对化学性肝损伤的保护功能

章对化学性肝损伤有辅助保护保健食品的功效成分及检测一、概述肝损伤就是肝脏受到外界因素的入侵从而引起的肝脏受损肝损伤分为病理性肝损伤和化学性肝损伤化学性肝损伤主要是由于化学药物中毒过敏等引起，比如药物性肝炎、酒精肝、有机农药中毒等都会引起肝损伤、肝功能异常。（一）化学性肝损伤分类目前，化学性肝损伤以药物性和酒精性肝损伤最多见。、药物性肝损伤由于药物及代产物的毒性作用或机体对药物产生过敏反应，对肝脏造成损热。：)；)部分药物经代产生亲电子产物，通过共价结合，损伤肝细胞膜和肝线粒体、微粒体膜，引起细胞损伤；(3)药物代产生超氧化离子，促使脂质过氧化，导致肝细胞损伤。、酒精性肝损伤酒精性肝损伤是指长期大量饮酒或含有乙醇的饮料造成的肝脏疾患,包括轻症酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化、酒精性肝硬化。乙醇对肝脏的损害机理包括：(1)乙醇进入机体后约9%在氢料酶(AH)氧化为乙醛，乙醛在线粒体经乙醛脱氢酶(ALDH作用氧化为乙酸。乙醇氧化的AH途径会消耗大量的辅酶1(NAD)使ND/NDH比值变小使三羧酸环受到制，响细胞量供。(2)乙醇损害粒体的能，线粒体质过化物增，GSH水平下降，线粒体态异常。(3)乙醇氧化程中的间产乙醛是活性质当醛脱酶活性低，氧。疗。。是B。B素

素B、1素B素B素B缺2 6 12少B。、增加微量元素的供给。微量元素可维持身体组织器官与脏器的代，有助身体健康。多摄入富含微生态活菌的营养补充剂微生态活菌可以通过调节肠菌群，抑制革兰氏隐性细菌繁殖，降低肠源性毒素水平，有助肝脏排毒。（三）对化学性肝损伤有辅助保护功能的保健食品目前，我国登记注册的“对化学性肝损伤的保护功能”的保健食品约0：、料的。多五过。、具有抗氧化、促进细胞增殖、提高免疫力的营养物质。主要有腺苷、牛磺酸、甘草酸、硒、维生素E、维生素C等；、一些特殊动物如牡蛎、毛虫干苦参、甲鱼、蚂蚁等提取成分制得。这类保健食品的具体功效成分还大多数不能确认。、一些生物因子：胎盘因子、多肽等。这类保健食品过多借助生物工程或化学合成得来对其是否应划入保健食品行列还存在一些争议相关产品也少见。二、主要功效成分介绍（一）粗多糖1、结构与性质粗多糖是从大豆籽粒中提取出的可溶性寡糖的总称，大豆中的寡糖属于α-半乳糖苷类，包括棉籽糖、水糖等。棉籽糖是自然界中最知名的一种三糖，由半乳糖、果糖和葡萄糖结合而成，为白色结晶粉末，密.点8oC，溶于水，极微溶于乙醇等极性溶剂，不溶于油醚等非极性溶剂。水糖是由半乳糖葡萄糖和果糖构成的非还原四糖其结构式为-吡半乳糖基α-1,6-D-吡喃半乳糖基α-1,6-D-吡喃葡糖基α-1,2-β--呋喃果糖苷，属于料为CHO量666.。24 42 212、生物学能（）促进双歧杆菌的增殖人体虽然不能直接利用粗多糖，但是粗多糖可被肠细菌利用，并且能促进双歧杆菌的增殖。双歧杆菌是一种厌氧革兰氏阳性细菌，是维护和保持肠道菌群平衡的一个极为重要的因素，也是判断肠外环境是否正常的一个可靠依据。（2）抑制病原菌粗多糖能促进双歧杆菌的增殖，从而抑制有害细菌如产生荚膜梭状芽孢杆菌的生长。双歧杆菌能发酵粗多糖产生短链脂肪酸和一些抗菌素物质，从而可抑制外源致病菌和肠固有腐败细菌的生长繁殖。（3）防止便秘、腹胀，促进消化，调节胃肠功能肠道的双歧杆菌发酵粗多糖产生大量的短链脂肪酸（主要是醋酸和乳酸），能刺激肠道蠕动，从而促进消化，防止便秘的产生。（4）增强免疫功能如果人较长期的食用无细菌食物，肠道就会因为缺少刺激而使其产生抗体的能力下降，从而容易诱发疾病。食用粗多糖，促进双歧杆菌的增殖，将对肠道免疫细胞产生刺激，提高其产生抗体的能力从而起到防治疾病的效果。