高考生物一轮复习第2讲微生物的培养与应用教案新人教版必修

--1-2讲微生物的培育与应用[考纲要求]1.微生物的分别和培育。2.培育基对微生物的选择作用。3.某种微生物数量的测定。4.微生物在其他方面的应用。考点一微生物的试验室培育1．培育基(1)概念：人们依据微生物对养分物质的不同需求，配制出供其生长生殖的养分基质。(2)pH、氧气以及特别养分物质的要求。(3)种类：依据物理性质可分为液体培育基和固体培育基。2．无菌技术(1)含义：指在培育微生物的操作中，全部防止杂菌污染的方法。(2)关键：防止外来杂菌的入侵。(3)不同对象的无菌操作方法：[连线]提示：①②⑥—b—Ⅰ、Ⅱ③④⑤—a—Ⅲ、Ⅳ3．大肠杆菌的纯化培育(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培育基①操作步骤：②倒平板的方法及留意事项：a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。c．丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进展。(2)纯化大肠杆菌的方法①纯化培育原理：想方设法在培育基上得到由一个细胞生殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。②纯化大肠杆菌的关键步骤：接种。③常用的微生物接种方法有两种a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培育基外表连续划线的操作，将聚拢的菌种逐步稀释分散到培育基的外表。b．稀释涂布平板法：是将菌液进展一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的外表，进展培育。(3)菌种的保存方法①对于频繁使用的菌种，可以承受临时保藏的方法。②对于需要长期保存的菌种，可以承受甘油管藏的方法。推断正误：培育基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐(√)在配制培育基时，除满足养分需求外，还应考虑pH、O2及微生物对特别养分物质的需求(√)培育基分装到培育皿后才能进展灭菌(×)消毒的原则是既能杀死材料外表的微生物，又要削减消毒剂对细胞的损害(√)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培育基、接种环等)都可承受高压蒸汽灭菌法进展灭菌(×)平板划线法中每一次划线后要将接种环灼烧(√)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培育基外表形成单个菌落(√)消毒与灭菌的比较条件结果常用方法应用范围较为温顺的消毒 物理或化学仅杀死物体外表或内部的局部微煮沸消毒法巴氏消毒法日常用品不耐高温的液体化学药剂用酒精擦拭双手，用氯气消化学药剂用酒精擦拭双手，用氯气消方法生物消毒法毒水源灼烧灭菌法接种工具杀死物体内外所猛烈的理干热灭菌法玻璃器皿、金属用具灭菌 有的微生物，包化因素 高压蒸汽括芽孢和孢子 培育基及容器灭菌法工程 平板划线法通过接种环在琼脂固体培育基外表连续划线的操作，将聚拢的菌种逐步稀原理释分散到培育基上。在数次划线后培育，可以分别到由一个细胞生殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落可以观看菌落特征，对混合菌进展分优点离

稀释涂布平板法将菌液进展一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的外表，进展培育。在稀释度足够高的菌液里，聚拢在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培育基外表形成单个的菌落可以计数，可以观看菌落特征吸取量较少，较麻烦，平板不枯燥效缺点适用范围

不能计数适用于好氧菌

果不好，简洁集中适用于厌氧菌和兼性厌氧菌选择培育基与鉴别培育基的比较种类制备方法原理用途举例选择培育基培育基中参加某些化学物质依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计从众多微生物中分别所需的微生物参加青霉素分别得到酵母菌和霉菌依据微生物产生的某种鉴别培育基培育基中参加某种指示剂或化学药品代谢产物与培育基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变鉴别不同种类的微生物伊红美蓝培育基可以鉴别大肠杆菌化而设计1(1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是 、 。(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，觉察培育基上的菌落连成了一片，最可能的缘由是，为避免此种现象应当实行的措施是。(3)接种操作肯定要在火焰四周进展是由于。答案：(1)稀释涂布平板法平板划线法(2)菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌增大稀释倍数或每次划区域前先将接种环灼烧灭菌(3)火焰四周存在着无菌区域成分含量成分含量蛋白胨10.0g乳糖5.0g蔗糖5.0gKHPO2 42.0g显色剂(伊红美蓝)0.2g琼脂12.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL依据用途划分，该培育基属于 培育基，假设要分别能分解尿素的细菌，需对培养基做出的最关键的调整是 ，假设还需鉴定分解尿素的细菌，需做出的调整是 。从培育基的成分上看，大肠杆菌的同化类型为。该培育基能否用于分别筛选出大肠杆菌？为什么？。在试验室培育微生物时，获得纯洁培育物的关键是 ，紫外线可对空气进展灭菌的缘由是。某同学尝试纯化大肠杆菌，其中一个平板的菌落分布如上图，推想该同学接种时可能的操作失误是。(1)伊红养基；假设要分别能分解尿素的细菌，则需要保证培育基中以尿素为唯一氮源，马上蛋白胨换(2)大肠杆菌需要从培育基中获得碳源，因此其同化作用类型是异养型；由于表格中的培育基中的碳源种类很多，可供多种微生物生存，因此该培育基不能用于分别筛选出大肠杆菌。(3)微生物培育时，关键是防止外来杂菌的感染；空气中的细菌可用紫外线杀灭，其缘由是紫外线能让蛋白质变性，同时还能破坏DNA的构造。(4)由题图可知，接种时该同学承受的是稀释涂布平板法，但菌落比较集中，没有很好地分散开来，可能是涂布不均匀导致的。答案：(1)鉴别将蛋白胨换成尿素将伊红美蓝换成酚红(2)异养型不能，缘由是培育基中的碳源种类很多，可供多种微生物生存(3)防止外来杂菌的感染紫外线能使蛋白质变性，还能破坏DNA(4)涂布不均匀考点二微生物的筛选和计数土壤中分解尿素的细菌的分别与计数工程工程具体内容①能合成脲酶的细菌才能分解尿素试验②配制以尿素为唯一氮源的培育基原理的细菌数量①直接计数法(显微镜下用特定细菌计数板或血细胞计数板)统计试验流程

