流感病毒RT-PCR检测方法培训

呼吸道标本采集、运送及保存

北京市CDC传地所石伟先

2009年9月21日第一页，共三十二页。标本采集采集时间----何时采采集种类----采什么采集方法----怎么采第二页，共三十二页。标本的种类首选标本上呼吸道标本咽后壁拭子

鼻咽拭子

下呼吸道标本:气管吸取液或肺泡灌洗液

血样:血清(急性期和恢复期血清)。第三页，共三十二页。标本的采集时限

症状出现后尽早采集尽量在抗病毒药物使用前采集即使症状出现1周后也要采集可能的情况下多天多次采集

第四页，共三十二页。标本的采集方法1.准备采集物品包2.如何采集标本第五页，共三十二页。采集物品包装好VTM的样品采集管聚酯纤维拭子痰或粘液吸取管压舌板采样杯或平皿吸管其它样品管冰袋PPE防水的Marker笔,用于标本的标记第六页，共三十二页。病毒运输液(VTM)用于咽拭和鼻拭的VTM:MEM、EMEM、DMEMPH7.4-7.6Hank’s庆大霉素(终浓度为1mg/ml)两性霉素B(终浓度为2μg/ml)在无菌的带螺旋塑料管分装2-3mlVTM。最好储存在:–20℃,4℃可放48–96h,室温1–2天。第七页，共三十二页。个人防护设备（PPE）口罩(N-95orN/P/R-100)手套帽子鞋套防护服(gownorapron)第八页，共三十二页。如何采集样本第九页，共三十二页。1.咽拭子容易操作请病人尽量把嘴张开当拭子触及咽后壁时病人不要往后躲，应该抵住第十页，共三十二页。病毒采样盒咽拭子器具第十一页，共三十二页。咽拭子第十二页，共三十二页。标本采集方法—咽拭子干采用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的螺口管中，尾部弃去，旋紧管盖。第十三页，共三十二页。例子correctwrong第十四页，共三十二页。标本采集方法—鼻拭子将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔。上述两根拭子浸入同一含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。第十五页，共三十二页。3.鼻咽吸取液的收集

1.将吸液管与真空泵相连2.将软管与上腭平行插入鼻孔3.使用真空泵4.缓慢的移出同时轻轻旋转5.使用同一个管子采集另一鼻孔的液体6.收集的液体用3mlVTM冲洗出，放入采样管中第十六页，共三十二页。标记样品被采样者的信息样品采集的日期样品采集的部位样本编号采集单位第十七页，共三十二页。如何保存样品VTM中保存的样品尽快运到实验室48小时内可以检测的可以保存在4℃，超过48小时-70℃冻存。流感病毒在-20℃～-40℃时不稳定，故长期保存应在-70℃温度以下，不要冻存于-20℃，会降低流感病毒的检出率。避免反复冻融冰上一周也比冻融一次要好第十八页，共三十二页。标本的包装和运输第十九页，共三十二页。

疑似人感染甲型H1N1流感感染病例列为A类，用UN2814包装运输—《甲型H1N1流感监测方案》附录3《甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案》2009年5月11日第二十页，共三十二页。IATA对感染性物质的运输分类A类指人感染后发病的可能性大，传染性强，对人群危害性大的烈性感染性物质。高度怀疑具有严重危害性的感染性物质也属于A类。A类感染性物质感染性物质[联合国编号UN2814和UN2900(只导致动物致病)]采用PI602包装要求。A类之外，仅具有一般危险性，引起感染的机会较少的感染性物质为B类(联合国编号UN3373),采用PI650包装要求。第二十一页，共三十二页。感染性物质运输的包装系统三层包装系统：内层容器，中层包装外层包装。

第二十二页，共三十二页。基本包装内层容器(装有样本)中层包装(含吸水性材料)外层包装第二十三页，共三十二页。内层容器标记合适的材料封口防漏防渗裹以软垫或分隔多个内层容器，防止碰撞破碎第二十四页，共三十二页。中层包装包含裹有软垫的内层容器吸水性材料防漏防渗第二十五页，共三十二页。外层包装放入中层容器内容物名细单封箱第二十六页，共三十二页。标识第二十七页，共三十二页。CategoryAINFECTIOUSSUBSTANCEIncaseofdamageorleakageImmediatelynotifyPublicHealthauthority第二十八页，共三十二页。第二十九页，共三十二页。流感样品的运输采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在－70℃以下保存。无－70℃条件的需在－20℃冰箱短时间暂存，并尽快联系递送标本。标本需由专人运送，不得邮寄，最好使用专车。第三十页，共三十二页。谢谢!第三十一页，共三十二页。内容总结呼吸道标本采集、运送及保存。防水的Marker笔,用于标本的标记。MEM、EMEM、DMEM。PH7.4-7.6Hank’s。最好储存在:–20℃,4℃可放48–96h,室温1–2天。口罩(N-95orN/P/R-100)。防护服(gownorapron)。用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的螺口管中，尾部弃去，旋紧管盖。取另一