血清学检验技术-凝集试验（动物疫病检验技术）

布氏杆菌病试管凝集试验公牛坏死性睾丸炎，实质化脓灶，鞘膜囊积多量渗出物布氏杆菌病概述流产的母牛从阴道排出污灰白色或棕红色有恶臭的分泌物布氏杆菌病概述母猪子宫内死胎、化脓性子宫内膜炎变化布氏杆菌病概述布氏杆菌病试管凝集试验方法：在试管中进行A特点：准确、耗时B用途：定量试验，如诊断布氏杆菌病，测定抗体的凝集价。C试验原理常用已知一定量和抗原（细菌、细胞等）与系列受稀释的待检血清混合，在保温放置后观察结果，以判定待检血清有无相应的抗体及其效价。试管凝集试验为半定量试验方法，在微生物学检验中常用已知细菌作为抗原液与一系列稀释的待检血清混合，保温后观察每管内抗原凝集程度，通常以产生50%凝集现象的最高稀释度作为血清中抗体的效价，亦称为滴度。布氏杆菌病试管凝集试验布氏杆菌病试管凝集试验试验仪器及材料灭菌采血清试管、灭菌小试管、小试管架、清洁灭菌吸管(0.2ml、lml、5ml、10ml)、0.9％石炭酸生理盐水、布鲁氏菌试管凝集抗原、玻璃笔。布氏杆菌病试管凝集试验布氏杆菌病试管凝集试验试验操作方法记录反应抗原完全凝集而沉淀，液体完全遣明，以++++表示；75%抗原被凝集而沉淀，液体浮悬25％抗厚而稍浑浊，以+++表示；50％抗原被凝集而沉淀，液体浮悬50%抗原而半透明，以++表示；25％抗原被凝集而沉淀，液体浮悬75％抗原而较浑浊，以+表示；抗原完全不凝集，以-表示。布氏杆菌病试管凝集试验判定标准羊、猪的血清疑集价1：50以上阳性，1：25为可疑；大家畜和人的血清凝集价1：100以上为阳性；1：50为可疑。可疑反应家畜，再过半个月后重检。重检如仍为可疑可依据畜群具体情况判定，即畜群中留有其他阳性病畜则该可疑牲畜判为阳性，若畜群中从无阳性畜，则判为阴性。布氏杆菌病试管凝集试验鸡白痢平板凝集试验鸡白痢概述鸡白痢概述鸡白痢概述鸡白痢全血平板凝集试验01方法：在玻片或玻板上进行02特点：简单、快速03用途：定性试验，用于细菌鉴定、血型鉴定、鸡白痢检验等。鸡白痢全血平板凝集试验试验原理颗粒性抗原与相应抗体结合后，在有电解质存在时，互相凝聚成肉眼可见的凝集小块。参与反应的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。鸡白痢全血平板凝集试验试验仪器及材料待检鸡、清洁玻璃板、玻璃铅笔、不锈金属丝环、针头、乳头滴管、酒精灯、吸管、酒精棉球、火柴、鸡白痢全血平板凝集抗原和血清凝集抗原、鸡白痢阳性血清和阴性血清、恒温箱等。操作过程将玻璃板擦试干净，用玻璃铅笔划成1.5-2cm的小方格，并编号。鸡白痢全血平板凝集试验操作过程将抗原充分振荡后，用滴管吸取1滴(约0.05m1)，于玻板的小方格里，同时设定阴、阳性对照。鸡白痢全血平板凝集试验操作过程以针头刺破被检鸡冠或翼下静脉，用不锈钢丝环取直一满环(约0.02～0.04ml)，立即与小方格内抗原混匀，扩散至2cm，置20℃下或在酒精灯上微加温，2min内判定结果。鸡白痢全血平板凝集试验全血平板凝集反应判定标准鸡白痢全血平板凝集试验A本试验只适用于2月龄以上鸡的检疫，对2月龄以下的鸡敏感性差，不适用。B反应应在20℃左右进行，检疫开始时．必须用阳性和阴性血清对照。C操作用过的用具（如采直针、不锈钢丝环等），经消毒后方可再用。D操作前应认真阅读生物制品厂本抗原使用说明书，按规定进行。鸡白痢全血平板凝集试验注意事项新城疫血凝与血凝抑制试验（一）鸡新城疫腺胃乳头出血，肌胃黏膜皱襞的脊出血新城疫概述鸡新城疫腺胃乳头出血，肌胃黏膜皱襞的脊出血新城疫概述鸡新城疫卵泡出血新城疫概述鸡新城疫临床症状新城疫概述病鸡呼吸困难，口腔内有粘液新城疫概述病鸡排绿色稀便新城疫概述新城疫血凝与血凝抑制试验试验原理有些病毒表面有血凝素，如禽流感病毒、新城疫病毒等，能与鸡、豚鼠、人等某些动物的红细胞表面受体结合，从而出现红细胞凝集现象，故可以来推测材料中有无该病毒的存在，称为病毒的血凝现象。试验仪器及材料普通托盘天平、普通离心机、微型振荡器（MH-2）、DRAGON微量移液器（0.005～0.05mL）、DRAGON微量移液器（0.1～1mL）、Thermo微量移液器（2～10mL）、板式微量移液器架、96孔V型血凝反应板、烧杯、禽用采血器、具盖塑料离心管、指型离心管、试管架、细记号笔、生理盐水、3.8%柠檬酸钠溶液、新城疫标准抗原75%酒精棉球、干棉球、标签纸、非免疫公鸡等。新城疫血凝与血凝抑制试验操作过程配制1%鸡红细胞悬液新城疫血凝与血凝抑制试验新城疫血凝与血凝抑制试验血凝试验（HA）血凝试验（HA）结果判定凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，称为该病毒的血凝价或血凝滴度。新城疫血凝与血凝抑制试验新城疫血凝与血凝抑制试验（二）新城疫血凝与血凝抑制试验试验原理有些病毒，如禽流感病毒、新城疫病毒等，能凝集某种动物的红细胞，故可以来推测材料中有无该病毒的存在。如有能凝集红细胞的病毒，其凝集性可为相应的抗体所抑制，这种抑制还有特异性，故病毒的血凝抑制试验，可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体，也可用已知血清来鉴定未知病毒。新城疫血凝与血凝抑制试验试验仪器及材料新城疫血凝与血凝抑制试验新城疫血凝与血凝抑制试验操作过程配制4单位病毒液血凝抑制试验（HI）新城疫血凝与血凝抑制试验试验结果判定在红细胞对照孔红细胞完全沉淀，即呈明显纽扣状沉到孔底，并且抗原对照孔红细胞完全凝集于孔壁时观察试验结果，只有当阴性血清与标准抗原对照的HI滴度不大于2log2，阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差在1个稀释度范围内，并且作用阴、阳性血清都不发生自凝的情况下，HI试验结果方判定有效。新城疫血凝与血凝抑制试验新城疫血凝与血凝抑制试验血凝抑制试验（HI）结果判定结合临床进行结果的分析一般认为鸡的免疫临界水平为1:8(成年)或1:16(雏鸡)，随地区不同而稍有差异。

