血细胞分析的质量控制

血细胞分析的质量控制2009.10.201第一页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.202ISO15189的技术要素部分将医学实验室全过程分为三部分:分析前质量管理分析中质量管理分析后质量管理第二页，共五十页，编辑于2023年，星期一临床医师反馈信息参加室间质评室内质控实验用复检检查仪器设备血细胞分析仪的性能验证配套试剂方法选择人员五素质思想、文化技术、心理身体。人员稳定性工作环境安静、整洁实验室管理室内复核保留标本运送报告登记填写报告分析后质量评估分析中质量控制分析前质量保证检查病人申请化验病人准备标本采集标本处理标本运送分析测定实验质量保证系统实验质量保证系统2009.10.203第三页，共五十页，编辑于2023年，星期一1

分析前的质量控制标本采集的质量控制采血试管：目前多采用真空采血管。抗凝剂及比例：EDTA－K2，l.5mg可抗凝0.5~15ml血液，抗凝剂浓度过高，易造成细胞外液高渗状态，影响细胞的正常形态。抗凝剂浓度过低，起不到抗凝作用，血液中易产生凝块。采血：采用静脉血。采血后标本的处理及放置时间2009.10.20第四页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.205仪器工作环境无尘无磁场静电干绕15~30度第五页，共五十页，编辑于2023年，星期一2分析中的质量控制试剂仪器室内质量控制仪器运行状态纠正病理因素对结果干扰2009.10.206第六页，共五十页，编辑于2023年，星期一血细胞分析仪的校准血液分析仪校准的一般要求血细胞分析仪的性能验证校准物校准方法多台血细胞分析仪校准多台血细胞分析仪比对2009.10.207第七页，共五十页，编辑于2023年，星期一血液分析仪校准的要求为了保证检测结果的准确性，要求对每一台血液分析仪进行校准。仪器安装时必须由厂家进行校准并提供校准记录，否则不能用于临床标本的检测。建立适合本实验室使用的血液分析校准程序并写成文件。内容包括：使用校准物的溯源性、来源、名称及其保存方法；校准的具体方法和步骤；何时要求进行校准、由何人负责实施等。半年内至少进行一次校准。若仪器发生故障，大修或大保养后仪后、室间室内质控超出范围提示有系统误差时应及时进行校准。2009.10.208第八页，共五十页，编辑于2023年，星期一血细胞分析仪的性能验证精密度

指重复测定中个次试验结果彼此接近程度。常用

不精密度即标准差（SD）或变异系数（CV）来表示，

评价时应注意用高、中、低新鲜全血进行评价。携带污染率

指含量高的标本对含量低的样本所产生的影响。

总重复性随机取样本20份，分即刻、2小时及4小时测定，统计学分析。2009.10.20第九页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2010线性范围测定定值与稀释倍数成线性关系。范围越广越理想，至少涵盖正常范围及常见的病理范围。仪器的参考范围验证静脉与手指血、自动与手动模式验证第十页，共五十页，编辑于2023年，星期一白细胞分类评价重复性：多次测定同一份血液标本是否得到非常近似的结果。取一份抗凝静脉血，重复测定11次，弃去第一次，计算CV值。准确性：即与“金标准”显微镜下分类结果的相关程度。取静脉血10份进行仪器测定，重复2次，取均值。同时推4张血片，选4个素质好技术水平高的技师，每人每片油镜分类200个细胞，共计800个白细胞，计算均值，与仪器进行相关性比较。2009.10.2011第十一页，共五十页，编辑于2023年，星期一校准物