3、安全性观察大叶车前子粗多糖胶囊对小鼠的急性毒性反胃给予小鼠1日最大质量浓度及最大体积的药察急性毒性反应一试验小鼠最大耐受量10.98料g，相当于成人推荐剂量的33均毒。（二）根素1、结构与性质根素puerarin）别名普乐林、根黄素、黄豆甙元8-C葡萄糖甙，是根的-β-糖-4,7一二羟基异黄酮式9，为4163。含量时为色粉末，含量为白点1乙图1。图1 根结构式2、能根高因此成为评估根类保健食品中的重要微纤降低血粘度作用对肾炎肾病肾衰竭均有保护作用对非特异性免疫、体液免疫细胞免疫有明显的调节作用可促进正常人和肿瘤病人的淋巴细胞转。成，发。料3代（35mgk75m/370mg/k，为118h1.4h.7h、素。4性小鼠静脉注射根素，LD为50

634.3mg/kg，腹腔注射

LD为50

1412.2mg/kg。大鼠腹腔注射根素150mg/kg100mg/kg50mg/kg连续5，无积蓄性毒性，对心、肝、肺、脾、肾、肾上腺及肠等脏器无明显毒性。犬静脉注射根素，每日50mg/kg、30mg/kg、15mg/kg连续5，再观察70天，对大小便常规、血常规、SGPT，BUN、血糖均无明显影响。健康成年SD大鼠实验，剂量为50、150mg/kg，对雌性大鼠胚胎及雄性大鼠生殖细胞均无致畸作用。致突变试验表明，根素没有潜在的致癌和致突变危险性。少数病人在用药开始时出现暂时性腹胀、恶心等反应，继续用药可自行消失极少数病人用药后有皮疹发热等过敏现象立即停药或对症治疗后，可恢复正常。重肝、肾损害，心衰及其他重器质性疾病者禁用。有出血倾向者慎用。对根素有过敏或过敏体质者禁用。（三）腺苷1、结构与性质腺苷（Adenosin）是核苷的一种，也是核酸的基本结构单位，全称为腺嘌呤核苷(Aeon)。由核糖（呋喃核糖）与腺嘌呤的一部分组成，中间由料β-9βcd为-β-呋喃核糖基腺嘌呤，其分子式为CHNO，分子量为267.24。腺苷为白色或类白色结晶性10 13 5 4粉末，易溶于水、甲醇、乙醇等极性溶剂，结构见图。2腺结构式2、生物学功能代磷（ATP腺作用下，生成腺嘌呤核苷酸，简称腺苷酸(AMP)，腺苷酸可作为多种辅酶(NA、FAD、辅酶A等)的基本组成部分，对辅酶与特定酶蛋白的结合起重要作用，例的能。3、代：腺苷是存在于几乎每个细胞的一种源性核苷。心肌细胞、血管皮细及料。静脉应用腺苷后，血液循环中的腺苷主要是通过经细胞和血管皮细胞的摄取而被快速清除期<0s生量苷以细的苷氨通过氨用。苷激灭都要过脏肾代。安性腺苷的副作用（潮红、气急、胸痛）较常见，但多为一过性（1~2min消失。对有窦缓或房室阻滞者慎用。由于腺苷的作用时间短，因此对血流动力学几无影响较少引起低血压腺苷与某些药物具有相互作用。治疗浓度的茶碱能阻断腺苷赖以发挥电生理和血流动力学作用的受体。双嘧达莫（生丁）阻断腺苷的摄取，从而使其作用增强。对正在服用这些药物的患者，应选用其它药物治疗。（四）五味子素1、结构与性质五味子素为木兰科植物五味子果实的提取物主要有效成分为木脂素类如五味子甲素五味子乙素五味子醇甲五味子醇乙五味子丙素五味子酯甲等。五味子素为棕色粉末，溶于氯仿、甲醇、丙酮、环己烷、正己烷等，不溶于水。五味子甲(SchisandrinA的分子式为CHO量416.1素24 32 6为CHO为400.4为CHO子23 28 6 24 32 7为432.5，味子素、五子乙和五味醇甲的构见图3。料图3 五子的结式2、能五、降。()化。)在1992，Kuo等学者出动在切除份肝脏，五子可刺激脏的胞再。这由于早期肝脏生过中，OC这酵会其，五子正加ODC的活跃度，因而可以刺激肝脏的细胞再生。(3)加。)的思弱题(等)物五以些神正从神的。料)，。3性的耐力在中即老用剂量液

