果蔬成分分析报告

果蔬成分生化分析大学生命与环境科学学院xxxxxxxx摘要：果蔬中养分成分多种多样，本试验以盘菜，萝卜，豆芽梨子等为争论对象，对其主要养分成分〔维生素C含量、总糖及复原糖含量、蛋白质含量〕测定与其过氧化物酶分析果。总的来说，疆苹果与苹果养分价值都高，但疆苹果相对于苹果养分。关键词：主要养分成分；过氧化物酶前言：〔多属于草本植物〔多属于草本植物。蔬菜是人们日常饮食中必不行少的食物之一。蔬菜可供给人体所必需的多种维生素和矿物类萝卜素、二丙烯化合物、甲基硫化合物等。目前果蔬中的养分素可以有效预防慢性、退质。据1990年统计，人体必需的维生素C的90%、维生素A的60%来自蔬菜。此外，蔬菜中还有多种多样的植物化学物质类萝卜素、二丙烯化合物、甲基硫化合物等。目前果蔬中的养分素可以有效预防慢性、退行性疾病的多种物质正在被人们争论觉察。蔬菜中含有多种养分成分，其主要要养分特点如下：1〕水分—颖蔬菜的含水量在90％以上，它是蔬菜鲜嫩程度的标志。2〕维生素—绿色、橙色蔬菜中含有较多的萝卜素、维生素c、核黄素及叶酸。3〕无机盐—蔬菜是无机盐的重要来源。绿色蔬菜含量最为丰富。4〕食物纤维—各种蔬菜都含有，它有促进肠道蠕动、降低胆固醇和改善糖代谢等作用。蔬菜，其特点为：1〕各种鲜水果都含有维生素c2〕水果中的纤维素、果胶是自然的缓泻剂。3〕水果具有芳香的果味，明媚的颜色能促进食欲。4〕水果含有较多的钠、钾、镁等元素，合成碱性食物。材料、试剂与器材材料各种水果和蔬菜试剂〔一〕果蔬中维生素C的测量测定1%草酸溶液、2C0.1%2，6—二氯酚靛酚溶液〔二〕果蔬中总糖及复原糖含量测定蒽酮试剂、标准葡萄糖溶液、LlH溶液〔三〕果蔬中蛋白质含量测定标准蛋白质溶液、考马斯亮兰G—250染料试剂、0.05mol/LTris—Hcl缓冲液〔PH6.8〕(四)①聚丙烯酰胺凝胶电泳分别过氧化物酶同工酶试验A〔分别胶缓冲液、B〔浓缩胶缓冲液、C〔分别胶贮液、D〔浓缩胶贮液、E核黄素、FTEMED、0.14%过硫酸铵、电极缓冲液、封板胶、上样缓冲液、染色液②过氧化物酶活性的测定100mmol/L磷酸缓冲液PH6.0反响混合液：100mmol/L磷酸缓冲液〔PH6.0〕50ml于烧杯中，参与愈创木酚28μl，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，参与30%过氧化氢19μl，混合均匀，保存于冰箱中。器材台秤；可见光分光光度计；恒温水浴锅；高速离心机；漩涡混合器；垂直板电泳槽及附件(玻璃板、硅胶条、梳子、导线等)；稳压稳流直流电泳仪；微量注射器。各种玻璃器皿试验方法试验设计试验一 果蔬中维生素C的定量测定Ⅰ步骤1、制备颖果蔬液：洗净颖果蔬，擦干外表水分，剥去外皮，称取1g试验材料放入研钵中，研磨成匀浆，转入锥形瓶中，并用约30ml2-3次，洗出液也转入锥形瓶中，于5030min，取出，冷却e+复原染料，在冰箱中保藏。称取试验材料1g放入研钵中，加水3ml，研磨成匀浆，转入锥形瓶中，12ml2-36mol/l10ml30min，冷去后用20%NaoHPH100ml，冰箱保存。Ⅱ试验结果维生素c标准液0.41ml样品液0.43ml0.46ml盘菜样品液0.58ml0.56ml结果计算：v=(0.43+0.46)/2=0.445M1=0.445×10/41=89/820M2=89/820×4×5=2.17所以白萝卜每100克样品中含维生素2.17g同理得：每100克的盘菜样品中含维生素c2.80g试验结论：盘菜的维生素含量比白萝卜高。试验二 果蔬中总糖及复原糖含量的测定Ⅰ步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制：61步管号表步管号骤 0 1 2 3 4 5标准葡萄糖溶液/mL00.10.20.30.40.5蒸馏水蒸馏水1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中5min蒽酮试剂蒽酮试剂4.04.04.04.04.04.0煮沸1010′，在620nm处比色AA620nm〔mg/mL〕为横坐标做图得标准曲线。2、样品中复原糖的提取和测定保存。并用约30mL蒸馏水冲洗研钵2～350℃水〔使复原糖浸出。过滤后冰箱保存。不同果蔬需进展不同程度稀释。水果如柚子等：取滤液1mL→100mL；蔬10mL→100mL。1mL4mL沸水浴中煮沸10min，取出冷却后比色，其他条件与做标准曲线一样。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。3、样品中总糖的提取、水解和测定箱保存。用约12mL蒸馏水冲洗研钵2～3中参与6mol/L盐酸10mL，搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5h，冷却后用20%NaOH溶液中和至pH100mL，过滤后冰箱保存。5mL→100mL；蔬10mL→100mL。1mL六、计算依据以下公式分别计算试验材料中复原糖和总糖的质量分数〔。W〔复原糖〕＝

