临检中心检验科主任会议 临床免疫检验标准化和一致化的实现路径

临床免疫检验标准化和一致化的实现路径

李金明国家卫生计生委临床检验中心

2017.3.23.

广州常用的免疫检验项目及检测方法感染性疾病特异抗原和抗体（乙肝“两对半”、抗-HCV、抗-HIV、梅毒抗体、TORCH等）：ELISA、化学发光免疫试验（CLIA）自身抗体：ELISA、CLIA、间接免疫荧光试验肿瘤标志物：CLIA、ELISA激素：CLIA特定蛋白：散射比浊和透射比浊治疗药物监测（TDM）等小分子：如酶放大免疫测定技术（EMIT），克隆酶供体免疫测定（CEDIA）、ELISA、CLIA等临床免疫检验的特点：“四多”“一难”方法“多”：如、免疫电泳、玻片凝集、胶乳凝集、红细胞凝集试验、散射和透射比浊、ELISA、CLIA、免疫层析、免疫渗滤、间接免疫荧光、时间分辨荧光、流式荧光、流式细胞术等项目“多”：任何一种物质，只要能得到其特异抗体，均可建立这种物质的免疫检验方法；同样，只要能得到一种物质的纯的抗原，亦可建立其特异抗体的免疫检验方法；并且既有定性，又有定量；既有大分子，也有小分子手工操作“多”检测影响因素“多”：内源性、外源性标准化或一致化“难”疾病的时代特点1990年代之前：传染病（列入计划免疫的传染病，如乙肝、结核、脊灰、麻疹等）1990年代：性传播疾病（HBV、HCV、HIV、梅毒、淋病等）2000年以后：心脑血管疾病、肿瘤、糖尿病、不孕不育、优生优育、自身免疫病？、老年痴呆《临床免疫学检验技术》本科教材“十二五”普通高等教育本科国家级规划教材、国家卫生计生委“十二五”规划教材、全国高等医药教材建设研究会“十二五”规划教材：《临床免疫学检验技术》人民卫生出版社：

第二十八章

心血管疾病及其免疫检测

第二十九章生殖免疫及其免疫检测心血管疾病及其免疫检测超敏C-反应蛋白：一级预防冠心病发生的危险性评估、急性冠脉综合征预后和疗效监测细胞因子：IL-6、TNF-α肌钙蛋白（Troponin,Tn）：心梗肌红蛋白（Myoglobin,Mb）：心梗脑纳肽（BNP）、pro-BNP、NT-pro-BNP：心衰D-二聚体：血栓TDM生殖免疫及其免疫检测抗精子抗体：不孕症抗透明带抗体：不孕症、反复自然流产封闭抗体（blockingantibodies）（包括抗HLA-DR抗体、抗TLX抗体、抗Fc受体抗体、抗基因抗体，抗冷细胞抗体等）：反复自然流产抗磷脂抗体：反复自然流产hCG：早孕、先兆流产或异位妊娠以及滋养层细胞疾病诊断雌三醇：胎儿胎盘功能状况、胎儿生长受限、过期妊娠等的诊断与跟踪胎盘泌乳素（hPL）：连续下降预测流产。hPL水平低于正常妊娠同期水平，而hCG异常升高，有诊断葡萄胎意义孕酮：评估卵巢或胎盘功能、妊娠后水平连续下降提示流产可能促卵泡激素（FSH）和黄体生成素（LH）：升高见于卵巢功能不足或卵巢发育不良抗苗勒管激素（AMH）：卵巢储备功能（灵敏和特异预测卵巢反应）抑制素B：评价不育男性精子发生、儿童隐睾和性早熟的诊断、非阻塞性无精症病人睾丸精子抽吸（TESE）的预测指标、反映卵巢储备功能、辅助诊断多囊卵巢综合征（PCOS）、辅助生殖技术标准化？一致化？临床检验项目分类A类：能溯源到SI单位的项目，包括化学定义明确的小分子化合物，如电解质、代谢物类、甾体激素及甲状腺激素和酶催化浓度等，共约30-40种。B类：不能溯源到SI单位的项目，主要是蛋白和核酸类等生物大分子，有以下4种情况：B1)有国际约定参考方法和国际约定标准物质，如糖化血红蛋白；B2)有国际约定参考方法，无标准物质，如某些凝血因子、血细胞计数、脂蛋白胆固醇等，约30种；B3)

有国际约定标准物质，但无参考方法，如某些蛋白激素、抗体和肿瘤标志物等，约300多种；B4)既无参考方法，也无标准物质，如某些肿瘤标志物和抗体等，大约300种。检验医学计量学的目标是：在国际共识的基础上，通过提供缺失的参考方法和标准物质，将上述B2、B3、B4的情况提高到B1的情况（ISO17511）。GregMillerW,

Roadmapfor

harmonization

ofclinicallaboratorymeasurementprocedures.ClinChem.