校准物的来源

来自本仪器的配套校准物。来自正常人新鲜血，但定值要求直接或间接地

溯源至国际标准。

新鲜血作为校准物的定值

直接溯源至国际标准的定值方法：可使用血细

胞分析的参考方法定，但要求建立参考方法的

难度较大，在临床实验室难以实施。间接溯源至国际标准的定值方法：取新鲜血用

二级标准检测系统或规范操作的检测系统。2009.10.20第十二页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2013二级标准检测系统：直接溯源至参考方法；具备较完善的质量保证措施；与国外具有权威性的参考实验室定期进行比对的检测系统。规范操作的检测系统：使用配套试剂；用配套校准物定期进行仪器校准；规范地开展室内质量控制；参加室间质量评价成绩优良；人员经过培训。第十三页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2014校准物的选择有证标准物质仪器配套校准物新鲜血作为校准物无配套校准物检测系统的实验室必须使用新鲜全血进行仪器校准第十四页，共五十页，编辑于2023年，星期一校准方法仪器的准备清洗仪器内部各通道及测试室。确认仪器的背景计数、精密度及携带污染在说明书规定的范围内时，才可进行校准，否则须查找原因，必要时请维修人员进行检修。2009.10.2015第十五页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2016校准物的准备配套校准物

①将校准物从冰箱内（2-8℃）取出后，要求在室温（18-25℃）条件下放置15分钟，使其温度恢复至室温。②检查校准物是否超出效期，是否有变质或污染。③轻轻地将校准物反复颠倒混匀，并置于两手掌慢慢

搓动，使校准物充分混匀。④将两瓶校准物合一起，混匀后再分装于2个瓶内。

第十六页，共五十页，编辑于2023年，星期一新鲜全血①用EDTA-K2为抗凝剂的真空采血管取健康人新鲜血10ml，每ml血需抗凝剂的浓度为1.5-2.2mg/ml。要求新鲜全血的Hb、WBC、RBC、Hct和Plt检测结果在参考范围内。将新鲜血混匀后分装于3个管内，每管的血量为3ml。②取其中1管，用二级标准检测系统或规范操作的检测系统连续检测11次，计算第2-11次检测结果的均值，以此均值为新鲜血的定值。③其他2管新鲜血作为定值的校准物，用于仪器的校准。2009.10.2017第十七页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2018对校准物进行检测取1瓶校准物，连续检测11次，第1次检测结果不用，以防止携带污染。仪器若无自动校准的功能，则将第2~11次的各项检测结果用手工记录在工作表格中，计算出均值，均值的小数点后数字保留位数较日常报告结果多一位。有自动校准功能的仪器可直接得出均值。第十八页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2019调整仪器计算各参数的均值与定值相差的百分数（不计正负号），计算公式：（均值-定值）/定值×100%参数百分数差异一列二列WBC

1.5%

10%RBC1.0%10%Hb1.0%

10%Hct

2.0%10%MCV

1.0%10%Plt3.0%15%第十九页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2020各参数均值与定值的差异全部等于或小于表中的第一列数值时，不需对仪器进行调整；各参数均值与定值的差异大于表中的第二列数值时，需请维修人员核查原因并进行处理；各参数均值与定值的差异在表中第一列与第二列数值之间时，需对仪器进行调整；若仪器无自动校准功能，则将定值除以所测均值，求出校准系数，将仪器原来的系数乘以校准系数即为校准后的系数，将校准后的系数办事入仪器更换原来的系数。第二十页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2021校准结果的验证将第2管未用的校准物充分混匀，在仪器上重得检测11次，去除第1次结果，计算第2-11次检测结果的均值，再次与表中的数值对照。如各参数的差异全部等于或小于第一列数值，证明校准合格。如达不到要求，须请维修人员进行检修。第二十一页，共五十页，编辑于2023年，星期一血液分析仪校准品定值完成比较一致偏倚校准不一致2009.10.2022第二十二页，共五十页，编辑于2023年，星期一多台血细胞分析仪校准

标本取健康人静脉血，用EDTA-K2抗凝，其在血液中的终浓度为1.5~2.0mg/ml全血。将血液在一容器中混匀后分装成三份。

第一份用于定值

第二份用于校准

第三份用于校准后验证

标本室温存放并于四小时内完成。2009.10.2023新鲜全血的定值第二十三页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2024方法参比仪器

