提供素材体外诊断原理手册

专业资料 医疗卫生专 参者RocheDiagnosticsAGForrenstrasseCH-6343RotkreuzCOBAS、COBASINTEGRA、ELECSYS和LIFENEEDSANSWERS 的商标©2010Roche 。①10105诊断产品 住所 市外高桥保税区希雅路330号7号厂房第二层I部免费服

生产企业：RocheDiagnostics6离群值的789容许分析重新指定的原异质免疫分析的标准标准化的参考标准质控样本的分析标准化值指线性校准非线性校准模精确度质控品的值指非线性校准模型的两测量的不确定标准化概报告不确标准化设计的统计学基不确定度、生产厂家选定的测量程序参考标准测量不确定度分量的确针对参考方法的参考样本和数据来针对参考物的参考标准生产厂家的固定测量方法常规标准 结果的可靠性与以下问题紧密相关：需要的精确度和精密度，以及预期可以实现的精确度和精密度。我们理所当然希望是一个简单的答案，例如，保证分析结果随时间的变化不会超过给定百分比。然而，事

Stot=Stot= 举个简单的例子，如果Srep1，Sday4，Srun实往往更为复杂。特别是在生产厂家和用户手中，许多变量开始产生

Stot=

42= 用，它们会影响检测结果的可靠性。表1所示为这些变量的概述，一般而言，会进行以下区分分析前变分析变分析后变在国际文献中，分析前和分析后因素对结果的影响通常称为"额外然而，我们能以何种精确度和精密度进量？此问题的答案取决于参数以及某些情况下特定参数的测量范围内的特殊子范围。一般而言，参数的生理调控越严格，即参考范围越窄，则必须能够更精确地测量。严格调控的参数的例子有电解质（Na+、K+、Cl-）和血液气体参数、、数（例如甘油三酯或尿酸）。对于某些参数，根据不同的临床要求，质量标准也存在差异，例如，甲状腺功能减退和甲状腺功能亢进

分析前是一个概括性术语，涵盖了实际检测执行之前医学样本上发生的一切。其中包括：样本收集、标记、（以及，如适用）和样本预处理。根据经验，我们知道分析前误差（例如样本混合）通常会产生比分析误差更严重和致命的。分析前问题的推荐解决方案涉及技术和教育两个方面。完整的分析前模块（例如）找到合适的解决方案常常需要所有相关方（医生、护士、工作人员）的密切合作。应在的标准操作规程（SOP）中提供接口和责任分 结果的可靠 结果的可靠 表1：影 结果的部分重要因素这里的重点仍然在于改善结果的精密度和精确度。然而，实现此类改善的努力越来越受到成本限制的制约。须提出一个现实问题：我准备为一定程度的可靠性提升支付多少？

通过优化标准化和校准方法，可以大幅改善精密度和精确度。过去偶尔推荐的单个样本的多次分析，如今已成为罕见的例外情况，而这不仅仅是因为成本。四重分析可以将结果的不精密度减半，而通过二重检测只作为改善可靠性的方法，多重分析现已被过程步骤的优化所取代（例如在解析结果时，另一必须考虑的重要综合领域是：通过参考特定参考区间测量单一值，与以监测为目的比较一系列单独的值（例如肿瘤标志物的测量值）之间，存在差异。按照约定，参考区间可通过参考群体来确定，并反映健康或无症状群体的生物有效性。根据经验，我们可于参考群体。在比较多个单独的值（例如为了监测肿瘤标志物）时，将。分析

分分过

分析

检测结果的生物变异和分析变异之比会影响所需检测性能和客户对检测的解析。 压力、身体或精神作用所致 间变异是不 间的变异，例如、种族 图 诊断过程 结果的可靠 结果的可靠 偏倚和总误差定义了合适的质量规范。总体而言，不同分析物在受试者参考范围性能规范的定义（精密度、偏倚、总误差全

频 敏感度增 特异性增截止容许分析总之，诊断检测的质量要求在最近数十年有所上升，这是技术能力提升最终目标必须是最大程度减少误分类。误分类的发生原因常常是，从有和没有相关条件的分组获得的结果的频率分布出现。这种情况源于这些分组之间的生物变异，与之相伴的还有分析的分析变异。对于给定分类性能自然而然地受到分析精密度性能以及标准化质量（即精确度）图2：群体中健康者和患病者的分布直方图。1因群体中的患病者和健康者部分有所，分析产生了假/假阳性结果。23标准化偏倚分别对假和假阳

频敏感度增假频敏感度增

截止截止

假阳假阳

浓2特异性增浓3特异性增 假阳 浓 结果的可靠 结果的可靠 设计用于检测人源样本的任何医疗设备，即试剂、试剂产品、校准品、质控品、工具、仪器、设备或系统。该欧洲指令已转化为国家法律和法规，在所有国家通用。指令主要面向体外诊断医疗设备的生产厂家，定义了生产厂家在体外诊断医疗设备生产期间以及推向市场期间要遵循的规则和要采取的措施。它确保质量以及患者和用户的安全。在投放市场时必须标注标志。标志被视为生产厂家对其产品符合相关。该指令的一般术语中描述了对体外诊断医疗设备的关键要求，而关于如何满足这些要求的详细信息则在多个欧洲标准中提供。一个与标准化紧密相关的指定要求是校准品和质控品指定值的计量溯源。如果可能，校/ENISO17511：在体外诊断医疗设备中——生物样本中量的测定——校准

