微生物限度检查方法验证方案

页 码：第1页，共12页文件编码：Z起草部门：质量治理部 版本号：01标题

起草时间颁发部门

质量治理部

生效日期分发部门质量治理部[]生产部[]设备部[]物料部[]份数[ ]行政人事部[]销售部[]财务部[]变更记载：修订号 批准日期 执行日期 变更缘由页码：第2页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01页码：第2页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-0101版本号：题目：微生物限度检查方法验证方案微生物验证明施小组主要成员：部门部门质量治理部质量治理部质量治理部质量治理部质量治理部姓名职位验证领导小组审查汇签：姓名部门职务或岗位 签字日期质量治理部企业负责人经理生产部设备部经理经理质量治理部质量治理部物料部QCQA经理概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时，应进展方法的验证，以证明所承受的方法适合于该药品的微生物限度检查。所以对感冒灵颗粒微生物限度检查进展方法的验证。目的为了保证检验质量，对所用的检验方法必需经过验证，才能确保检验结果的准确牢靠。适用范围本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学确实认与验证。验证人员职责验证小组:组长：质量治理部经理成员：QC主管、微生物操作人员职责及分工：QC主管组织起草该验证方案，并组织实施该方案；微生物操作人员具体实施该方案；质量治理部经理帮助和监控该方案的实施。验证方案批准后，应进展培训。由验证小组指定人员负责对小组成员及和验证有关的人员进展培训。验证依据中国药典20231105“110”感冒灵颗粒微生物限度检验方法验证风险分析序工程 潜在的风险分析

潜在的失败后

缘由分析 严峻程度

发生频

风险等号 果 次 级 实行的验证方1 案编写人员

编写人员未依据《ZYCWJ-SOP-10008-01微生物限度检查法标准操作规程》编写方案。

验证方法错误，导致验证结果不行靠。

人员培训考核不到位

F2 P3 ALARP

对验证编写训和考核，编操作不正确，

人员培训

依据验证方试验人2员

试验人员未依据编写的验证方案进展操作

导致试验结果

考核不到

F2 P3 ALARP

训，培训合不行靠 位 作培育箱、净化工

仪器未经校验或不在校

导致检验环境和培育环境不符合要求，最

使用人员使用前未

F2 P3 ALARP

设备人员使验期内。

对校验期

进展检作台

仪器未经校验或不在校

终导致验证失败。导致试验结果

进展检查

F2 P3 ALARP

设备人员使验期内。

消灭特别。

进展检比照培育查用培育定菌

比照培育基、检查用培育基、检定菌失效

对治理人员严格F2 P3 ALARP 《ZYCWJ-SM培育基及检程》进展管页码：第5页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01页码：第5页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-0101版本号：题目：微生物限度检查方法验证方案使用人对有使用人对有认培育基、 准培育基、缓冲液、消毒 对试验人员缓冲液、 导致验证失败冲 F2 P3 ALARP剂配制不正确 训消毒剂 剂灭菌器已灭菌器具和干净服过 洁 使用前对已具干净 导致验证失败 F2 P3 ALARP效期 进 干净服有效服1验证方确； 经法不正 导致验证失败 F3 P3 ALARP 对验证方案2、未严格依据验证方 准确案开展验证工作1把握菌检验结 试验组无菌落生长，供 承受培育基导致验证失败 用 F2 P3 ALARP果不合 试品可能有抑菌性 抑菌2格10试验组各试验组回收率低于或导致验证失败1F2P3ALARP承受培育基菌种回菌种回高于标准范围抑菌收率不达标2样品储样品储存环境、温度异导致样品被污严格把握样11 当 F2 P3 ALARP存环境 常。 染或失败 的温1.每天定区的2.依据SO1干净区净区进12 特别 导致验证失败 F2 P3 ALARP环境 洁 3.严格按2、干净区环境被污染； 监测管干净区6.1结果分析：通过以上实行的措施，风险均把握在可承受范围内。人员培训确认表培训时间培训内容培训对象培训讲师

