病原微生物试验室的分级课件

第3章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全

Sterilization&pathogeniclabbiosafetyMedicalMicrobiology第一节消毒灭菌等常用术语消毒(disinfection)

利用理化因素杀死物体或环境中病原微生物的措施。并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物灭菌(sterilization)

利用理化因素杀死物体上所有微生物的过程，包括芽胞。灭菌无菌第一节消毒灭菌等常用术语防腐(antisepsis)体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法清洁（cleaning）

是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。无菌(asepsis)

不存在任何活菌无菌操作（aseptictechnique)防止细菌进入人体或其他物品的操作技术第二节消毒灭菌的方法一、物理消毒灭菌法二、化学消毒灭菌法

物理消毒灭菌法（一）热力灭菌法干热灭菌法焚烧；烧灼；干烤；红外线湿热灭菌法巴氏消毒法；煮沸法；流动蒸汽消毒法；间歇蒸汽灭菌法；高压蒸汽灭菌法同一温度下,湿热比干热效果好热力灭菌法干热灭菌焚烧、烧灼、红外线干烤（160~170℃/2h）热力灭菌法湿热灭菌巴氏消毒法pasteurization用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物，而仍保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法。62℃30min或72℃30sec煮沸法30min流动蒸气消毒法间歇蒸气灭菌法流通蒸汽温箱过夜流通蒸汽温箱过夜(反复3次)高压蒸气灭菌法热力灭菌法高压蒸汽灭菌法121℃,1.05Kg/cm2(15个大气压),20min辐射杀菌法1、电离辐射X、β、γ射线原理:通过产生OH－、O2等活性游离基进行杀菌；通过破坏DNA的结构导致菌体死亡2、非电离辐射（1）紫外线

200~300nm(最佳：265~266nm)原理：导致DNA分子构型改变DNA复制出现差错用途：只用于空气和物品表面的消毒用时注意防护（2）日光（3）微波常用于对非金属器械的消毒滤过除菌法1、贝克菲滤器2、蔡氏滤器3、玻璃滤器4、膜滤器孔径0.22um-0.45um除菌空气过滤器:无菌棉花、活性炭及细玻璃纤维等可对空气进行过滤除菌滤器和层流室干燥与低温抑菌法抑菌和灭菌常用冷冻真空干燥法贮藏菌种迅速冷冻加入冷冻保护剂一般-20-70度化学消毒灭菌法常用消毒剂(disinfectants)的杀菌机制使菌体蛋白变性或凝固干扰微生物酶系统和影响其代谢损伤细胞壁、细胞膜消毒剂的主要类型及应用重金属盐类1%硝酸银氧化剂0.1%高锰酸钾、3%过氧化氢酚石炭酸醇类70-75%的乙醇醛类37%-40%福尔马林卤素类0.2ppm-0.5ppm氯,2.0%-2.5%碘酒酸碱类15%-25%生石灰、50%醋酸蒸发表面活性剂0.1%新洁尔灭染料菌2%-4%龙胆紫烷化剂50mg/L环氧乙烷医学上常用消毒剂类型作用机制及种类类别作用机制常用种类酚类蛋白变性，细胞膜损伤石炭酸醇类蛋白变性乙醇氧化剂氧化、蛋白沉淀高锰酸钾、过氧乙酸、碘酒重金属盐氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭染料干扰氧化、抑制繁殖龙胆紫酸碱类破坏膜、壁，蛋白凝固醋酸、生石灰烷化剂蛋白质、核酸烷基化环氧乙烷醛类与氨基结合,蛋白变性甲醛、戊二醛二、化学消毒灭菌法高效消毒剂high-level中效消毒剂intermediate-level低效消毒剂

low-level可杀死包括细菌芽胞在内所有微生物不能杀死芽胞，可杀死细菌繁殖体、真菌、大多数病毒可杀死大多数细菌繁殖体，对真菌、病毒杀灭力弱1.含氯消毒剂2.过氧化物消毒剂3.醛类消毒剂4.环氧乙烷1.含碘消毒剂2.醇类消毒剂1.季铵盐类2.氯已定3.高锰酸钾环氧乙烷消毒设备第三节消毒灭菌的运用一、医疗器械物品的消毒灭菌二、室内空气消毒灭菌三、手和皮肤的消毒四、黏膜的消毒五、病人排泄物与分泌物的消毒灭菌六、病人污染物品的消毒七、饮水的消毒八、环境的消毒一、医疗器械物品的消毒灭菌高危器械物品

用时需进入无菌组织的物品。所有这些物品都应该灭菌。

中危器械物品

用时不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采用消毒即可。低危器械物品

只接触未损伤皮肤但不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。一般用后清洗、消毒即可。快速周转的医疗器械二、室内空气消毒灭菌1.物理消毒法

紫外线照射（1.5W/m3，1h）最常用；滤过除菌：空气通过孔径小于0.2μm的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃2．化学消毒法

包括化学消毒剂喷雾和熏蒸过氧乙酸喷雾、熏蒸；过氧化氢喷雾；二氧化氯溶液喷洒；中草药点燃烟熏三、手和皮肤的消毒用肥皂和流动水经常并正确洗手病原微生物污染时应用消毒剂消毒。第四节影响消毒灭菌效果的因素一、微生物的种类二、微生物的物理状态三、微生物的数量四、消毒剂性质、浓度与作用时间五、温度六、酸碱度七、有机物第五节病原微生物实验室生物安全第五节病原微生物实验室生物安全生物安全（biosafety）是生物技术安全（safetyofbiotechnology）的简称狭义的指现代生物技术的研究、开发、应用及转基因生物可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生潜在的危害。广义的指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康及生态环境所产生的危害或潜在风险。病原微生物所致的安全问题，如安全隐患、生物武器、生物恐怖、重大传染病的暴发流行等，也是人类社会面临的最现实的生物安全问题病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散和防感染关于病原微生物实验室生物安全，我国法令包括对病原微生物的分类管理，对实验室的分级管理，实验室感染的控制以及监督和法律责任等

一、病原微生物的分类根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，病原微生物分为四类：第一类是指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。第二类是指能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。第三类是指能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类是指在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。二、病原微生物实验室的分级级别处理对象一级对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子。二级对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，具有有效的预防和治疗措施。三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施。四级对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗措施。二、病原微生物实验室的分级*摘自《WHO实验室生物安全手册》2004年版一、二级实验室不得从事高致病性病原微生物实验活动。三级、四级实验室从事高致病性病原微生物实验活动。从事高致病性病原微生物相关实验活动应当有２名以上的工作人员共同进行。在同一个实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从事一种高致病性病原微生物的相关实验活动。应有健全安全保卫制度。实验室工作人员应掌握实验室技术规范、操作规程、生物安全防护知识和实际操作技能。应有符合要求的防护用品，应建立健康档案；进行预防接种。实验室应有科学、严格的管理制度，定期对实验室设施设备、材料等进行检查、维护和更新，应对废水、废气以及其他废物进行合理处置，防止环境污染。

*摘自《WHO实验室生物安全手册》2004年版*摘自《WHO实验室生物安全手册》2004年版*摘自《WHO实验室生物安全手册》2004年版学习目标掌握消毒、灭菌、无菌、无菌操作、防腐