②间接计数法：稀释涂布平板法土壤取样→配制土壤溶液和制备培育基→系列稀释→涂布平板与培育→菌落计数分解纤维素的微生物的分别(1)纤维素酶C酶、C酶和葡萄1 x糖苷酶。②作用：C酶 葡萄糖苷酶纤维素1纤维二糖 → 葡萄糖Cx纤维素分解菌的筛选①原理：纤维素分解菌↓刚果 纤维素酶②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透亮圈来筛选纤维素分解菌。③培育基：以纤维素为唯一碳源的选择培育基。④试验流程土壤取样：富含纤维素的环境↓选择培育：用选择培育基培育，以增加纤维素分解菌的浓度↓梯度稀释：制备系列稀释液↓涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培育基上↓选择产生透亮圈的菌落分别纤维素分解菌所用的两种培育基比较分别纤维素分解菌的试验中先用选择培育基，再用鉴别培育基。①选择培育基为液体培育基，以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长。②鉴别培育基含琼脂，为固体培育基，细菌可在培育基上形成肉眼可见的菌落。刚果红染色法应用的就是鉴别培育基。结果分析与评价内容有无杂菌污染的推断选择培育基的筛选作用样品的稀释操作重复组

现象比照的培育皿中无菌落生长培育物中菌落数偏高菌落形态多样，菌落数偏高牛肉膏培育基上的菌落数目大于选择培育基上的数目2230～300板

结论未被杂菌污染被杂菌污染培育物中混入其他氮源选择培育基具有筛选作用操作成功假设选取同一种土样，统计结果应接近的结果推断正误：选择培育基可以鉴定某种微生物的种类(×)从物理性质的角度看，选择培育基多属于固体培育基(√)(3)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素(√)筛选能分解尿素的细菌所利用的培育基中，尿素是唯一的氮源(√)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培育基的pH降低(×)(6)在以尿素为唯一氮源的培育基中参加酚红指示剂，假设指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌(×)纤维素是构成植物细胞壁的主要成分，在纤维素酶的作用下，纤维素可以水解成葡萄糖(√)在筛选能分解纤维素的细菌的试验中，选择培育的目的是增大样品中目的菌株的浓度(√)刚果红可以与纤维素形成透亮复合物，所以可通过是否产生透亮圈来筛选纤维素分解菌(×)刚果红染色法只能在培育微生物的时候参加刚果红(×)筛选菌株(1)原则：人为供给有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻挡其他微生物的生长。(2)筛选分解尿素的细菌与分解纤维素的微生物的比较：土壤中分解尿素的土壤中分解尿素的分解纤维素的工程细菌的分别微生物的分别选择培以尿素为唯一氮源的以纤维素为唯一养基选择培育基碳源的选择培育基刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成鉴定 在培育基中参加酚红示剂，假设指示剂变红色复合物，当纤维素被分解后，培育方法红，pH上升，说明细菌能分解尿素基消灭以纤维素分解菌为中心的透亮圈特有代谢纤维素1x 纤维二糖 →葡萄糖苷酶脲酶22 2 2 3过程葡萄糖统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算肯定容积的样品中微生物数量。②方法：用计数板计算。③缺点：不能区分死菌和活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)①原理：当样品的稀释度足够高时，培育基外表生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推想出样品中大约含有多少活菌。②操作：a．设置重复组，增加试验的说服力与准确性。b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300③计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。1．(2023·湖北武汉期中)为获得果胶酶高产菌株，科研人员进展了以下分别、筛选、鉴定工作。KHPO2 4MgSO4KHPO2 4MgSO4NaNO3FeSO4琼脂0.1g0.5g3g0.01g2g15g1L科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中，震荡混匀，制成悬液。为获得较均匀分布的单菌落，还需要将悬液进展 ，用 法接种于固体培育基上。接种后的培育基 状态放入培育箱。选择单菌落数目适宜的培育基，参加肯定浓度的刚果红溶液(果胶与刚果红结合后显红色)，一段时间后观看并比较菌落和 直径的比值，筛选果胶酶高产菌株。将获得的菌株进展液体培育后，从培育液的(填“上清液”或“沉淀物”)获得粗提的果胶酶。将肯定量的粗提果胶酶与适量果胶溶 与等量果胶溶液混合，作为试验的比照。(1)依题意可知：该试验的目的是分别果胶酶