这些标准是自愿遵循的，生产厂家也可以通过其他方式展示可溯性，但医 寻求测量方法认证的常规医 准服务的范围相关的ISO9001和ISO9002标准的所有要求。ISO15189，医 ——对质量和能力的特殊要求。该国际标准基 ""规定，检测应使用法评估其所有自有校准品的测量不确定度以及检测方法的校准。应考虑给定条件的所有重要不确定度分量，并且O使用的设备、环境条件、样本状态和操作员的更换。这两个标准中没有12管理背 管理背景 ——测量不确定度的计算和表示CLSIC51- ISO（国际标准化组织）是机构（ISO成员机构）的国际性。销。期间在文件的内容和概念方面遇到了一定的阻力。医学领域的争议是文件十分复杂，对于实际问题的帮助不大。此技术决权的成员所接受

在校准时，特定的测量信号与中的分析物浓度有关。然而，分析仪时常记录完整的反应活动，这些数据随后必须转换为净信号。在®分析仪上，此信号转换是以最佳方式自动执行的（图在临床化学光度分析仪上将反应活动数据转换为净信号，是特定分析仪应用检测的一部分（图。光扩磁性微临床和标准（CLSI，原NCCLS）是一个"跨学科、非赢利标准开发和教育组织，旨在促进医疗领域的自愿一致化标准和""目标是帮助确定并应用临床中测量不确定度的估计值。"该指南提供了非常详细的信息，并举出了大量例子。对于非专业而言，从自己的特殊情况出发，提取出需要知道的关于不确定度估计的最重要。

ee

–e电电图3：电化学发光免疫分析的原理（TPA：三丙胺）用于获得有用的特定净信号的重要方法有：）终点"（图和）比率测定（图）法。在使用"空白处理"的"终点"分析中，从反应活动后续步骤的第二个吸光度值中减去反应活动初始步骤中获得的基准吸光度信号（空白）。基准信号可以从有（样本空白）或没有（试剂空白）样本添加的试剂读数中获得。可以在反应完成之前第二个吸光度值，以便缩短测量时间。14管理背 测 反应单色光反应单色光检测放大A

在比率测定方法中，反应速度或速率可以传达特性信息。有时还与动力输运动（速率）测--图4：临床化学分析仪光谱光度测量的原

载脂蛋白A-

00

时

图6：基于运动或速率分析的净信号偏差0

时

图5：基于不同浓度终点分析的净信号偏16测 测量00

校准模

浓

1

校准的目的是确保在特定分析仪上使用特定方法/试剂，以便精确测定特定样本中的未知分析物浓度。测定过程包含两个步骤。首先，生成描述信号-浓度关系的合适校准曲线。此校准曲线用于将未知样本的测量值转校准的质量受分析精密度、校准模型、选择的拟合方法以及同样重要的校准设计的影响。必须注意的是，诊断为了获得最精确、最精密的0

测量数据和校准模

浓

0

校准模型和样本读

1校准品测量2校准曲线的拟合3样本测量

浓

18校 校准校准设线性样条曲

CA15-3数据的校准模型

单一校准品过原点线性校准（有时也称为"因数校准 L过原点线性校0 浓度

校准模型的相对偏差 5

0

斜率 75100125150175200225浓0

120160200240280320浓度

图9：传统单一参数过原点线性校准模型图8：校准系统的选择原理（=校准模型+拟合算法）。1两个备选校准模型：非性模型和简单的线性样条曲线模型。2参考和两个选定校准模型之间的偏差20校 校准

随着异质免疫分析的引进，临床相关测量范围的某些部分开始明显超出线性信号响应区。为了应对这种情况，已引进非线性函数，以便对非线线性校线性校斜率信p140

浓信p21 75100125150175信p21浓图10：传统双参数线性校准模型 浓图11：Rodbard函数。图中指示了上

和下降（竞争性测定）2的校准曲线的1数参数p1下渐近线）、p）p3曲率和p（上渐近线）的作用。图中未明确显示的参数p描述的是曲率，p3的值>成122校 校准

参数p2和p3为不同值的Rodbard曲线形

K

s=fp(c)=

1exp(AB

如今在非线性校准模型中得到了最广泛的应用。其参数p=(S1KA有一个简单而直接的含义，S1fp(c0)，表示浓度c=0时信号轴的截距，S1+K定义了大浓度c的上渐近线。参数(A,B)决定了此非线性曲线的0

浓

参数p2和p3为不同值的Rodbard曲线形

c0

图12：上升1和下降2校准曲线（具有不同的Rodbard参数p2和p3组合模型可能有的曲线形状选

24校 校准校准设计校准曲线设计

信信

样条曲线概念介绍了局部而不是全局函数模型。最简单的变式是样条插值，其中使用直线连接数据点。此类样条曲线有时也被称为线性或一阶样条曲线。测量的校准品信号被认为无错误，因此，拟合校准曲线可以准确地通过校准品点。不同于全局函数模型，校准品设定点之间的曲线有几分随意，并且可以保持诸如单调性等全局属性。可以通过选择拟合多项式模型的阶数调节结果曲线的平滑度。标准的样条曲线模型是三次0偏差偏差50