(5/k)也不会致。而如连续0(5/k)，也只实验身上现轻微的中反应影。（五）甘草酸1、结构与性质甘草酸是甘草中最主要的活性成分有的0水为CHO为82293点0图442 62 164 甘草酸结构式2、生物学功能料。肾，降反癌。3代无论通过静脉注射或口服给予甘草酸，甘草酸在体代成甘草次酸而发挥作在中β-成-单-中体强6强115倍。4、性毒现精。（六）总三萜1、结构与性质根据三萜类化合物在植物体的存在形式结构和性质可分为三萜皂苷及其三图6身[72]。料5 式类)由30个子(含6异戊二烯单位)缩合而成的萜类化合物，也是一类重要的中药化学成分。目前已发三式其见苷[73]。2、生物学功能三萜类化合物具有广泛的生理活性通过对三萜类化合物的生物活性及毒性力[74]肝[75]、降低胆固醇、杀软体动物、抗生育等功效。其中，熊果酸(Ursolicacid)是重要的有待开发的新型五环三萜类药物近年来熊果酸及三萜同类物不断地被抗V等。料3性的10（成人体重以60g计为剂试灌胃30d后的实验结果显示：角鲨烯对各试验组动物的机体无不良影响，各剂量组大鼠的体重及其增重、进食量、食物利用率、大鼠的脏体比与对照组比较差异均无统计学意义；血红蛋白含量、红细胞计数、白细胞计数及白细胞分类均在正常值围；血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素、鲨。三、检测法综述1、粗多糖目前，我国对于保健食品中以粗多糖作为主要功效成分的检测目前尚无统一的法定标准，文献报道的法有苯-硫酸法[1~5]、蒽酮比色法[6、直接滴定法[7]、间碘和效色等蒽色反条要较如、时及试的等滴法结能高因淀粉等多糖对其有干扰作用。苯酚-硫酸法是将样品中水提醇沉沉淀下来的粗多糖在硫酸的作用,水解成单糖并迅速脱水生成糖醛衍生,与苯酚缩合成有色化合物以葡萄糖或葡聚糖作为标准,通过换算系数校正，比色测定粗多糖含量。向红1采沸加热2h健中糖经乙高分子以溶糖碱铜聚标苯硫在0Z进行多次测定，批相对标准偏差为1.01%~4.95%，批间相对标准偏差为料2.9%731%，加标收率为91.80~004%。同时该法可避葡糖、多。肖萍等[2]采用乙醇沉淀，苯酚-硫酸显色法，测定了保健饮料中粗多糖的含，不。等[采用不同的测定法测定真菌保健食品中的粗多糖的含量考察标。实验表明选用硫酸苯酚法进行显色，葡萄糖做标准品，超声功率250W,超声提取30min,醇沉10min,测定结果较好。阳楠等[8]通过苯酚硫酸法和间接碘量法分别测定同一样品灵芝多糖的含量，两种法测得总糖含量的结果基本一致，分别为2.%和20%。两种法均稳定可行较。一帆等[9]建立了灵芝孢子粉片中多糖含量的HPC测定法。采用ShoexSH01(苯)乙烯二乙烯苯共聚物键合磺酸基)糖柱相06%硫酸溶检测波长200nm。灵芝孢多糖在0.25mg/L～8.00mg/mL围线性关系良好，平均加样回收率10273%，RSD=.4%。2、根素目前已道的根测定法分光光法[16]薄层扫描[17近红外光谱分析[18]、毛泳[19]和高效液相色谱法[11~15]。分光光度法比较普及实用的法，但干扰大半料毛的。等[11]建立了胶囊口服液片剂保健茶等保健食品样品中根素的高效液相色谱测定法以0.%磷酸溶液+乙（9+为动rmilS(.9mm150mm，5µm)色谱柱239nm紫外波长下，外标法测定。根素的浓度在40μ/m~20μg/mL围与峰面积呈良好的线性关系，加标回收率为921~022%，最低检出限为2为3.%。