2011;57(8):1108-17.标准化(Standardization)当一个待测物的测定结果相同，此外，可通过一个较高级别的一级参考物质（纯物质）和/或参考测量程序（RMP），结果可溯源至SI（InternationalSystemofUnits(SystémeInternationald`Unités)，则可称为被标准化（Standardized）。有关标准品单位和溯源的问题长度单位的确定和溯源举例火箭助推器宽度和铁轨间距（4.85英尺)的溯源现代铁路铁轨间距4.85英尺英国电车轮轨间距的标准马车轮距的标准英国马路辙迹的宽度是4.85英尺罗马战车的宽度牵引一辆战车的两匹马的屁股的总宽度铁轨的宽度决定了铁路上隧道的宽度美国航天飞机的火箭助推器的宽度“英寸”、“中国寸”“英尺”和的由来英寸10世纪英皇埃德加拇指关节的长度14世纪英皇爱德华二世颁布“标准合法英寸”:从大麦穗中选取3粒最大的麦粒排成一行,其长度就是一”英寸”中国寸古人中指中节之长就是“一寸”。现在的中医针灸还沿用这个标准英尺？标准物质的单位IU/mL？

Foot

（缩写为ft.等于12英寸，1/3码，0.3048m)

最初是一个成人的脚长？德国人异议：因人而异16个男子左脚长度的均值量值溯源参考方法参考物质（标准物质）参考实验室参考系统测定方法工作程序标准化标准物质可比的结果标准物质分类国际标准物质分级:可分为第一,第二和第三等三个等级.一级标准数量有限,可使用10-20年,是冻干品,内含载体蛋白.一级标准可用来校准第二和第三级标准.国际标准品(IS)中作为第一级标准,二级标准可用来维持校准.国内标准物质分级：一级和二级。适用于免疫测定的标准品的一般要求

要求

一级标准

二级标准

三级标准来源

单一

多个

多个使用时间10-20年1-5年1-数年制备纯化物于载体蛋白缓冲溶液中纯化物,混合血清,提取物于载体蛋白缓冲溶液中血清或血浆,人工蛋白为基础的缓冲液定值方法多中心合作研究免疫测定,与一级标准比对免疫测定,与二级标准比对贮存方式

冻干-70℃下冻存冰冻或于稳定溶液中,可能的话冻干对用于不同类型免疫测定的一级标准的特殊要求

要求已知结构的多肽(激素和肿瘤标志物)未知结构的蛋白（抗体确定的肿瘤标志物）

血清蛋白

低分子量化合物（类固醇、甲状腺素）

纯度

最纯的蛋白部分纯化或未纯化提取物或体液混合血清

化学纯（>99%）定值方法氨基酸分析（物质浓度）；称重（质量浓度）；比对较早的标准进行免疫测定（IU）；（生物测定，IU）国际组织的一致性结果；研制者指定的单位。国际组织的一致性结果；比对纯蛋白进行免疫测定（质量浓度）

称重（物质和质量浓度）；光电比色测定。

抗原、抗体国际标准物质项目研制者发布年编号浓度（IU/瓶）HBsAgNIBSC1985(ad)1stIS100（IU/ml)NIBSC2003(adw2,genetypeA)00/588(2stIS)33

NIBSC200303/062(1stIRpanel)抗HBsSanquin1977w104250

HIV-1P24NIBSC199290/6361000

抗-HAVSanquin1998w104149抗-HEVNIBSC199095/58450抗梅毒血清NIBSC1958HS49抗弓形体IgGNIBSC200301/60020抗风疹抗体NIBSC1996RUBI-1-941600http://www.nibsc.ac.uk/products定量测定的标准物质项目编号研制者人血清补体C1q,C4,C5,B因子，和总功能补体CH50W1032Sanquin人血清免疫球蛋白G，A和M(IgG,IgAandIgM)67/086NIBSC人血清免疫球蛋白E75/502NIBSC甲胎蛋白（AFP）NIBSC前列腺特异抗原（PSA）（90：10）前列腺特异抗原（PSA），游离96/668NIBSC癌胚抗原（CEA）73/601NIBSC绒毛膜促性腺激素75/589NIBSC人胰岛素66/304NIBSChttp://www.nibsc.ac.uk/products一致化（Harmonization)当结果通过溯源到一个参考物质或根据一个大家认同的程序（如与所有方法的均值一致）而达到一致性，但既无较高级别的一级标准物质，亦无一个参考测量程序（RMP），则可称为被一致化（Harmonized）。一致化（Harmonization）通过采用覆盖正常人群、特定疾病患者和有特定疾病相关病理过程人群的样本盘及可能的候选参考物质（互通性评价）和厂家校准品或质控品对实验室检测的一致程度进行评估分析，以判断测量过程一致化的技术可行性。不可行时，通过改进测量的特异性及测量过程对测量方法进行优化以达到技术可行性，在技术可行的基础上实现相应检验项目日常检测结果的一致化。测量一致化中可能存在的问题待测物的定义不充分分析的特异性不强参考物质的互通性存在问题缺乏一个系统的一致化方法参考物质的互通性（Commutability)是参考物质的一种特性，即在两个或更多的检测程序间，参考物质和一组具有代表性的各个病人样本间，在临床有意义的限值范围内，表现为相同的数量关系。一致化的系统方法建议依据临床重要性确定哪些检验项目需要一致化，列出一个清单。确定一致化的临床要求（肌钙蛋白急诊测定、PSA人群筛查、HCV病毒载量监测，结果上的微小变化改变临床决策），从而决定检验项目的允许偏倚和不精密度。最好是能确定出现临床后果的总允许误差（TEa）。GregMillerW,

Roadmapfor

harmonization

ofclinicallaboratorymeasurementprocedures.ClinChem.

2011;57(8):1108-17.评估一个临床实验室测量程序（CLMP）近期分析性能信息来源经过同行评审的使用特性明确的病人样本盘的发表的