校准设计的比1 校准设计的比1样本结样本结果的相对偏2 浓

测量[测量[绝对值X0

浓度

2图13：1从不同校准品设计获得的两个校准曲线（绿色、红色2计结果的测量浓度之

作为校准

图14：由样条曲线模型生成的不同批次CRP试剂校准曲线的形状26校 校准校准大部分拟合方法均基于这样一个理念，即通过选择合适的未知函数参数值，使模型函数的残差平方和最小化。在缺少额外信息的情况下，此方法以相同方式处理所有校准品。在将校准模型与一组校准品拟合时，可能必须非常贴近地拟合选定的校准品。对于许多免疫分析的最低浓度范围尤其如此，因为它们通常还包含医疗决定点。解决此问题的方法之一所示。

权重允许拟合过程中单个校准品的浓度存在一定灵活性。在诊断校非线性校准模型的两系统允许非线性校准模型的两点调整。其中，最初只执行多点校准。关于校准曲线的必要信息通过条形码转移到分析仪，并与两个本地校准品的测量值相结合。因此，所有系统校准实际上在生产厂家原始校准的基

础上进行了重新校准。相应地，生产厂家的校准曲线必须对市场上的1有系统有效，并且本地重新校准必须能够充分考虑分析仪和试剂的特测量条件。重新校准可以通过更新校准曲线或调整测量信00

浓度

校准设计也是两点校准执行中的重要问题。诊断使用先进的模拟技术，可以在多点校准期间为找到最佳组合（即最终生产的校准品组）使 0

浓度

图15：HCG免疫分析的下限（总测量范围的0.1%），在没有1和有权重2的情28校 校准1为了执行医疗诊断，通常必须知道患者样本中主要分析物的浓度。此信息通过诊断分析得出。诊断分析是复杂的测量体系，可以在不同的测量（试剂批次、样本溶液等）而异，同时还受局部因素的影响，例如操作员和/分析成分的特定组合生成每个结果。分析成分通常由生产厂家提供，而特定的组合，例如分析仪类型、校准品和试剂批次，则根据国际公认的参考系统进行标准化。实际上，此标准化过程通过为一系列构成客户系统的已定义组件建立真正的校准关系来实现。这确保了生产的分析系统可以产生与选择的参考系统相同的结果与此相反，分析校准考虑局部测量条件，从而校准当前使用的试剂、校

标准化是对不同方法之间精确度转移的协调过程。关键要素是在选（即标准化）测量系统组成部分（例如分析仪、校准品批次、试剂批次和国际国际单位的定一级参考测量方 工工作校准二级校准标二级校准深入研究该重要之前，以及为了将当前内容与之前关于校准的内容校准考虑局部测量条件，以便校准实际的试剂、校准品和分析仪状态。需要校准的典型情况包括更换了试剂批次、使用了不同的分析仪系统或者仅仅只是所涉及的化学成分老化（例如，在保存期限的末期和在机稳）。简而言之，校准的目的是评估实际的信号-浓度关系，即

图18：追溯链总

常规样产品校准生产厂家的常规样产品校准生产厂家的固定测量方生产厂家的选定测量方结

不确定32标准 标准 SSCCSSCSSC结图）。

在本节中，从更数学化的视角，聚焦于从追溯链的一个阶段推进到后续阶段的方法和设计。我们还将解决实践相关问题，例如标准化设主要有两类标准化方案这种情况下，将使用更具计量特性的方法（以下称为生产厂家的选定测量方法）为计量特性较低方法（以下称为生产厂家的固定测量方法）的校准品指定一个值。使用生产厂家的选定测量方法生成校准，转而将其用于生产厂家的固定测量方法的校准品。在多个分多个批次重复此过程，以便最大程度减少值分配过程中随机误差的影响。以下文td，。还应注意，在这种方法中，生产厂家选定测量方法的不确定度决在该方法中，进行方法比较分析时，将使用生产厂家的选定测量方法获得的患者样本结果与生产厂家的固定测量方法的相应结果进行比较。随后，使用比较结果重新调整生产厂家固定测量方法中使用的校准品指定值。此方法的关键点在于，在同一测量系统中，无需测量生产厂家选定测量方法和固定测量方法的校准品。此外，还应注意两种方法都会影响测量的不确定度。这相对于重复的校准品测量方法似乎是个缺点，但是34标准 标准化通过多次测定进行值分 信 信 信浓浓浓

1信标系统信方法比较：Ctarget对比浓指定浓图20：使用基于生产厂家选定测量方法的校准，为生产厂家的固定测量方法指校准品

信标系统信方法比较：Ctarget对比图20：通过二分样本比较进行校准值指定时涉及1使用基于初步校准品指定值进行校准的生产厂家固定测量方法测量一系列参考本。2使用来自生产厂家选定测量方法和生产厂家固定测量方法的浓度结果进行方法比较分析。3（通过应用2中方法比较的结果获得）校准生产厂家固定测量方法。4使用调整后的校准品值重复步骤2和1，则已成功完成标准化。36标准 标准 标准化设计的统计学基从统计学上来看，可以将标准化过程模式化为随机效应模型。涉及的因素可描述为正态分布的随量，具有零平均值和未知方差。这些方差为确立合适的标准化设计提供关键信息。单向分类模型全面考虑了标准化设计的所有统计元素，并且可视为在合理的、统计学上可靠的基础上进行标准化的典型。 Yij= 的框架内此设计的属性及其结果，例如指定校准品值和因素验室随机因子ij表示重复随机因子。作为指定校准品值的总平均可以通ˆ=Y–=1·1

