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实验三植株磷素的测定(钼蓝法)1实验原理

在酸性条件下,无机磷可与钼酸铵作用生成磷钼酸铵,并被氯化亚锡还原成蓝色的磷钼蓝，由蓝色的深浅即可测定磷的含量。

H3PO4+12(NH4)MoO4+21HCl(NH4)3PO4·12MoO3+21NH4Cl+12H2O

磷钼酸铵(NH4)3PO4·12MoO3(MoO2·4MoO3)2·H3PO4·4H2O

磷钼蓝

钼蓝的最大吸收波长为660nm.SnCl22实验仪器：分光光度计研钵等试剂:50µg/ml标准磷溶液材料:菠菜、青菜、菜花3实验步骤1、绘制标准曲线1）取标准磷溶液分别配成浓度为0、6、8、10、15、20、25、30µg/ml磷溶液各10mL；2）取上述不同浓度标准磷溶液1mL于试管中，加入7mL水，再加入钼酸铵硫酸试剂2mL，摇匀后加入SnCl22滴，混匀，静置10-15min；3）选择660nm波长，用光径1cm比色杯，以浓度0为参比溶液，测得各标准溶液的吸光度值；4）以磷浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。2、植物组织中磷含量的测定1）取材料2g于研钵中，加少许石英砂及5mL水研磨；2）将匀浆移至25mL容量瓶中，将研钵中残渣一并洗入，定容至刻度；3）取10mL该混合液的上清液于6000r/min条件下离心15min后，取提取液1mL两份于洁净的试管中,在上述同样条件下测其吸光度值；4

4）根据公式计算磷含量：P(µg/g叶鲜重)=C×(V/W)式中：C为提取液的磷含量（µg/ml）；V为提取液的体积（mL）；W为样品鲜重（g）。5注意事项1、使用钼蓝测磷法时，钼蓝铵-硫酸溶液加入体积要准确，否则会因酸度不合适而导致不显色。2、显色时间不宜过长，蓝色易褪去。3、实验中比色皿易着色，实验

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