血细胞仪开机清洗，本底通过后，取全血质控品（非校准物）在各台仪器上连续测定11次（第一次结果弃掉），计算仪器第2-11次WBC、RBC、HGB、MCV、PLT结果的均值，以此作为新鲜全血WBC、RBC、HGB、MCV、PLT的定值。第二十四页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2025新鲜全血的定值取第一份新鲜全血经充分混匀后参比血细胞仪重复测定11次，计算仪器第2-11次WBC、RBC、HGB、MCV、PLT结果的均值，以此作为新鲜全血WBC、RBC、HGB、MCV、PLT的定值。待校准血细胞分析仪的校准取第二份新鲜全血经充分混匀后，在另外待校准血细胞仪上重复测定11次，计算各仪器第2-11次WBC、RBC、HGB、MCV、PLT结果的均值及与新鲜全血的定值的偏差。第二十五页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2026计算公式为：偏差=（均值-靶值）/靶值×100%。按以下标准判断仪器判断仪器是否需要校准计算需要校准参数的校准系数，将新的校准系数输入仪器替换旧校准系数。校准系数的计算公式为：新校准系数=原校准系数×(靶值/仪器检测值)第二十六页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2027校准结果的验证

取第三份新鲜全血，在被定值校准的血细胞仪上重复测定11次，计算第2-11次结果的均值及与定值的偏差，检查结果其结果是否在允许范围内。判别仪器校准的标准参数WBCRBCHGBHCTMCVPLT百分数差异一列(%)1.5%1.0%1.0%2.0%1.0%3.0%二列(%)10%10%10%10%10%15%第二十七页，共五十页，编辑于2023年，星期一多台血细胞分析仪比对仪器比对的目的是通过多台仪器同时检测一批患者样本，用统计学方法对测定结果进行统计分析，了解仪器对患者样本检测结果误差（偏倚），并判断误差是否在临床允许范围内。2009.10.2028第二十八页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2029仪器比对的基本要求选择一台性能最好的仪器作为本室的“参比仪器”确定比对频率（至少半年一次）确定选择新鲜全血要求确定比对测定方法确定误差（偏倚）的允许范围对比对数据做统计处理第二十九页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2030简易比对方法：首先选择一台本实验室内技术性能较好的血球仪，该仪器应使用配套的校准物定期校准，每天有配套质量控制系统监控，并参加室间质评活动，各项目均在可接受性能范围之内。其他仪器分别与该仪器比较。随机选择一份新鲜全血样同时用各仪器按常规样本测定的方法，测定其各项参数，每份样本测定2次。第三十页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2031计算(按PT计算方法计算偏倚)

PT计算公式：

（参比测定值-比对测定值）/参比测定值×100%统计做图做散点图，转换成线性图，得出斜率b；截距a。并计算比对仪器对于确定仪器预期偏差估计值（Bc）。第三十一页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2032Bc=a+(b-1)Xc。

Xc临床参考范围的上、下限水平处斜率b

表示两仪器间测定标本时的比例误差截距a

表示两仪器间测定标本时的恒定误差b逾接近1、a逾接近０逾好第三十二页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2033标准比对方法（按EP-9文件）选择一台本实验室内技术性能较好的血球仪，该仪器应使用配套的校准物定期校准，每天有配套质量控制系统监控，并参加室间质评活动，各项目均在可接受性能范围之内。其他仪器分别与该仪器比较。第三十三页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2034每日随机选取8份样品（其中应包括高、中、低值），同时用各台仪器按常规样本测定的方法，测定顺序为1.2.3.4.5.6.7.8.8.7.6.5.4.3.2.1。以上步连续测定5天。共40个样本。记录与统计将每日结果记录，分别统计两台仪器40份样本双份测定的平均值、绝对值、两台仪器测定的平均值。第三十四页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2035制图（线性相关的目测检查）通过以上所作的图分析，如果两方法间的线性关系良好，则可以进行以下的分析；如果线性关系不好，则需重新进行分析。方法间离群点的检查参照EP9-A的方法计算方法间绝对差值（Eij）、平均绝对差值（E）和相对的绝对差值（Eij’）、相对的平均绝对差值（E‘）。如果同时超过E、E’值的四倍即绝对偏差界限值和相对偏差界限值称为离群点。大于界限2.5%的数据应从数据系列中取消。第三十五页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2036线性回归