生产厂家选定的测量程序——参考标准标准化的目的是确保在诊断的分析仪系统上测量患者时，产生因此，当参考方法处于最高计量水平时，常常在参考标准化过程中使用患者样本。将使用单一供体或混合样本，具体取决于方法。在至少一个（。试校试校准分析IJi,j靶 靶Var(ˆ)=Var(Y–)=1· 1· 图22：影响患者样本回收率的三个分量38标准 标准 （D法，选择合适的正式参考物（例如。如果没有提供，则可以使用如果没有提供正式的参考方法（生产厂家选定测量方法），则使用参考方法在有证参考或使用手动方法在内部测量样本。在以上情况中可以使用混合样本，但有几种例外情况。这些样本随后作为参考标准（对应于工作校准品）次的校准值的指定（对应于工作校准品分析仪平台测量这些校样本，并使用具有初步校准品设定点的普通一级校准品批次执行校准。随后，通过方法比较或基于来自参考物的所有测

一级校准品批次的基质对应于商品校准品批次（常规校准品）的基质，只不过它的温度为（参见关于一级）。为避免使用处理的样本进行参考标准化时的稳定性问题，单一供体样本仅使用一次。混合样本中的参考方法值的有效期最多6对于大部分分析物，用于确立可溯性的方法可以总结如下：使用参考方法测量样本。或者，也可以使用具有参考值的参考物。一级校准品。通常基于酶的催化活性测量酶的活性，方法是根据给定的测量程序，测布的正式参考，执行使用原始配方的手动参考方法测量。对于所有其他方法，在诊断的中，通常将系统试剂用作手动测量的参考物。在 分析仪上直接测量参考物。如果并非所有类型的分析仪都能像从样本中一样识别此材料中的分析物浓度（互换性），则将一个系统用作主系统。其他所有分析仪类型均可通过使用单一供 样本的法比较来进行调整

追溯参考方基参考方

参考方参考方样本

无基质修图23：不同的标准化方法40标准 标准化这样可以保证使用这些系统确定的患者值的可溯性。如可能，将每个分（sS仪器以相同的方式进行单独的标准化。对于每个分析仪系列，指定期间使用测定的参考方法值（例如ID-MS）需从公认参考测 ，例如

材 方 责一级校准（例如参考系统（kg一级校准（例如参考系统（kg为国际单位制中的国际参二级参考测量方法（二级参考物二级参考物（

生产厂家工作校准（一级校准品

YTICS生产厂家的商品校准品（用于销售的校准生产厂家的商品校准品（用于销售的校准

参

客客最最终用户的常规测量 结客客常规样结常规样结

uc

值指定 校准

混合样本 分析图24：临 中的参考方法/材料、商品校准品和准确度控制之间的追溯链图25：参考标准化程序对比参考方法42标准 标准 个单一供体。分析物浓度或样本活动尽可能分布于整个相关测量范围。混合样本中没有添加处理过的材料或用生理盐水稀释。这样可确保用于参考标准化的样本与天然的患者样本的性能并无不同。此外，通过使用天然的材料，我们能够补将–80室和诊断分析仪上同时进量。用于在分析仪系统上进量的统计设计相当于用于确定商品校准品和质控品的靶值指定的统计设计。一级校准品批次被用作具有初级设定点的校准品。将待标准化的分析仪上的所有公认测量系列的平均值与每个样本的参考方法值进行比较。一级批次值的标准化通常通过方法比较来执行（例如线性回归）。如果截距可忽略不计，则仅使用斜率进行调整（图、。使用稍微不同的尿酸尿酸[µmol/L]，比色

如果在广泛的生理学范围内没有可用的分析物，则使用混合样本参考值的平均差值进行调整。对于某些参数，例如高密度脂蛋白，可以由参考针对参考物的参考标准如果对照参考物执行参考标准化，则将该参考物用作校准品，以便指定线性分析时的一级校准品批次。如果是非线性检测，则使用参考物作为样本，以避免一级校准品批次和通常为低浓度的参考物的校准曲线之间如果所有分析仪类型的材料互换性相似，则以相同的方式调整所有系统如果材料的反应不同于样本，则执行调整后主系统和其他分析仪类型之间的方法比较。通常测量来自常规的新鲜样本（单一供体）。在相同类型的三个分析仪上测量个独立批次中的不同样本，每个如可能，分析物浓度应广泛分布于整个相关测量范围（图、00

y=5.4084 图 尿酸色度检测对比ID-MS的参考标准化44标准 标准 材 方 责 材 方 责一级校准（例如参考测一级校准（例如

参考测量方法（例如 参 推荐的方法生产厂家的选生产厂家的选定测量方法生产厂家工作生产厂家工作校准(例如生产厂家的选定生产厂家的选定测量方法常规方法（生产厂家固定测量方法，例生产厂家工作校准品（一级校准品生产厂家工作校准生产厂家工作校准客常规样客常规样最终用户的常规测量方生产厂家的商品校准品（用于销售的校准结

生产厂家的生产厂家的选定测量方法客最终用户的常规测客最终用户的常规测量方生产厂家的商品校准品（用于销售的线性校 结结非线性校样非线性校

值指定 校准值指定 校准

图28：通过主系统对比参考标准化程序和参考图27：参考标准化程序对比参考46标准 标准 由于一级校准品批次具有与常规校准品相同的基质，通过将其作为样本进量获得的常规校准品值，与在使用一级校准品批次进行方法比较时调整常规校准品获得的值，预期应相同。已在外部客户中针对 血浆血浆铜蓝蛋白[g/L]，cobasc