甘宾宾等[14]以甲醇+水（300，/）超声提取保健食品中的根素，采用TDiamonsilMC18(4.6m×20mm,μm)醇+水(307/用T磷酸节pH=.0长0m的为3ng~300ng，平均回收率为9.%，相对标准偏差为1.%。振林等[16]采用薄层-紫外分光光度法测定根冲剂中根素的含量以氯仿:甲醇:水（7280）为展开剂，在紫外灯（365nm）下定根素位置，251nm处测会。等[18]研究了优化分析根总异黄酮、根素和大豆苷含量数学模型的各种条谱率。等[19]建立了汤制剂中种有效成分的非水毛细管电泳测定法，研究了各料素为500μg/L~20.0μg/mL，检测限为01μg/mL，迁移时间和峰面积的相对标准偏差14%和2.7%。３、苷对醇-醇腈-溶液、甲醇-缓冲盐水溶液等。提取的式主要有加热回流提取、索氏提取、超声提[取等以超声提取的效果较好腺苷的检测法有高效液相色谱法20~28]薄层色谱[法[29]、离子色谱法[30]、毛细管电泳法[31,32]、液相色谱串联质谱（LC-MS）法。HC是究，效质形围准测一等[22]应用反相高效液相色谱线性梯度洗脱法对中奇虫草胶囊夕阳红胶囊等保健品样品中的腺苷进行了分离测定采用水超声提取样品使用Lichropher10RP-C8色谱柱以pH4.~5.5长0m标在µ0µL在%等[23]以水超声提取溶剂，超声提取30n草素和腺苷含量进行了提取，采用高效液相色谱法测定，回收率在98.8%~99.5%之间。薄层色谱-紫外分光光度法步骤繁杂，耗时较多L-S作为一用术条。性料、。等[30]建立了保健食品中腺苷的高效阴离子色谱测定法法样品中的腺苷经乙腈-水提取后，以0.25mol/LNaOH为流动相，采用AminoPACPA10氨基酸分离柱分离，u为工作电极的脉冲安培检测器检测。腺苷在1.00/mL~000μg/mL浓度围线性关系良好，样品平均加样回收率为933%10.7%，样品定结的RSD为8%。高效毛细管电泳法（E）在药物分析的应用，已逐渐成为热点，其分析时间短，分离效率高，是高效液相色谱法（HPLC）的数十倍（一般可达每米几百万理论塔板数，检测限低，进样量小，溶剂消耗少，自动化程度高，但目前尚处于研究阶段。阮婧华等[32]探讨毛细管电泳法研究天然冬虫夏草用不同溶剂提取的效果及测定其中核苷及其碱基含量的可行性采用Unimicro细泳，英毛细管柱（0cm5μmID.，运行缓冲液分别为36mmolL硼砂5mmol/L磷酸二氢H.离度20℃分离电压15定长24m样5s和RSD分别为.%和0.89（n＝。4、五味子素溶剂进行提取，提取的式主要有超声和索氏提取。测定法主要有高效液相色谱法][42-48、薄层层析-紫外分光光度法[49]、毛细管电泳法[50]。文献报道以高效液相色]谱法为主，采用乙腈或甲醇和水为流动相，在2m或22nm处检测[45]。袁军等[43]以甲醇为提取溶剂对舒肝糖乐胶囊中的五味子甲素进行提取，HC在1μg/mL~1μg/mL标料为100.5%，RS=.1(n3)。谭生建等[46]以己烷超声提取肝复康丸中五味子甲素和五味子乙素，以乙腈-（68:3混合（含02%磷酸用乙胺调p作为流动相使用LUNA-C18回为10%和102.4%，RSD为1.5%和1.%n5)。美山等[45]味素3为txS-C(4.6×150mm，5μm)，流动相采用甲醇-水进行梯度洗脱，检测波长为18254nm。五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的线性围分别为0.21μg~1.5μg.2μg~2.08μg0.20μg~1.51μg；加样回收率分别为9%、9%和97.88%（n=5。惠霞等[49]采用薄层扫描法测定复降糖丸中五味子甲素的含量五味子甲素在0.537μg线性关系良好，平均回收率为1%。