培训地点主办部门被培训人员签名序号 姓名 部门及岗位QA主管QC主管设备部经理设备治理员生产部经理质量治理部QC检验员质量治理部QC检验员质量治理部QC检验员质量治理部QC检验员验证方法6.1仪器及设备名称仪器及设备名称仪器及设备名称型号生产厂家是否校验备注生化培育箱是□否□页码：第8页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01页码：第8页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-0101版本号：题目：微生物限度检查方法验证方案恒温培育箱恒温培育箱是□否□净化工作台是□否□超净工作台是□否□立式压力消毒器是□否□立式压力灭菌器是□否□6.1验证用样品： 感冒灵颗粒 规格： 批号：感冒灵颗粒 规格： 批号：感冒灵颗粒 规格： 批号：6.2．验证用培育基：胰酪大豆胨琼脂培育基 生产厂家： 批号： 配制批号：沙氏葡萄糖琼脂培育基 生产厂家： 批号： 配制批号：养分琼脂培育基 生产厂家： 批号： 配制批号：胰酪大豆胨液体培育基 生产厂家： 批号： 配制批号：沙氏葡萄糖琼脂培育基 生产厂家： 批号： 配制批号：麦康凯液体培育基 生产厂家： 批号： 配制批号：麦康凯琼脂培育基 生产厂家： 批号： 配制批号：验证用菌种:金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕、大肠埃希菌〔CMCC(B)44102〕、枯草芽孢菌〔CMCC(B)63501〕、白色念珠菌〔CMCC(F)98001〕、黑曲霉菌〔CMCC(F)98003〕菌液制备：6.4.430℃~3518～241ml9ml0.9%氯化钠溶液中，1010－5～10－7100cfu/ml20~252~31ml9ml0.9%氯化钠溶液中，1010－5100cfu/ml将黑曲霉菌斜面的颖培育物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培育基上，20〜25℃培育5〜73-5ml0.05%〔ml/ml〕800.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后，承受适宜方法吸出孢子悬液无菌试管内用含0.05%〔ml/ml〕聚山梨酯800.9%无菌氯化钠溶液或pH7.01ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。上述菌悬液制备后假设在室温下放置，应在22~824供试液制备:10g，参与pH7.0100ml1：10计数方法的验证：需氧菌、霉菌及酵母菌计数〔平皿法〕所加菌液的体积不得超过供试液体积的1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进展计数方法适用性检查。试验组取上述制备好的供试液，参与试验菌液、混匀，使每1ml供试液或每张滤膜过滤的供试液中含菌量不大于100cfu。9.9ml10000cfu0.1ml1ml15～20ml，混匀，凝固，于30～35℃3天点计菌落数。平行制备2个平皿。9.9ml10000cfu0.1ml1ml15～20ml30～35329.9ml10000cfu0.1ml1ml15～20ml30～3532个平皿。9.9ml10000cfu0.1ml1ml15～20ml30～3532个平皿。9.9ml10000cfu0.1ml1ml15～20ml30～3532皿。9.9ml10000cfu0.1ml1ml15～20ml20～2552个平皿。9.9ml10000cfu0.1ml1ml15～20ml20～2552皿。菌液组取小于100cfu的铜绿假单胞菌菌悬液、金黄色葡萄球菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液菌悬液、黑曲霉菌悬液各1ml，注入平皿中，马上倾注胰酪大豆胨琼脂培育基约15～20ml，混匀，凝固，30～3532取小于100cfu的白色念珠菌菌悬液、黑曲霉菌悬液各1ml，马上倾注沙氏葡萄糖琼脂培育基各15～20ml20～2552供试品比照组页 码：第10页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01版本号： 01题 目：微生物限度检查方法验证方案7.4.17.4.11ml15～20ml45℃胰酪大豆胨琼脂培育基和沙氏葡萄糖琼脂培育基，混匀，凝固，胰酪大豆胨琼脂培育基30～35320～25℃527.4计算公式：稀释剂比照组的回收率=稀释剂比照组菌落数-供试品比照组菌数×100%菌液组菌落数 试验组菌数回收率=试验组菌落数-供试品比照组菌数×100%菌液组菌落数菌液组菌落数7.5判定标准：试验组、稀释剂比照组的菌数回收率应在0.5～2之间。假设各试验菌的回收率均符合规定，照所用的供试液制备方法及计数方法进展该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。7.6试验组别菌液组菌数试验组菌数供试液比照组 回收率〔%〕试验菌种 1号 2试验组别菌液组菌数试验组菌数供试液比照组 回收率〔%〕试验菌种 1号 2号 1号 2号金黄色葡萄球菌大肠埃希菌枯草芽孢杆菌黑曲霉白色念珠菌试验组别菌液组菌数试验组菌数供试液比照组 回收率〔%〕试验菌种 1号 2试验组别菌液组菌数试验组菌数供试液比照组 回收率〔%〕试验菌种 1号 2号 1号 2号金黄色葡萄球菌大肠埃希菌枯草芽孢杆菌黑曲霉白色念珠菌页码：第11页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01页码：第11页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-0101版本号：题目：微生物限度检查方法验证方案试验组别菌液组菌数试验组菌数供试液比照组 回收率〔%〕试验菌种 1号 2试验组别菌液组菌数试验组菌数供试液比照组 回收率〔%〕试验菌种 1号 2号 1号 2号金黄色葡萄球菌大肠埃希菌枯草芽孢杆菌黑曲霉白色念珠菌结果说明：把握菌检查方法验证〔1〕大肠埃希菌1：1010ml100ml1ml希菌液〔100cfu/ml〕为试验组；一瓶为供试品；另取一瓶100ml胰酪大豆胨液体培育基参与10ml无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液为阴性比照。1ml100ml麦康凯液体培育基内培育，42～4424～48凯液体培育物划线接种于麦康凯琼脂平板上30～3518～72步骤试验组阳性比照组阴性比照组胰酪大豆胨液体培育基，30~3518~24步骤试验组阳性比照组阴性比照组胰酪大豆胨液体培育基，30~3518~24小时麦康凯液体培育基，42~4424~48小时取麦康凯液体培育物划线接种于麦康凯琼脂平板上，30~3518~72小时。假设麦康凯琼脂培育基平板上有菌落生长，应进展分别、纯化及适宜的鉴定试验,确证是否为大肠埃希菌；假设麦康凯琼脂培育基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判未检出大肠埃希菌。表11大肠埃希菌常规法验证结果2# 批号：步骤步骤试验组阳性比照组阴性比照组麦康凯液体培育基，42~4424~48小时取麦康凯液体培育物划线接种于麦康凯琼脂平板上，30~3518~72小时。假设麦康凯琼脂培育基平板上有菌落生长，应进展分别、纯化及适宜的鉴定试验,确证是否为大肠埃希菌；假设麦康凯琼脂培育基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判未