对每个指定值使用了相同类型的代表分析仪系列的三个分析仪（例如罗氏/日立系系列的/日MODULAR YCSP）。如果已同一列的析类之间在异，必对分析类型独执指个分析提供少个效批。此，以个单果得商品校。 分析

y=0.00561.0377xn=225

校准，新样本离群值检

布失111 11 1110 血浆铜蓝蛋白

所有发布批次的平均值所有发布批次的平均值图30：设定点指定和离群值处理的设 血浆铜蓝 度检测的参考标准化，对比/日立 YTICS<P>上执行 血浆铜蓝蛋白检测。冷 新 48标准 标准 为了进行指定，如可能，应长时间使用一批试剂。与在常规执行的患者指定相比，应用和分析仪配置是相同的。精确地定义了批次的独立性。对于每个批次，分析仪必须加载要指定的新近复溶或开放的一级校准品批次和样本。随后，必须执行完整的全面校准。在复溶后，所有模式立即执量。这样可以最大程度减少任何系统偏倚的影响，并确保指定值的精确度。

必须在严格控制的条件下执行所有指定。在客户提供的条件下使用分析仪、软件和应用。以与患者样本指定相同的方式使用校准检查。此外，使用不同的质控品和质控程序确认单一结果。如果使用的一级校准品处于测量范围以内，则为了检测不成功校准，将等分样本作为样本进（m和h测量周期很长，则使用漂移控制。如果指定值的回收率超出了定义的范围，则必须重复检测一批。在执量的同时，在执行所有这些销售批批前/最早销售批图31：常规校准设定点/值指定

时 在指定完成后，评价所有质控品批次的所有检测结果的平均回收率值。靶值的回收率不得超过为了进行监测，在每次常规值指定时，测量商品校准品或质控品批次的最后指定批次以及具有剩余保存期限的最早批次。将新产生的校准品或（。离群值的识别离群值是标准化过程中质量和过程控制的重要部分。它提供关于系统函数的背景知识，并且一旦恰当地剔除了离群值，将允许参数估计量这意味着测量不再是孤立的，而是在因子水平方面存在相关性。因此，不是对一组独立并均匀分布的随量的离群值执行标准识别，而必须50标准 标准 执行多批单一测量。单向分类模型描述了这种情况。在这些数 有数据 观测值。 离群值，是研究涉及的所 中。离群值方法应能检测两类离群值并提供标准，该标准一定义，即可应用于众多标准化程序

关键理念是获得批次（残差）效应和/或 效应的独立离群值范围这些范围应呈正态分布（首先由于建模方法，其次根据定义），以便我们可以将临界分位点定义为离群值区间。任何超出临界分位点的残差或效应随即被识别为离群值。为了能够向众多标准化程序应用离群值范围，必须执行预实验，以便估计间和内部测量系统方差。诊断分析的标准化过程中使用的识别方法可以检测随机效应模型框架内的离群值。它充分考虑结构化数据的情况，并提供固定的离群使用内部指定值的方差和客户测定的方差验证数值表中发布的质控品靶值范围。 料可以在更长时间内使用。一级校准品批次通常可在约2–4年内使用。分析

6 对趋势分析实验使用了不同的标记。一个样本是校准品生产批次，其生产独立于实际的一级校准品批次。如果有合适的稳定材料可用，则第二个样本使 图32：在一系列标准化数据中可能产生的两类离群值：分析仪1，以高于其他仪器计量水平 量；分析仪3，产生了一个显著偏离此仪器上所有其他测量值的值

如果超过了既定范围，并且无其他已知原因，则必须对此分析重复参标准化过程为了评价常规指定值并分析常规指定值的趋势，部署了新的监测系统。将多次使用的不同分析仪、变异系数或样本回收率的平均值。这些系统52标准 标准化重新指定的原有时可能必须重新指定设定点和靶值。进行此类变更的原因不尽相同。如果对国际公认的参考方法或参考物进行了变更，则必须改变一级校准品批次的可溯性（例如℃酶学方法）。诊断执行了细致的另一个原因是一级校准品批次的不稳定性。在过去，根本原因是采用了需检查趋势分析系统和一级校准品批次的变更程序是否可以进行任何常规改进。最后一个主要原因是单一样本的不稳定性（商品校准品或质控品），或者诸如值指定期间所用试剂批次的试剂问题等。为避免这些问题，需对为了执行医疗诊断，通常必须知道患者样本中主要分析物的浓度。此信息通过诊断分析得出。诊断分析是复杂的测量体系，可以在不同的测量（试剂批次、样本溶液等）而异，同时还受局部因素的影响，例如操作员和