毛细管电泳法具有高效、快速、微量等特点，在药物分析中得到了广泛的应用在缓冲溶液中添加有机溶剂可改善分离选择性海兴等[50]采用毛细管电泳法，以磷酸氢二(15mmol/L)、硼(15mmol/L)和%乙醇缓液为运行解溶得五子素五子其成的效离确测定了味中五子素量五子素线围为0.03~0.37g/L，相对标准偏差为2%（n=6，平均回收率为99.6%。5、甘草酸中法[51]主要有比色法、料高效液相色谱法和高效毛细管电泳法。用于测定甘草酸含量的电化学法主要有小波变换二次微分示波计时电位[52]极谱催化波法[53]有近几年来应用高效毛细管电泳法和高效液相色谱法定量分析甘草酸含量发展迅速。薄层扫描法是薄层色谱技术与光密度计和微型电子计算机结合起来的一种新型仪器分析法应用薄层扫描仪可同时对各种复杂的样品进行分离和测定桂霞等[4]采用薄层扫描法测定开胃健脾胶囊中甘草酸的含量。展开剂正丁醇-冰醋酸-水6::3)上层液，测定波长(λs)为252nm，参比波长(λR)500nm。法的线性围为2.1μg~10.5μg，平均回收率为98.4%，RSD为1.35%。容军等[55]采用薄层扫描法测定术苓口服液中甘草酸的含量。平均加样回收率为98%，精度RS.%。高效毛细管电泳法是根据组分在外电场条件下电泳淌度的差异而进行分离刚等[5]采用高效毛细管电泳法成功地分离测定了甘草中甘草酸的含量，在pH=8的50mL长22m压5V,力0mm汞柱，温度30oC的检测条件下，标准溶液在0.0448mg/mL~0.224mg/mL围与峰面积呈良好的线性关系。对于甘草酸的测定，应用最为广泛的是高效液相色谱法，GT22248-200[57]规定了保健食品中甘草酸的测定法。根据甘草酸易溶于醇、水等极性溶剂的理化性质不含油试样中的甘草酸采用流动相进行提取对于含油试相C色18谱柱离由紫检器测样量3.0g时法检出为1.0×10-3g/kg，料为3.0×10-3g/k，线性围为.0μg/mL~0μg/mL。兵等[58]建立黄金咽喉片中甘草酸含量的高效液相色谱测定法采用的色谱柱为DikaKromasl

C柱18

(46mm×0mm，5μm)，流动相为醇-0.2mol/L醋酸铵-冰醋酸()，为252nm。甘草酸在0.4μg~4μg围具有良好的线性关系，平均回收率9965%，RSD为0.514%(n=6)。从容等[59]建立用反相高效液相色谱标法测定保健食品中甘草酸含量的法该法应用标法测定保健食品中的甘草酸含量，甘草酸在0μg/mL~300μg/mL围呈良好的线性关系，法的回收率为87.2%~96.7%，RSD为3%。6、萜对品总要甲乙取，其中选用乙醇剂多式索取[81]回]流提取[76]和浸提[77]。测定法主要有分光光度法[78,79、高效液相色谱法[76]、高效]液相色-质谱[80]，文献报道以分光光度法为主。宏等[79]以乙醇为提取溶剂取醛-长548nm处用分光度法定苦茶中三萜量。颖等[77]选用熊果酸为对照品，香草醛-冰醋酸和高氯酸为显色剂，以紫外分光光度法测定天花粉中总三萜皂苷的含量。在16g~48g围线性关系良好，加标回收率为9%，RS%。太平等[83]采用高效液相色谱法研究细薄星芒海绵总三萜，使用的色谱柱为Pack-SIL（0m×4.6mm5μmA（）料0～30minA7％)3~5inA75%～3%)～0n%)为1.0mL/min为360nm细。于能江等[80]以甲醇为提取溶剂，超声波提取茯苓粉末中三萜成分，以乙腈-水为流动相进行液相分离二极管阵(A)和电雾谱(EIMS)两种检测法在检。