动物细胞工程(知识梳理)

第三节动物细胞工程选修3第二章细胞工程本文档共33页；当前第1页；编辑于星期三\2点31分主要内容动物细胞与组织培养

动物细胞核移植技术

动物细胞融合单克隆抗体制备

4123动物细胞工程常用技术手段包括本文档共33页；当前第2页；编辑于星期三\2点31分一、动物细胞与组织培养学习目标：1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用2、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的请自主完成导学案课前预习部分本文档共33页；当前第3页；编辑于星期三\2点31分一、动物细胞与组织培养1．概念：（1）材料：取自动物

或

动物的器官或组织。（2）场所：在

模拟动物

。（3）目的：使动物细胞或组织继续

、

并维持原有的

和

。本文档共33页；当前第4页；编辑于星期三\2点31分一、动物细胞与组织培养2．过程：（1）动物细胞培养：

取动物组织块剪碎，用

处理，形成分散的

，此称细胞悬液，然后接种到

中培养，待细胞分裂形成一层细胞，转移到新培养液中继续培养。（2）动物组织培养：

剪取动物组织块，用

冲洗，将组织块移入

，使组织块

在培养瓶的瓶壁上，称贴壁培养。本文档共33页；当前第5页；编辑于星期三\2点31分一、动物细胞与组织培养3．培养的条件：（1）环境条件：包括

、

、

和

等。①温度：哺乳动物多以

℃为宜；②PH值：多数细胞生存的最适pH为

；

③气体：细胞培养所需气体主要有

和

，

是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的

；

④营养成分：有

等。本文档共33页；当前第6页；编辑于星期三\2点31分一、动物细胞与组织培养（2）培养基：

①天然培养基：取自

、

和

等；其特点是

、

。

②合成培养基：人工配制，仍需加入

；其特点是成分

、便于实验条件的控制。本文档共33页；当前第7页；编辑于星期三\2点31分一、动物细胞与组织培养4．培养类型：（1）原代培养：

①概念：从机体取出组织或细胞的

，一般培养10代左右；

②特点：细胞的

未发生很大改变；

③应用：药物测试、

等试验。（2）传代培养：由于

的限制和

的消耗，导致细胞生长和增殖减缓，需要将原代细胞培养的细胞

，转移到

中继续培养，一般可继续培养

代左右。本文档共33页；当前第8页；编辑于星期三\2点31分一、动物细胞与组织培养5．技术的应用：用于

、

和

等领域。补充概念：细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。本文档共33页；当前第9页；编辑于星期三\2点31分动物胚胎或幼龄动物的组织、器官（取材）细胞悬液10代细胞50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液（分解细胞间的蛋白）原代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎过程：细胞株细胞系动物组织细胞间隙中含有一定量蛋白质遗传物质未改变遗传物质已改变本文档共33页；当前第10页；编辑于星期三\2点31分一、动物细胞与组织培养补充概念：细胞贴壁：在培养瓶中，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象叫做接触抑制。本文档共33页；当前第11页；编辑于星期三\2点31分细胞贴壁过程那么什么是接触抑制？本文档共33页；当前第12页；编辑于星期三\2点31分接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。50代以后失去接触抑制接触抑制部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。本文档共33页；当前第13页；编辑于星期三\2点31分一、动物细胞与组织培养探究》》1、在动物细胞培养过程中，为什么选择胚胎期或幼龄动物的器官和组织？

2、为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？胃蛋白酶不行吗？3、动物细胞培养与植物细胞培养相同吗？动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？本文档共33页；当前第14页；编辑于星期三\2点31分植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的全能性细胞增殖培养基状态固体培养基液体培养基培养基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖动物血清培养结果植物体细胞株、细胞系培养目的快速繁殖、培育无病毒植株获得细胞或细胞分泌蛋白本文档共33页；当前第15页；编辑于星期三\2点31分二、细胞核移植与动物体细胞克隆1．克隆：指遗传上完全相同的