对于任何给定的医疗样本，使用分析成分的特定组合生成每个结果。分析成分通常由生产厂家提供，而特定的组合，例如分析仪类型、校准品和试剂批次，则根据国际公认的参考系统进行标准化。实际上，此标准化过程通过为一系列构成客户系统的已定义组件建立真正的校准关系来与此相反，分析校准考虑局部测量条件，从而校准当前使用的试剂、校标准化的目标是确保使用的检测系统可以正确地恢复 样本中的分物浓度。免疫检测系统通常被定义为试剂、校准品和分析系统的组合。诊断确保在标准化的范围内，客户可以获得并交换在本地校准其检测系统所需的所有信息标准化的第二个重要目标是基于指定的保存期限，匹配试剂/校准品批次和分析系统的所有可能组合。所有将来的试剂和校准品批次均以此种方式实现标准化，以便将与样本的回收率相关的批间方差降至最低水平。54标准 标准化标准化的参考标准参考标准化的目标是，将通过国际公认的参考系统描述的样本回收"主系统"""替代性要求，则最好包含覆盖整个测量范围的天然样本。如果不可行，也可以包含根据最高质量标准生产并加入了分析物的去除各种成分的。成功执行参考标准化之后的目标是，在每个仪器平台上使用每个校准品批次将每个试剂批次标准化，以此展示参考系统的回收率水平。精确度""一支持计量溯源至国际单位的参考系统通常采用物理-化学方法。此类方法不受样本状态的影响，因此能够以精确并且可重现的方式确定分析物浓度。这样的例子包括对诸如雌二醇、睾酮或酮等分析物使用同位素稀释气相色谱质谱联用法3A–

ID-GCMS方法使用通过分析物称 的校准品（值指定I）进行校 参考方法的执行可能是一项非常具有性的任务，具体取决于选择的测量原理。结果的质量完全取决于执行工作的技巧。为此，选择了经证明具有专业知识的持证参考。在图33A中，使用不同的颜色标注了整个值指定过程中的责任分配。绿色表示不属于的责任，蓝色表示内部过程，而黄色表示客户的责任。体样本作为"二级校准品" 量。使用定义的算法计算校准曲线Cal（3se在下一步骤中，可以测定工作校准品的浓度。该工作校准品表示分布于检测的整个测量范围的一系列天然样本。理想情况下，这些工作校""see、®l3）参数）的基础。在图3表示。56标准 标准化校准品标准化使用来 的固定测量方法。以这种方式获得的商品参考系统，例如千克为国际单位（国准品浓度值分多个批次测定。参考系统，例如千克为国际单位（国通过测定处于追溯链中不同层次（3中以五角星表示）的样本的睾酮浓度，可以检查标准化的结果。不同层次之间样本的结果比较是对标准化过程的有效质量控制，还可以记录校准品的可替代性3A中以双箭头表示

I一级校准一级校准品，例纯分析二级二级校准品，例天然校准品样本CalCal商品商品校准品，例

一级参考测量方法（例二级参考测量方法（生产厂家的选定测量方生产厂家的固定测量方

天 样本中的酮浓QC QC 常规样Cal常规样

最终用户的常规测量方法，例如客户使

QCQC天 样本中的酮浓58标准 标准 CalCal 参考系统，例如千克为国际单位（国际单位制BCal用于使用校准品样本校准固定测量方法的校准曲D校准品样 校准品样 校准曲

测量信号[测量信号[计数MP批次，cobase

校准曲

测量信号[测量信号[计数P批次，cobase0 睾酮[ng/mL]，校准品样本，值指定

睾酮[ng/mL]，校准品样本，值指定QCQC CQCEy=1.016xy=1.016xr=y=1.014x0.002r=0.9992睾酮[ng/mL]，固定测量方 0 睾酮[ng/mL]，ID-GCMS，值指定

睾酮[ng/mL]，选定测量方法，值指定60标准 标准 CalCal 用于使用CalSet校准固定测量方法的校准曲FQC 常规测量方法与ID-GCMS的比H校准曲

y=1.030x0.013ry=1.030x0.013r=0.9984测量信号[计数P批次，cobase 00

睾酮[ng/mL]，CalSet，值指定

50 睾酮[ng/mL]，ID-GCMS，值指定QC常规测量方法与选定测QC常规测量方法与选定测量方法的比Gy=1.010x0.002r=0.9997睾酮[ng/mL]，常规测量方法（P50 睾酮[ng/mL]，选定测量方法，值指定62标准 标准 -或法定参考物执行参考标准化（以下称为"参考物"）进行说明）的参考物溶解于指定数量且不含分析物的中。此液将用于通过添加已去除各种成分的来一组参考校准品。参考校准l准选定测量方法（在诸如®等平台上使用批次）。使用此校准曲线可以测定工作校准品和一系列样本中的催乳激素浓度。以这种方式获得的工作校准品催乳激素浓度值代表了参考标准化的结束，按照"睾酮"一例中的描述，可通过测定追溯链中不同样本的催乳激素浓度（在图33A中以五角星表示）来检查标准化的结果。使用参考物执行的参考标准化的质量受其他因素的影。其中包括参考物的质量、纯度和稳定性，以及参考校准品的 、已去除各种成分的

参考物： I如催乳激素WHO如催乳激素WHO3rdIRP84/500的参考校准Cal商品商品校准品例如Cal常规常规样

方法，例如Elecsys®Elecsys®2010标准化方法，例如Elecsys®

A天 样本中的催乳激素浓QC 64标准 标准 Cal

用于使用校准品样本校准选定测量方法的校准曲

QC

固定测量方法 参考物的方法比 校准曲

Elecsys®2010），值指定III0

200040006000800010000

00

y=1.003x0.206r=0.9997催乳激素[µIU/mL]，校准品样本，值指定

催乳激素[µIU/mL]，参考校准品WHO3rdCal 常规测量方法与选定测量方法的比

Cal 用于使用CalSet校准常规测量方法的校准曲

校准曲

0 催乳激素[µIU/mL]，校准品样本，值指定

0 催乳激素[µIU/mL]，CalSet，值指定66标准 标准化QC

常规测量方法与选定测量方法的比

如果没有参考方法或参考物，则生产厂家可以选择另一测量方法作为参考系统。新一代检测的发展代表了一种特殊情况。其中，可以对照上一代检测执行新一代检测的标准化，即使有参考方法或参考物可用。这样00

y=0.997x0.867r=0.9997

套的商购检测）。Cal1的步骤（图35B）中使用了工作校准品1来校准测催乳激素[µIU/mL]，选定测量方法，值指定

R1和QCR2方法比较检查了此高度复杂过程的精确度和可替代性。此类参考标准化的结果受一系列因素的影响。其中包括选定测量系统的性能（测量范围和精密度等），以及所使用批次的当前质量（稳定性和回收率水）。测量方法之间的关联的另一个重点是所用抗体的特异性和敏感性。68标准 标准化CalA