四、功效成分的检测法（一）保健饮料中粗多糖含量的苯酚-硫酸法测定法[2]1、测定步骤精密吸取保健饮料液体试样15m水醇60L使达8%，匀5min，以3000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用8%乙涤3至250mL，得供试品溶液。吸取供试品溶液2.0mL加入50L酚液2.0mL心酸8.0mL，于旋混匀器小心匀，置水浴煮沸20mn，冷却后分光计在485nm处以试剂空白溶液为参比1cm比色皿测定吸光度值根据标准曲线计算出葡萄糖含量并计算该保健品饮料中水溶性粗多糖含量。2、法特点法的平均回收率为97.5，SD=.96%。（二）层析-高效液相色谱法测定保健食品中根素的含量[12]1、试剂和材料D11大吸树脂70%乙醇浸泡4h充分膨胀后反复用去离子水冲洗，将乙醇洗净后装柱；层析柱柱高为1m，长1cm，径10m。料2骤（样取0.50~1.00g至0.001量7%甲取20n用%甲至1L，经0.5μm滤膜过滤后，用液相色谱分析，外标法定量。（）多种植物提取物制成的试样：需经大树脂净化后再进行高效液相色谱分析。根据试样含量称取0.50g~1.00g试（精确至0.001加适量水溶解，超声提取20m,至10mL，混匀400r/min离心5mi。取1mL上清液上大吸附树脂层析柱，用约40mL水以1mL/min淋洗杂质，再用0mL%甲用%甲至1mL过5μm滤膜后用液色分析外标定量。色谱条件：高效液相色谱仪配紫外检测器；色谱柱：ODS

C 柱（25018mm×4.6mmi.d.，5μm；流动相：甲%酸+水（25++2速：0.6mL/min；检测波长为247nm。根素标准溶液和多种植物提取物制成的试样色谱图见图7。3、法特点当取样量为1.0定容体积为1L时以信噪比S/N=3计算法的检出限（LO）为2.0×1-5g/kg；当取样量为1.0g，定容体积为10mL噪比S/N=10计算法的检出（LOQ为6.0×10-5gk根在50μg/mL~50.0μg/mL呈线性关系,法的回收率为816%102%，试测定RSD为0.84%~料1%。6根和制图（三）保健食品中腺苷含量的测定1、测定步骤取适量样品用研钵研磨混合均匀，盛于清洁密闭容器标识后作为试样。准确称取试样约05g(精确到0.1mg)于50mL烧杯中加入5L甲醇溶液（11，/，匀稍后清中声30mn，取至2L容甲（1+1，/至刻心15n取1.0mL上部清液于10L容量瓶中，甲醇溶液（1+1，/）定容至刻度，取适量溶液用微过滤器过滤，供液相色谱测定，外标法定量。色谱条件高效液相色谱仪配紫外检测器色谱柱用C（20m×.6mm18i.d.，5μm；动：醇-.05o/L磷酸氢二缓溶（15+85，/；检测长：260m；柱温为3：0.6mL/min。2、法特点在法所定的验条下，在1.0μg/mL～10μg/mL浓围性关以S/N=5确定测定低限LO）为0.%，测满售保腺求苷为0.88%和0.24%两个发酵虫草菌粉样品，进行添加回收试验，法的总体平均回收率在86%～10%之间对在1.%～6.08%(n=6)之间。料（四）保健食品中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量测定[45]1、测定步骤精密称取样品（市售含五味子类保健食品）细粉05g，精加入25mL甲醇，密塞，称定质量，超声处理0n，放至室温，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀后过滤，即得到供试品溶液，供液相色谱测定，外标法定量。色谱条件：WatersAlliance2690高效液相色谱仪配DAD紫外检测器；色谱柱为AgilentzorbaxSB-C18

