蒙药材飞廉中总黄酮的含量测定

PAGEPAGE1蒙药材飞廉中总黄酮的含量测定蒙药材飞廉中总黄酮的含量测定摘要：本实验采用乙醇浸提、硼酸-硼酸钠试剂比色法测定蒙药材飞廉中总黄酮含量。通过建立标准曲线计算样品中总黄酮的含量，结果表明蒙药材飞廉中总黄酮含量为（6.01±0.12）mg/g。关键词：飞廉；总黄酮；硼酸-硼酸钠试剂比色法一、实验目的1.学习乙醇浸提、硼酸-硼酸钠试剂比色法测定植物总黄酮的方法；2.通过建立标准曲线计算蒙药材飞廉中总黄酮的含量。二、实验原理总黄酮是茶、剪股颖等植物中广泛存在的黄色物质，是植物次级代谢产物之一。因亲水性强、抗氧化作用、微生物毒性，对人体免疫等方面具有很好的保健功能，因此，总黄酮在食品、医药等领域有广泛用途。当前广泛应用的总黄酮测定方法有氯化铝比色法、铝酸铬混合物比色法、硼酸-硼酸钠试剂比色法等。本实验采用乙醇浸提、硼酸-硼酸钠试剂比色法测定蒙药材飞廉中总黄酮的含量。乙醇能提取蒙药材中大部分的黄酮类化合物，硼酸-硼酸钠试剂的制备简便、操作容易，对黄酮化合物的比色反应灵敏。三、实验步骤1.样品制备：取蒙药材飞廉干品约1g，粉碎并过筛（筛孔直径为0.25mm）。将样品加入50mL锥形瓶中，加入80％乙醇25mL，超声波处理2h，于室温下振荡提取24h。振荡时每1h振荡15s。2.提取液处理：用蒸馏水洗涤锥形瓶中残留在瓶口的提取液，并将洗涤液加入提取液中，摇匀后滤过。取滤液10mL，置于50mL量筒中，用蒸馏水补至刻度，摇匀，称量取1mL，加入50mL烧杯中，挥干备用。3.制备标准曲线：将标准品(总黄酮)用乙醇配制成浓度为0.03、0.06、0.09、0.12、0.15g/L的五个标准溶液，分别标为A至E。取0.10，0.15，0.20，0.25，0.30mL标准溶液A至E，加入50mL烧杯中，用蒸馏水稀释至10mL。每组标准溶液吸光度均值应在0.4~1.2之间，否则需重新稀释标准溶液。4.测定样品与标准曲线：向制备好的标准溶液和干燥的样品均匀加入5mL0.02mol/L硼酸-硼酸钠试剂（1:1），混匀后静置15min。加入蒸馏水稀释至25mL，用紫外分光光度计在355nm处测定吸光度。用适当的蒸馏水代替样品，进行零点校准，每个标准和样品均测3次。5.计算结果：计算各标准溶液和样品的平均吸光度，按照标准曲线计算出每个标准和样品中总黄酮含量，使用Excel绘制标准曲线，核算样品中总黄酮含量。四、实验结果与分析1.样品提取液处理后，置于量筒中，稀释至50mL，取1mL加入烧杯中，挥干后称重0.246g，计算提取液中样品的质量，计算出样品中总黄酮的含量为（6.01±0.12）mg/g。2.绘制标准曲线如图1所示，线性关系良好，相关系数r=0.999。图1标准曲线适宜测定范围在0.006~0.095mg/mL之间，为仅参考。在本实验测定总黄酮的含量以蒙药材飞廉为研究对象，不能作为其他材料的分析结果。五、实验结论本实验采用乙醇浸提、硼酸-硼酸钠试剂比色法测定蒙药材飞廉中总黄酮含量，通过建立标准曲线计算样品中总黄酮