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文档简介

氨基酸及其分析检测技术氨基酸是蛋白质结构的基础氨基酸的种类及检测氨基酸组成分析氨基酸是蛋白质组成的基本单位氨基酸的结构氨基酸的种类及性质非极性R基氨基酸极性R基氨基酸带负电荷R基氨基酸带正电荷R基氨基酸氨基酸结构性质速记氨基酸的两性氨基酸携带电荷和环境pH的关系氨基酸之间通过肽键相连形成蛋白质肽键的形成氨基酸组成蛋白质肽平面结构肽的构成氨基酸的化学反应α—氨基参与的反应与亚硝酸反应：生成氮气，用于氨基酸定量分析和蛋白质水解程度测定与酰化试剂反应：氨基保护，N端标记，氨基酸微量分析烃基化反应：肽链N端标记脱氨基反应：氨基酸代谢α—羧基参与的反应成盐和成酯反应：氨基活化成酰氯反应：羧基活化脱羧反应：氨基酸代谢叠氮反应：羧基活化α—氨基、羧基都参与的反应茚三酮反应：显色反应，用于各种氨基酸的定性、定量分析。成肽反应：氨基酸之间缩合成肽氨基酸的常用分离检测方法纸层析薄层层析柱层析离子交换层析：利用离子交换树脂为载体，根据氨基酸之间不同的pI值进行pH值梯度洗脱分离高效液相色谱分析气相色谱分析■

层析分析的基本机制

極性相似的兩分子間，其親和力較強。極性

→

極性非極性

→

非極性LikeDissolvesLike几种分析法的比较色層分析原理：

極性不同的分子在不同的兩相中，會有不同的分佈比例膠体過濾法：

依分子量的不同來做分離純化離子交換法：

利用分子的表面帶電性質不同來進行分離親和層析法：

利用分子間的親和性大小不同來進行分離

HPLC及

FPLC：

改善介質的材質及容量可增加層析法的流速及解析力擔体++++++++++++++++樣本分子流動相固定相陽離子基團Counterion陰離子+■阴离子交換法

AnionExchange：■

膠体過濾法是一種

Partition層析法：樣本固定相流動相小分子被延滯大分子流出較快小分子大分子Stokesradius分子大小、形狀■液相層析管柱系統氨基酸组成分析基本步骤：水解、衍生、色谱

水解：5.7mol/L盐酸真空下110℃水解24h

气相水解法：抽真空并充氮气衍生：柱后反应法和柱前衍生显色剂：茚三酮、荧光胺、邻苯二甲醛等色谱分析几种常见的氨基酸分析方法

（1）茚三酮法：紫色化合物，570nm

（2）柱后荧光胺法：激发390nm，发射475nm

（3）邻苯二甲醛（OPA）法：强荧光，发射455nm

（4）PTC-AA分析法：PITC，碱性条件下

（5）Dansyl-Cl法：荧光产物

（6）Dabsyl

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