柱(150mm×4.6mmi.d5μm)流动相甲醇-水梯度洗脱（30min甲醇比例由%到8%：1.0mL/min；检测波长24m。标准溶液和样品色谱图见图。2、法特点五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分别0.1μg~1.55μg、0.28μg~208g.0μg~.51μg围线性关系良好以S/N=3为标准测得最低检测限分别为五味子醇甲0.03μg、五味子甲素8μg和五味子乙素06μ加样回为97.48%、9%和97.88%（n=5；同一样品5次平行提取并测定的RSD分别为0.89%、03%和1.%。7 标样图（五）保健食品中甘草酸测定法的研究[59]1、试剂材料甘草酸对照品溶液:精确称取甘草酸对照品0g，用甲醇溶解定容至料100m，匀。对-基甲丁溶液:精密称取羟基苯甲酸丁酯0，容成1mL的液,作为标储备液。2、测定步骤片剂或粉状胶囊试样：称取05g~3.0g均匀试样，准确到01g，于50mL量中准加入0.5L标备，后加约40L50%超取30in后加入5%甲30n离心10mn，过05μm滤膜，供高效液相色谱测定，标法定量。口服液试样准确吸取5.0mL10.0mL试样于50L量准确加入0.5mL储备然后加入约40mL50%甲醇超提取30in后加入%0n离心10n过.5μm液。s5高为ODSC18柱(4.6m×50mm，5μm)；流动相：3%液+乙腈(60+40)，标物为对羟基苯甲酸丁酯，检测波长54m。对照品和试样色谱图见图。3、法特点以甘草酸与标峰面积比为纵坐标，以浓度为横坐标进行回归甘草酸在20μg/mL~300μg/呈良好的线性关的回收率7.%~6.%RSD为3%。料8对照品和试样色谱图（六）分光光度法测定灵芝孢子粉中总三萜含量[82]1、测定步骤称取灵芝孢子粉胶囊1，用乙酸乙酯溶解，超声震动30mn，用乙酸乙液5L定至50L作为试品溶。吸取100L供试品溶液于℃水浴上蒸干后加入％香草醛冰醋酸溶液040L和100mL高氯酸，6热45min后移人冰水浴中，再加0mL冰醋酸，摇匀后置于室温15n后用紫外/可见分光光度计581nm波长测样溶的光。2、法点熊果酸含量在0.mg~0.13mg围呈良好的线性关系；加样回收率为101.1%~116.16%，均值为108.94%，RSD为5%。称取同一灵芝孢子粉胶囊容物，平行测6份，RSD为19%。（七）保健食品中水飞蓟素的含量测定法－HPLC法水飞蓟是用于治疗肝脏疾病的常用药物其主要有效成分是水飞蓟素属于用制RO（reactiveoxygenspecie的实现其作行用分法,以蓟算保中素(总酮)因料。药，健色，离点,和。1法（1取剂20片研碎混匀后取g用2l醇助提取5用0n心5min程至l取2ml样品液经05m膜过滤，供HPC。（2离化水飞蓟素的结构式见图3所示。在色谱柱选择面，比较了日本岛津Shi-pakV-ODS柱（20m×.6m,5µm）和江申Sheriel18柱，结果表明shi-pakVP-ODS柱有好的离效，并峰形较好流动相我们考了甲和不添加的水液结表明醇和酸二钠缓液梯度洗脱有较好的色谱分离效果，流动相最终选择为：流动相A为甲醇∶水∶0.2mol/磷酸0.5mol/磷酸二氢=8:0:8流相B为甲醇，梯度洗脱；流速1.2mL/min；检测波长280nm；柱温：30℃。实验结果表明，在表8所示的梯度条件下，可以获得满意的分离效果（图。料9水飞蓟宾的异构体(Silybin)时间mn）0.15.02400350055006000

