显微镜的使用及微生物形态的观察

1．熟悉普通光学显微镜结构及各部分功效；2．学习并掌握油镜原理和使用方法；3．学习观察微生物个体形态；4．学会生物图绘制。一、目标要求显微镜的使用及微生物形态的观察第1页二、显微镜基本结构1.物镜转换器2.接物镜3.游标卡尺4.载物台5.聚光器6.彩虹光阑7.光源8.镜座9.电源开关10.光源滑动变阻器11.粗调螺旋12.微调螺旋13.镜臂14.镜筒15.目镜16.标本移动螺旋显微镜的使用及微生物形态的观察第2页显微镜是由机械装置和光学系统两大部分组成。

1．机械装置

镜座（base）和镜臂（arm）镜座位于显微镜底部,呈马蹄形，它支持全镜。镜臂有固定式和活动式两种，活动式镜臂可改变角度。镜臂支持镜筒。镜筒（bodytube）是由金属制成圆筒，上接目镜，下接转换器。镜筒有单筒和双筒两种，单筒又可分为直立式和后倾式两种。而双筒则都是倾斜式，倾斜式镜筒倾斜45°。双筒中一个目镜有屈光度调整装置，以备在两眼视力不一样情况下调整使用。

显微镜的使用及微生物形态的观察第3页转换器（nosepiece）：为两个金属碟所合成一个转盘，其上装3-4个物镜,可使每个物镜经过镜筒与目镜组成一个放大系统。载物台（stage）：又称镜台，为方形或圆形盘，用以载放被检物体，中心有一个通光孔。在载物台上有装有两个金属压夹称标本夹，用以固定标本；有装有标本推进器，将标本固定后，能向前后左右推进。有推进器上还有刻度，能确定标本位置，便于找到变换视野。调焦装置：是调整物镜和标本间距离机件，有粗动螺旋（coarseadjustment）即粗调整器和微动螺旋（fineadj-ustment）即细调整器，利用它们使镜筒或镜台上下移动，当物体在物镜和目镜焦点上时，则得到清楚图像。显微镜的使用及微生物形态的观察第4页2．光学系统

物镜（objective）：安装在镜筒下端转换器上，因靠近被观察物体，故又称接物镜。其作用是将物体作第一次放大，是决定成像质量和分辨能力主要部件。物镜上通常标有数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等主要参数。如10×/0.25；160/0.17，其中“10×”表示放大倍数，“0.25”表示数值孔径（numericalaperture），“160/0.17”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度（mm）。目镜（coularlens）：装于镜筒上端，由两块透镜组成。目镜把物镜造成像再次放大，不增加分辨力，上面普通标有4×、10×、16×等放大倍数，可依据需要选取。普通可按与物镜放大倍数乘积为物镜数值孔径500-700倍，最大也不能超出1000倍选择。目镜放大倍数过大，反而影响观察效果。显微镜的使用及微生物形态的观察第5页聚光器（condenser）：光源射出光线经过聚光器汇聚成光锥照射标本，增强明度和造成适宜光锥角度，提升物镜分辨力。聚光器由聚光镜和虹彩光圈（irisdiaphragm）组成，聚光镜由透镜组成。虹彩光圈由簿金属片组成，中心形成圆孔，推进把手可随意调整透进光强弱。调整聚光镜高度和虹彩光圈大小，可得到适当光照和清楚图像。光源（lightsource）：较新式显微镜其光源通常是安装在显微镜镜座内，经过按扭开关来控制；传统显微镜大多是采取附着在镜臂上反光镜，反光镜是一个两面镜子，一面是平面，另一面是凹面。在使用低倍和高倍镜观察时，用平面反光镜；使用油镜或光线弱时可用凹面反光镜。滤光片（filter）：可见光是各种颜色光组成，不一样颜色光线波长不一样。如只需某一波长光线时，就要用滤光片。选取适当滤光片，能够提升分辨力，增加影像反差和清楚度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色，分别透过不一样波长可见光，可依据标本本身颜色，在聚光器下加对应滤光片。

显微镜的使用及微生物形态的观察第6页三、基本原理

1、细菌个体形态是指细菌细胞大小，形状等特征，利用观察个体形态对细菌进行初步识别和判定。显微镜的使用及微生物形态的观察第7页显微镜的使用及微生物形态的观察第8页2、放线菌是指能形成份枝丝状体或菌丝体一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长叫基内菌丝，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并深入分化产生孢子丝及孢子。显微镜的使用及微生物形态的观察第9页显微镜的使用及微生物形态的观察第10页3、霉菌可产生复合分枝菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子形态特征是识别不一样种类霉菌主要依据。显微镜的使用及微生物形态的观察第11页毛霉与根霉显微镜的使用及微生物形态的观察第12页青霉分生孢子分生孢子梗小梗梗基附枝显微镜的使用及微生物形态的观察第13页曲霉分生孢子次生小梗初生小梗顶囊分生孢子梗足细胞显微镜的使用及微生物形态的观察第14页显微镜、细菌三型涂片、霉菌和放线菌永久玻片等。四、器材显微镜的使用及微生物形态的观察第15页五、操作步骤

（1）置显微镜于平稳试验台上，镜座距试验台边缘约3-4㎝，镜检者姿势要端正，普通用左眼观察，右眼便于绘图或统计，两眼必须同时睁开，以降低疲劳，亦可练习左右眼均能观察。

（2）调整光源、光线较强天然光源宜用平面镜；光线较弱天然光源或人工光源宜用凹面镜。

显微镜的使用及微生物形态的观察第16页显微镜的使用及微生物形态的观察第17页（3）低倍镜观察检验标本需先用低倍镜观察，因为低倍镜视野较大，易发觉目标和确定检验位置。将三型涂片玻片标本置镜台上，用标本夹夹住，移动推进器，使观察对象处于物镜正下方，转动粗调整器，物镜降至距标本约0.5cm处，由目镜观察，此时可适当地缩小光圈，不然视野中只见光亮一片，难见到目标物，同时用粗调整器慢慢升起镜筒，直至物像出现后再用细调整器调整到物像清楚时为止，然后移动标本，认真观察标本各部位，找到适当目标物，并将其移至视野中心，准备用高倍镜观察。显微镜的使用及微生物形态的观察第18页（4）高倍镜观察

将高倍镜转至正下方，在转换物镜时，需用眼睛在侧面观察，防止镜头与玻片相撞。假如高倍镜触及载玻片应马上停顿旋动，说明原来低倍镜就没有调准焦距，目标物并没找到，要用低倍镜重调，假如调对了，换高倍镜时基本能够看到目标物，若有点含糊，用细调整器调就清楚可见。找到最适宜观察部位后，将此部位移至视野中心，准备用油镜观察。显微镜的使用及微生物形态的观察第19页（5）油镜观察

①用粗调整器将镜筒提起约2㎝，将油镜转至正下方。②在玻片标本镜检部位滴上一滴香柏油，切勿加多。③从侧面注视，用粗调整器将镜筒小心地降下，使油镜浸在香柏油中，其镜头几乎与标本相接，应尤其注意不能压在标本上，更不可用力过猛，不然不但压碎玻片，也会损坏镜头。④标本观察完成后，转动粗调整器将镜筒升起，取下标本玻片。马上用擦镜纸将镜头上香柏油擦净，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留油迹，最终再用洁净擦镜纸擦去残留二甲苯。

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