇灭活的病毒

选择3既能迅速大量增殖又能产生专一抗体

杂交瘤细胞4、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。（1）_______________技术是单克隆抗体技术的基础。（2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于________培养基。（3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是________________。（4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用________________。（5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_______________特点，又具备淋巴细胞的_______________特点。（6）淋巴细胞是由动物体_________中的______________细胞分化、发育而来。动物细胞培养选择特异性强,灵敏度高灭活的病毒迅速大量增殖分泌专一抗体骨髓造血干细胞练习：3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A、经过免疫的B淋巴细胞B、不经过免疫的T淋巴细胞C、经过免疫的T淋巴细胞D、不经过免疫的B淋巴细胞杂交细胞灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞经免疫的小鼠提取杂交瘤细胞第一次筛选用特定的选择性培养基第二次筛选能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体（经过免疫的）B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养三、单克隆抗体的制备过程第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。特异性强，灵敏度高瘤-瘤细胞B-瘤细胞B-B细胞动物细胞融合第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。动物细胞培养单克隆抗体制备过程单克隆抗体的制备

看书上53页图，分组讨论，单抗制备过程分哪几步？请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是？

检特别提醒：1.①B淋巴细胞的特点:有产生单一抗体的能力，但不能大量增殖②骨髓瘤细胞的特点：能在体外大量增殖，但不能产生抗体③杂交瘤细胞的特点：既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体。2.筛选的目的：第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。3.技术手段：动物细胞融合、动物细胞培养4.培养杂交瘤细胞的方式：体外培养；注射到小鼠腹腔内增殖5.单克隆抗体的特点：特异性强，灵敏度高，可大量制备。学科网已成功的动物细胞融合实例有很多，如鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—鸡、人—蛙等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌—鸡、人—胡萝卜等细胞的融合。想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注动物细胞融合和单克隆抗体的最新信息。生物种间杂交想像图阳性孔方法——抗原-抗体杂交法项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理用_____________和__________去除细胞壁后诱导原生质体融合用____________使细胞分散后诱导细胞融合诱导融合的方法

杂种植株（或杂交细胞）特点杂种植株含有两种生物的遗传物质杂交细胞具有意义和用途克服