1流动相梯度表A% B%100080 2075 2565 3545 55结束10水飞蓟宾标准品的色谱3为水飞蓟宾A,峰4为水飞蓟宾B,两种异构体可以很好的分离）3、法的线性围与检测限逐级稀释水飞蓟宾标准工作液至、20、0、6、80、100µg/ml浓度进的2（Y飞蓟宾的浓度（X轴）作图，定量分析水飞蓟宾的检测波长为2m；本法在10g/～10l的（S/N=3）的围为2ng/m。4、法的回收率与精密度选用不含水飞蓟宾的阴性控制样品，按202/57EC要求每个添加浓度水平取料6行3：94%～98%，室准：22%～6.8%。参文献[1]向红.保健究.食用学,20,86:6-6.[2]肖萍,剑威，韧楠琳，波.苯酚-硫酸法测定保健饮料中粗多糖含量法研究.中现代中药,20,0):73.[3]黄生权,敖宏,郭爱玲.真菌保健食品中多糖含量测定的比较.现代食品科技21,277-1.[4]戴关海,人照,童晔玲,锋,宇.乌药精颗粒中粗多糖的检测法探讨.中医杂质,20,4(:281.[5汪芸.量日典,28,(02.[6]连锦明,黄颍.蒽酮-硫酸法测定菌类保健品中的活性多糖.化工学院学报,2003,2135.[7]于村,丁强.保健食品中多糖含量的测定,0,13:18.[8]阳楠,常继东.苯酚硫酸法和间接碘量法测定灵芝多糖含量比较,食用菌,20,2381.[9]一帆,磊,濮存海.高效液相色谱法测定灵芝孢子粉粉片中多糖含量的研究.中药材,20,3(:0709.[0]靳云,力.螺旋藻胶定.微科学,,)：6-.[1]然,珊,楠,5，15)8．[12]杰,大进,宋书锋,侯维.层析-高效液相色谱法测定保健食品中根素的含量.中国食品生志,200, 20（：336.[13]成旭东,贾晓斌,彦,国梁,霞．HPLC法测定家犬口服根黄酮微丸后血浆中的根素含中药，32(：．[4]甘宾,廖开6，35)2．料[15]莉,叶法中量.医导报2008,274）:4-4.[16]振林,寇玉玺,红举．紫外分光光度法测定根冲剂中根素含量．医药论坛杂志,,266):57．[17]骅,明,栋,袁飞,定.华西志,20,2():262．[18]斌,龙莲近光快析的效．学谱析,2002,22):969．[9]红,峰,国,之中5种有分.学报科学版),0,42:-0.[20]中会.典25年版部,.[21]中华人部准WS0（）.[22]任平,芬.应苷.中国报,,31）:-60.[23]甘宾,艳坤.HPLC量.中国卫生检验杂志,2006,1(111-31.[4]高玲,晔,溪,娟,道.HPLC-PDA测中量.StritPaacuclJual,0,1()66.[25]新,双,嘉.板浸腺测析.中国现用,209,（:15.[26]建正,宋保卫.发酵虫草菌膏及含定.医专学报,200,19（）:57.[27]敏如,洪亮.高效液相色谱法测定发酵虫草菌粉和金水宝胶囊中腺苷的含量.中草药,194,2（）:7-8.[28]来生.反相高效液相色谱法测定药物“金水宝”中腺苷及腺嘌呤含量.色谱，1995，1（）:30-6.[29]武清,龙新华.薄层扫描法测定金水宝胶囊中腺苷的含量.中草药,1996,27（）:45.[30]邹小莉,曾红燕,黎源倩,梅唐林,江波.高效阴离子色谱法快速分析保健食品中的腺苷.大学学报）,0,4（）:9991.料[31]汤树良.高效毛细管电泳技术在中药分析中的应用.中医学院学报,,5（1）:55.[32]阮婧华,毓庆.毛细管区带电泳法同时测定冬虫夏草中多种核苷及其碱基成分含量.大报,22,192）:.[35]倩,星,邹莉,米建萍,国.CCD阵测-青素.光谱学与析,25,()7-2.[36]波,克荣,梦龙.用H素.中卫检杂志,200,1():5657.[42]兰贵,火,铁梁,明琴,继铁,迎庆,红. C法测定更年安片中五味子甲素和五味素量.中草药,20,3():0～4.[43]袁军,萍,兰琬玲,英.C测定舒肝糖乐胶囊中五味子甲素的含量.华