高效液相色谱的特点与仪器课件

第三章

高效液相色谱分析一、高效液相色谱仪HPLC二、高效液相色谱法的特点featureofHPLC三、流程及主要部件generalprocessandmainassemblyofHPLC第一节

高效液相色谱的特点与仪器highperformanceliquidchromatographfeatureandinstrumentofHPLC2023/5/27一、高效液相色谱法的特点

特点：高压、高效、高速高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。2023/5/27二、液相色谱仪器

highperformanceliquidchromatograph2023/5/27液相色谱仪（2）2023/5/27液相色谱仪（3）2023/5/27液相色谱仪（4）2023/5/27液相色谱仪（5）2023/5/27三、流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC1.流程2023/5/271．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）2．高压泵（输液泵）3．进样装置4．色谱柱——分离5．检测器——分析6．废液出口或组分收集器7．记录装置2023/5/272.主要部件(1)高压输液泵

主要部件之一，压力：150～350×105

Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性2023/5/27(2)梯度淋洗装置外梯度:

利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。内梯度:

一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。2023/5/27洗脱方式1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱）以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵）类似GC的等温度洗脱2）梯度洗脱：在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例即不断改变其极性（两个泵）适于分析极性差别较大的复杂组分类似GC的程序升温（沸程较长样品）2023/5/272023/5/27(3)进样装置

流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：2023/5/27(4)高效分离柱

柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。2023/5/27(5)液相色谱检测器

a.紫外检测器应用最广，对大部分有机化合物有响应。

特点：灵敏度高；线性范围宽；流通池可做的很小（1mm×10mm，容积8μL）；

对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。

2023/5/27b.光电二极管阵列检测器紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。2023/5/272023/5/27光电二极管阵列检测器2023/5/27c.示差折光检测器

（differentialrefractiveindexdetector）

除紫外检测器之外应用最多的检测器；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；

通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；偏转式、反射式和干涉型三种；2023/5/27示差折光检测器2023/5/27d.荧光检测器

（fluorescencedetector）

高灵敏度、高选择性；对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；2023/5/27请选择内容第一节高效液相色谱的特点与仪器featureandinstrumentofHPLC第二节基本原理与主要分离类型basicprincipleandmainseparatingtype第三节固定相与流动相stationaryphaseandmobilephase

第四节影响分离的因素与操作条件选择factorsinfluencedseparationandcho