鸡血清HI抗体效价高于1:16时可适当推迟新城疫免疫的时间，HI抗体效价在1:16以下须进行新城疫疫苗接疫种，在新城疫流行的地区或鸡场，鸡的免疫临界水平应稍提高。新城疫血凝与血凝抑制试验结合临床进行结果的分析鸡群的HI抗体水平是以抽检样品的HI抗体效价(㏒2)的几何平均值表示的。如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价(㏒2)为8的有3份样品，为7的有5份样品，为6的有2份样品，它们的平均值为（8*3+7*5+6*2）/（3+5+2）=7.1平均水平在4(10g2)以上说明该鸡群为免疫鸡群。新城疫血凝与血凝抑制试验结合临床进行结果的分析大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于0.1%一0.5%，小型鸡群，抽样率应有所增加，一般认为理想的抽样率应为2.0%。鸡群接种新城疫疫苗后，经2-3周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示鸡的免疫应答良好，疫苗接种成功，若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。新城疫血凝与血凝抑制试验结合临床进行结果的分析若有10%以上的鸡群出现11(10g2)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒感染。若监测鸡群的免疫水平，用血凝抑制滴度在4(10g2)的鸡群保护率为50%左右，在4(10g2)以上保护率达90-100%，在4(10g2)以下的非免疫鸡群保护率约9%，免疫过的鸡群为43%。新城疫血凝与血凝抑制试验第一点红细胞使用前请摇匀；第二点用枪加样摇准确，尽量不要有气泡；第三点结果判定要有耐心；第四点HA和HI务相混。新城疫血凝与血凝抑制试验注意事项凝集反应概述01凝集反应的概念凝集反应的概念细菌、红细胞或表面带有抗原的乳胶颗粒等不溶性的颗粒抗原，当与相应的抗体结合，在有电解质存在时，抗原与抗体结合形成凝集团块，即称为凝集反应。凝集反应中：抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。02凝集反应的原理通常细菌和红细胞等颗粒性抗原在悬液中带弱负电荷，周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负离子层，构成一个双离子层，使颗粒相互排斥。在有电介质存在的条件下，当特异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的电位，而使颗粒凝集在一起。凝集反应的原理凝集反应的发生分两阶段抗原抗体的特异结合。在电解质的参与下，出现可见的凝集颗粒。凝集反应的原理03凝集反应的分类直接凝集试验

细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集。凝集反应的分类试管凝集试验玻板凝集试验凝集反应的分类试管凝集试验

方法：在试管中进行。特点：准确、耗时。用途：定量试验，如诊断布病，测定抗体的凝集价。玻板凝集试验

方法：玻璃板或瓷片上进行。特点：简单、快速。用途：定性试验，如细菌鉴定、血型鉴定等。乳胶凝集反应

将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，出现的特异性凝集现象。凝集反应的分类正向间接凝集反应

凝集反应的分类反向间接凝集反应用特异性抗体致敏载体以检测标本中的相应抗原。

凝集反