、

或来自同一祖先的生物个体的

。2．动物体细胞克隆：将供体体细胞的

与受体去核卵细胞的

进行人工组合，借助于卵细胞的发育能力，经过培养发育成

进而形成新个体的技术，其关键是

技术，利用的是动物细胞核的

性。3．细胞核移植：利用

技术等将某种动物细胞的

移入同种或者异种动物的

的技术。本文档共33页；当前第16页；编辑于星期三\2点31分二、细胞核移植与动物体细胞克隆4．大致过程如下：（动物克隆）本文档共33页；当前第17页；编辑于星期三\2点31分二、细胞核移植与动物体细胞克隆卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植融合后的卵细胞本文档共33页；当前第18页；编辑于星期三\2点31分二、细胞核移植与动物体细胞克隆5．克隆技术应用：

在克服动物

杂交繁殖障碍、创造

等方面具有重要意义和潜在经济价值；在医药卫生领域，人的核移植胚胎干细胞经过诱导分化形成相应的组织、器官，可用于组织器官的

（治疗性克隆）；此外，还能利用克隆技术保护和挽救

。

但是目前克隆技术并不成熟，仍存在某些问题，有待进一步完善。本文档共33页；当前第19页；编辑于星期三\2点31分二、细胞核移植与动物体细胞克隆讨论》》1、动物核移植技术选择的受体细胞为什么是卵细胞？2、你认为用体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？3、阅读课本56页积极思维，从社会伦理道德方面思考生殖性克隆会引发哪些社会问题？4、分析图2-12的技术路线，找出生殖性克隆与治疗性克隆的区别，以及应该阻断哪一步来阻止生殖性克隆？5、讨论克隆技术的应用和前景。本文档共33页；当前第20页；编辑于星期三\2点31分本文档共33页；当前第21页；编辑于星期三\2点31分三、动物细胞融合与单克隆抗体（一）动物细胞融合1．概念：是指

或

结合形成一个细胞的过程。2．诱导动物细胞融合的方法：

物理法：

、

常见的诱导因素有化学法：

、

生物法：

等。3．应用：制造

。本文档共33页；当前第22页；编辑于星期三\2点31分三、动物细胞融合与单克隆抗体（二）单克隆抗体1．制备过程：（1）能产生抗体的细胞是：

；

能够无线增殖的细胞：

；（2）利用

融合，检验和筛选杂交细胞。（3）

该杂交细胞，并筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞的特点是：。（4）在

或者

中培养杂交细胞，获取单克隆抗体。单克隆抗体的优点：

________、_________、_________。本文档共33页；当前第23页；编辑于星期三\2点31分本文档共33页；当前第24页；编辑于星期三\2点31分三、动物细胞融合与单克隆抗体2．单克隆抗体的应用：

单克隆抗体具有_______、_______、_______、_______和

优点，主要用于治疗疾病和运载药物，如治疗_______、________等。本文档共33页；当前第25页；编辑于星期三\2点31分准确、高效、简易、快速单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。诊断试剂——最广泛应用本文档共33页；当前第26页；编辑于星期三\2点31分“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物单抗导向，药物为弹头治疗疾病和运载药物主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。本文档共33页；当前第27页；编辑于星期三\2点31分三、动物细胞融合与单克隆抗体探究》》1、比较植物体细胞杂交和动物细胞融合（完成表格）细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用途植物体细胞杂交

、

去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动、聚乙二醇克服远源杂交不亲和，获得

。动物细胞融合用

使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外，还有

。获得

细胞、制备

。本文档共33页；当前第28页；编辑于星期三\2点31分三、动物细胞融合与单克隆抗体2、制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞？在融合的过程中你可以找出几种类型的细胞？3、制备单克隆抗体的过程有两次筛选，两次筛选的目的是什么？本文档共33页；当前第29页；编辑于星期三\2点31分BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活获得产生相应抗体的B细胞（二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。本文档共33页；当前第30页；编辑于星期三\2点31分三、动物细胞融合与单克隆抗体小结以下内容（制备单克隆抗体原理）利用______产生特异性抗体的功能。利用______无限增殖的特