用于使用校准品样本校准选定测量方法2的校准曲 参考系统，例如生产

校准品样 CalCal商品商品校准品，例

生产厂家的选定测量方MP批次、cobase601；生产厂家的选定测量方MP批次、cobase601；

天 样本中的QCQC天 样本中的QC天 样本中的

校准曲QC

测量测量信号[计数]，MP批次cobase0

0100200300400500600700800PlGF[pg/mL]，校准品样本，值指定C常规样Cal常规样

法，例如客户

QC天 样本中的

选定测量方法2与选定测量方法10

y=0.983x2.267r=0.98790100200300400500600700800PlGF[pg/mL]，选定测量方法1，值指定70标准 标准 CalCal用于使用校准品样本校准固定测量方法的校准曲DQC固定测量方法与选定测量方法的比较F

y=1.017xy=1.017x2.789r=0.9997QCQC 固定测量方法与选定测量方法的比较E值指定

cobase0

PlGF[pg/mL]，校准品样本，值指定

00Gcobase

PlGF[pg/mL]，固定测量方法，值指定yy=1.005x0.004r=0.9941 PlGF[pg/mL]，选定测量方法1，值指定

8000 标准 标准化QC 常规测量方法与固定测量方法的比 值指定

精确度质控品的值指精确度质控品的指定值的发布包含两个方面。一是值的指定（包括试剂必须考虑应向客户提供最佳精确度水平，并且其精确度质控品应具备尽可能好的"值稳定性"。00

y=1.001x0.197r=0.9999 PlGF[pg/mL]，固定测量方法，值指定

诊断发展了一套符合这两个对立要求的理论。值分配时的第一步是在coase""的精确度控制品批次。以后将在每个仪器平台上和当前试剂标准化过程中测量精确度质控品。如果测定浓度系统地偏离指定值，则可能必须重新精确度质控品中识别出此效应，则可以通过对值执行特殊的重新指定

修正此基质效应。只可对来自诊断的精确度质控品执精确度质控品的控制范围用于向客户展示无瑕疵运行的免疫检测系统在）统的稳定性。值指定过程的另一结果是还必须包含公认精确度偏差（定义""的原理）74标准 标准 由于免疫分析基于环境中抗体和抗原之间的反应（试剂+样本）（每次测与任何化学/免疫反应一样，质量作用定律也适用于这种情况。对于免疫 抗体-抗

--抗体和抗原的结合强度。结合强度本身是不同力的组合。这些要是静电力、氢键、范德华力以及疏水力。这些不同的力将最终决定抗体-抗原复合体的结合强度以及测得的分析物含量，它们受基质的影响。在这里，"基质"可以表示反应混合物的成分，包括/血浆和试剂，它在任、离子强度、脂含量、代谢产物（交叉反应物）、蛋白质含量、清洁剂含量等（图。除了这些影响，已知还会发生系统相关的基质效应，例如，信号生成期间冷却作用的影响[国。

二硫化物结

CH3 R疏水 OOC R静电k1=缔合常k2=离解常

H…NH2 R范德华

氢结体浓原浓选定的影响因K[Ab–Ag]：体-抗原复合体浓蛋白质浓代谢物（交叉反应物 衡常温脂质浓同质质量作用定例如 K=高，表示牢固结离子强结合蛋-抗K=低，表示弱结清洁释放-抗图36：K为高值表示结合强度大，为低值表示结合强度小。

76基质效 基质效 这些基质效应可能致免疫分析统中个别样的反应同于大部分的天然 。如果此类样本是校准品或质控 ，这意味着在值指定过程中，在不同的试剂或分析系统中为校准品或质控品指定了不同的值，而的浓度保持不变。在校准品和质控品的反应中偶尔观测到的这些系统性偏差，可通过基质质量得到解释，要么是人造基质（基于缓冲液），要么是处理过的基质。在外部质量方案的检测样本中也

在这一节中，我们回顾了管理背景，并了一些计算指定校准品和质在测量不确定度的概念中，可溯性是一个非常重要的方面。可溯性表示测量结果或标准值的属性，根据该属性，可以通过具有规定不确定度的完整比较链，与规定的参考标准通常为国家或国际标准）建立关联。事实上，相关效应随着校准链向下转移到商品校准品，从而使不确定度增大。参见。某些情况下，仅提供有较次的参考物，而在其他情况下，生产厂家然而，生产厂家在任何情况下都必须确保其产品具有稳定的校准水平。。78基质效 可溯性和不确定 质控参天冬氨酸转氨酶方质控参天冬氨酸转氨酶方 ）；校准品 方法方法和材原 可替代 稳定参考方参考方参考参考新 （单：2 ：-70商品校准商品校准 商品质控：2商品质控：2-