EP9-A文件提供了成对数据系列（Yij-Xij）斜率b、截距a的计算。本室在实际计算时将数据录入EXCEL

软件进行自动处理计算。计算预期偏差第三十六页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2037结果分析如果两仪器间的结果比对符合要求则可以正常的发出实验结果，如果比对结果不符合，则应采取相应的措施来调整。第三十七页，共五十页，编辑于2023年，星期一血细胞分析仪的室内质控室内质控的目的

维持校准后仪器的准确性控制仪器的精密度适时监控判断常规结果能否发出2009.10.2038第三十八页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2039室内质控的要求确定所用质控物；质控物保存和处理方法；确定质控物使用频率；确定质控物的靶值和允许范围；记录质控数据并绘制质控图；分析失控原因采取纠正措施；回顾性分析；记录和保存质控数据。第三十九页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2040质控物的选择最好选择配套质控物。无配套质控物的可用国产质控物。有多台仪器实验室可选择一台仪器用配套质控品进行质控，其他仪器通过每天新鲜血比对达到质量控制的目的。利用临床样本开展浮动均值法的质控。第四十页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2041质控物的保存和处理方法质控物应置2~8℃保存（冰箱温度应监控）。用时从冰箱中取出，在室温下放置15分钟。测定前用正确手法充分混匀。测定后尽快放回冰箱冷藏。均值的确定质控物的厂家定值不可以作为靶值，使用新批号质控物时，应在3天内的不同时间与现批号质控物平行3天对质控物测定20次，在旧批号质控物每日测定均在控情况下，计算测定结果的均值作为靶值。第四十一页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2042允许范围的确定允许范围的确定根据使用的质控物不同而略有不同。配套质控物开展室内质控初期，实验室可暂定允许范围。第2个月用第1个月相应水平的CV值乘以质控物的靶值，可得出SD值；以后用几个月相应水平的平均CV乘以质控物的靶值，则可得出平均SD，以此来确定质控的允许范围。第四十二页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2043国产质控物，第1个月用定靶值测定的SD，以后用前1月SD或前2月平均SD。以±2SD作为警告限，±3SD为失控限。不能用说明书上的质控物测定范围。第四十三页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2044失控结果的判定如果测定结果在失控线（±3SD）以外，则为失控，应立即查找原因，必要时复查标本方可发出报告。如果测定结果在警告线（±2SD）外，提示警告，应引起注意继续观察。如5个测定结果在X的一侧，提示存在系统误差，应积极查找原因，但当天报告一般可以发出。第四十四页，共五十页，编辑于2023年，星期一失控后的处理措施当得到失控信号时首先应分析造成失控的误差类型是随机误差还是系统误差，然后再找出误差产生的原因，造成系统误差的因素如更换试剂批号，环境温度影响，仪器半堵孔，Hb灯电压低等等；造成随机误差的因素如气泡产生、电压不稳、质控物未混匀等。不是所有失控都具有相同的误差原因，有些问题在某系统上常见，在其他系统上很少出现，每个实验室应依据不同仪器的特性和使用经验按照由常见至少见，由易至难的原则制定出失控处理程序，并不断修改完善。2009.10.2045第四十五页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2046找出问题并纠正后重新测定质控品确认问题是否解决，必要时重新测定病人标本。填写失控报告并存档。第四十六页，共五十页，编辑于2023年，星期一2009.10.2047室内质控的回顾性分析室内质控数据的回顾分析可以帮助我们判断误差的来源，然后根据它们不同的特点采取相应的措施加以纠正