C1V1m

×100%W〔总糖〕＝

C2V2m

×0.9①×100%式中：

〔复原糖：复原糖质量分数〔总糖：总糖质量分数〔%〕C1：复原糖的质量浓度〔mg/mL〕C2：水解后复原糖的质量浓度〔mg/mL〕V1：样品中复原糖提取液的体积〔mL〕V2：样品中总糖提取液的体积〔mL〕m：样品质量①乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗的水量。试验结果：g/LAbs0.010.0540.020.1120.030.1580.040.2120.050.050.257萝卜复原总糖0.464萝卜总糖0.881盘菜总糖0.388盘菜复原总糖0.3499.03%萝卜总糖质量分数：17.14%6.79%盘菜总糖质量分数：7.549%试验三 果蔬中蛋白质含量测定Ⅰ步骤1、标准曲线绘制7试剂0123456牛血清白蛋白0.0mL0.1mL0.2mL0.4mL0.6mL0.8mL1.0mL标准液蒸馏水1.0mL0.9mL0.8mL0.6mL0.4mL0.2mL0.0mL甲试剂5.0mL5.0mL5.0mL5.0mL5.0mL5.0mL5.0mL混匀，于20～25℃〔或室温下〕放置10min乙试剂乙试剂0.5mL0.5mL0.5mL0.5mL0.5mL0.5mL0.5mL0～5〔或室温下n下，以“0”号管调零，测定各管吸光度。以各管吸光度为纵坐标，各标准蛋白浓度为横坐标，绘制标准曲线。2、样品制备1g1mLH2O0.05mol/LTris－HCl缓冲液〔pH6.8〕研成匀浆，转入离心管，再用2mL水或缓冲液将附着在研钵壁上的研磨样品洗下并全部转入离心管〔注：盘菜，萝卜稀释至10mL，Lm5n供分析用。3、样品测定2试剂空白管测定管蛋白质提取液-1.0mL蒸馏水1.0mL-甲试剂5.0mL5.0mL混匀，于20～25℃〔或室温下〕放置10min乙试剂乙试剂0.5mL0.5mL0～5〔或室温下n下，以“0”号管调零，测定各管吸光度。Ⅱ试验数据盘菜盘菜0.921萝卜0.436牛血清蛋白溶液牛血清蛋白溶液ug/LAbs00200.104400.215600.314800.4681000.507M〔盘菜〕=1737.74gM(萝卜)=822.64g试验四Ⅰ步骤贮液配制按上表配制贮液，但应留意1～2过硫酸铵应当天配制。电泳槽的安装做成的模套而构成，由硅酮橡胶套打算两玻璃板之间距离约为1.5mm，形成一在一起后，凝胶槽子两侧形成前后两个槽，供装电极缓冲液和冷凝管用。〕，然后正确放入硅胶条中，夹在电泳槽1%琼脂溶液〔1g琼脂加电极缓冲液〔注：已稀释10倍〕至100mL，煮沸→60～70℃时用〕封底，待琼脂凝固后即可灌制凝胶。制胶将贮液由冰箱取出，待与室温平衡后再配制工作液。〔1〕配制分别胶A 3mLC 6mL0.14%过硫酸铵 水 3mLTEMED 15μL将分别胶沿长玻璃板参与胶室，留神不要产生气泡，加至距短玻璃板顶端3cm处，马上留神地掩盖2～3mm〔约40min〕，当胶与水层的界面重消灭时说明胶已聚合。〔2〕配制浓缩胶B 1.5mL3mL1.5mL6mLTEMED 18μL注：TEMED浓缩胶，插入梳子〔即样品槽模板〕，待胶凝后，留神取出梳子。将稀释10〔短板侧〕缓冲液要求没过样品槽，下槽〔长板侧〕缓冲液要求没过电极，备用。〔过氧化物酶的提取〕按以下比例称取果蔬：梨：1:2萝卜与盘菜：1:10〔W:Vg:mL〕14000r/min15min，取上清液贮存于低温冰箱备用。