国际推荐参考方法 不适 不适 ：2-8℃，仅进行一 对临床样本的改变最 确立冻/融稳定性。保存期 小，确立了基本的可 天 可能存在的最小偏差 对比临床样本，确立 了基本的可替代性天 无高浓度的稳定天 可能存在的最小偏 确立了30个月的实时稳 对比临床样本，确立 统计方统计方表2：天冬氨酸转氨酶检测的标准化传递方80可溯性和不确定 可溯性和不确定 原原 可替代 稳定工作校准品参工作校准品参考方：->12ng/mL天 ，添加了分析

国际推荐参考方法 在内部标准操作规程 与临床样本一样，要 确立冻/融稳定性。中，天然 对天然单一供体 常用于校准曲线 样本进行分割 商品校准 商品校准：女 混合样本，添加了睾酮，冻：2-

CalSet用于当前睾酮分析

参考标准化中显示的可替代性

实时稳定性：18个商品质控商品质控统计方：2-统计方Konnert和Berding，2004

作为冷冻干产物实现 参考标准化中显示出 18个月，2-8℃时保稳定性，分析物的通 最后，我们要介绍材料的可替代性。首，有必要回顾校准的定义："校准是一系列操作，用于在指定条件下，确定测量仪器或测量系统指示的"。事实上，在校准时，我们使用校准品得出关于医学样本可能在化学上不同于校准品的结论。因此， 须考虑要将材料的可替代性定义为"…材料通过给定的一组测量程序得到的结果与测量值之间的数值关系（预定测量相同的数量），与将相同程序应用于程序预期适用的材料类型所得到关系期之的数关的相程…"。此定基标准，反映了使用不同于待测 的校准品校准系统的问题的复杂性。在化学方面，材料可替代性所涉及的关键问题是基质效应。基质效应与样本的某种性质（非被测对象）对被测对象的测量产生的影响（按照规定的测量方法），以及对被测对象的测得值的影响有关。基质效应是异质免疫分析技术中众周的问，在上中行详细述。

了 测量的不确定82可溯性和不确定 可溯性和不确定

在报告不确定度时，通常使用扩展不确定度而不是标准不确定度。扩u(q)

sd(q) 1n(q√n1

不确定度用大写字母U表示，并且在设置时，应使区间X±U包含不确定u≡计算组合的测量不确定两个统计学上独立的随量q1和q2的组合测量不确定度uc等

定度获得扩展不确U=k 本节提供关于评估常 的测量不确定度的指导信息。为确保文尽可能简明扼要，因此将细节和数学内容限制在了最低水平。请查阅文献和管理文件了解 息。uc(y)=√u2y=q1+

u2

不确定度、方差和偏在估计总体不确定度时，可能必须考虑每个不确定度来源并分别对 √ u(y) c2·u2√

以便得出该来源的作用大小。影响不确定度的每个独立因素被称为不确偏倚应可忽略，或者应尽可能进行修正。对于修正后的偏倚以及未修正的偏倚，与它的测定相关的不确定度是总体不确定度的重要部分，同样应予以考虑。y=f(q,q,...,q),c=y,iq1 qi84可溯性和不确定 可溯性和不确定 常 在本例中，我们只着眼于测量过程，不包括分析前因素和生物必要时，可以在第二步中加入对于扩展不确定度，我们使U=kuc，其中k=

而对于组合不确定度 u2(pre u2其中测量过程的分析因素包u2(a)=u2(mrx)u2(cal) u2(reg_sb) u2(reg_lot)u2(inst)u2(day)u2(run) u2(rep)符号说U扩展不确定组合不确定生物变异校准总试剂批结扩展因组合标准不确定基重a分分析校准曲校准曲值水采采（患者（患者（处理（处理仪标准化过图38：常规医 标准化过

校准

测量不确定度分量的确样本和数据来为了估计定义的测量方法的总测量不确定度，我们需要分析构成总不确（I是选择浓度处于或接近医学决定水平的样本。来自此样本的数据应覆盖特定时间段，并且应反映所有相关分量（例如校准品、仪器、日期、批次和样本基质变式对于样本，此类数据可能难以收集。或者，也可以使用来自质控品的数据和/或长期质控数据。建议在合理的时间段内使用单一质控品批次，以确保这些数据中考虑了上述所有不确定度分量。然而，如果在86可溯性和不确定 可溯性和不确定 常规方参考方参考值单（丙氨酸原始配方氨酶，根(2002IFCC5手工测酸吡哆醛激活试常规方参考方参考值单（丙氨酸原始配方氨酶，根(2002IFCC5手工测酸吡哆醛激活试（α-淀粉工测ID-或任何统 uad(cal)=√s2·u2 s)2·u2符号说

1此不确定度（扩展不确定度；k=2）的计算依据是《测量不确定度表示指南（GUM；1993）。在估计单一标准不确定度时

4ID-MS同位素稀释–质谱分析5IFCC=国际临床化学和实验 合表4：cobasc501上 C.f.a.s.校准值的可溯性和不确定度s=calBcalB88可溯性和不确定 可溯性和不确定 确保分析质量的一个重要方面是地规划标准化程序。例如，应基于在通过单一检测样本时，结果可能包含随机误差和偏倚误差项。为了理解这些误差分量的来源，我们知道典型样本读数会受到样本和校准品测量中的随机误差以及源自校准品指定值的系统误差的影响。图形

在标准化阶段，