点样〔50μL〕吸取适量样液，在浓缩胶上层点样。点样量：柚子、梨：20、40、50μL萝卜、盘菜：10、20、30μL点样时须留神，防止样品液集中。0.1%2～36．电泳接好电源线〔上槽即加样槽为负极〕。翻开电源开关，调整电流到10mA1cm3h。剥胶开玻璃，去掉浓缩胶〔留意先进展测量〕，将分别胶放入培育皿。染色、记录结果1～10min褐色。用去离子水漂洗，并拍照、记录酶带距离。实 验 结 果 ：②过氧化物酶活性的测定Ⅰ步骤2.5mL50mL〔此处仅稀释萝卜与盘菜，水果均不稀释。313mL1mL，作为比照，另2只中分别参与反响混合液3mL和上述酶液各1mL〔如酶活Abs Abs 变化 0→11→22→33→44→5470nm1min〔5min，取其平均值。Ⅱ数据处理470nm线斜率k，此斜率为每分钟吸光度变化价值。1A470变化0.01为一个过氧化物酶活性单位〔u〕表示。2、每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即过氧化物酶活性<u/〔g·min〕>=k/〔0.01×W×t〕式中： k为上图图线的斜率Wgt 为反响时间，min试验数据：时间min012345盘菜0.1460.6810.9581.1.2441.292萝卜0.0390、1870.2730.3510.4240.475值min盘菜0.5350.2270.1810.1050.萝卜0.1480.0860.0780.0.试验方法概述〔一、试验一：2，6-二氯酚靛酚滴定法氧化型染料在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。成为复原型后为无色。用氧化型染料来滴定复原型维生素C，当滴至全部复原型维生素C被氧化后，在稍滴一点呈微红色为终点。滴定用去染料量与样品中复原型维生素C(二)、试验二：为蒽酮比色法原理单糖类遇到浓硫酸时,脱水生成糠醛衍生物,后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物,20-200mg(三)、试验三：考马斯亮兰法考马斯亮蓝G-250G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸取在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸取在595nm595nm处的光吸取与595nm〔四、试验四：①聚丙烯酰胺凝胶电泳法凝胶电泳具有一般电泳的电场效应，即在确定pH的溶液中，样品分子由于解离或吸附，移动较快，而体积大，外形不规章的样品分子受阻力大，移动较慢。因此，凝胶电泳不但区分力。②比色法在有过氧化氢存在下，过氧化氢酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm处有最大吸取，可用分光光度计测量470nm的吸光度变化测定过氧化氢酶活性。试验分析与争论试验一：溶解，以及总糖的最终PH不为7都会给本试验的结果带来误差，而且样品1g很难把握的比照组，并且不能为蒸馏水，仪器也需要归位。试验二：假设测试要求很严格，可以在试剂中参与后5～20min测定吸光度，由于在这段时间颜色是最稳定的，比色反响需在1h不行用手摸比色皿，可用塑料或玻璃比色皿，测定完后用95%乙醇将