孕产妇及所生儿童艾滋病检测章三英详解演示文稿

孕产妇及所生儿童艾滋病检测章三英详解演示文稿本文档共54页；当前第1页；编辑于星期一\14点19分（优选）孕产妇及所生儿童艾滋病检测章三英本文档共54页；当前第2页；编辑于星期一\14点19分样本的采集和处理1.对从其他实验室送的样品，注意检查并注明其送检单与标本记录的符号.样品管遗漏.破损情况。如有遗漏要把残留的样品移出，并对管壁和盛器消毒。要检查并记录样品的质量有无溶血，脂血，细菌感染等情况。2.对实验室自己采集的标本，注意是血液先自然存放1-2小时候，再用3000rpm离心15分钟，吸出上清液备用，如要几天内检查可放入2-8℃冰箱，要储存则置于-20℃低冰箱内。3.滤纸片的采集.用移液管从样品管中吸取100uL抗凝全血或血浆，对准滤纸片印圈中心处蒋样品滴在滤纸上，或者穿刺后自皮肤伤口流出的末梢血直接滴加在滤纸印圈的中心处。在室温下自然干燥至少4小时，不要加热或堆叠，自然干燥后放入密封袋中。本文档共54页；当前第3页；编辑于星期一\14点19分

报告“HIV抗体

阳

性”

报告“HIV抗

体

阴

性

”无反应提供疑似阳性咨询进一步做补充试验

不确定无反应两种均无反应或原有试剂双份进行复检两种均有反应或一有反应一无反应

有反应原有

试

剂+另

一种筛查试剂

进

行

复

检

提供咨询进行核酸检测等

其他补充试验孕期艾滋病检测及服务流程

孕期初次接受产前保健的孕妇

主动提供有关的检测信息

采

集

血样本，

进

行HIV抗

体筛查试验检测后咨询、指导

常规孕产期保健

检测后咨询、指导进行传染病信息报告

提供后续干预服务流行病学史无

有进行核酸检测或

2-4周后随

访

补充试验（首选抗体补充试验）

有反应本文档共54页；当前第4页；编辑于星期一\14点19分《婴儿艾滋病感染早期诊断工作方案》

对HIV阳性产妇所生儿童于出生后6周和3个月时，分别采集血标本，进行婴儿感染早期诊断。详见图3婴儿艾滋病感染早期诊断检测及服务流程。

未进行婴儿早期诊断检测或婴儿早期诊断检测结果为阴性的儿童，应于12、18月龄进行艾滋病抗体筛查及必要的补充试验，以明确艾滋病感染状态。儿童抗体检测及服务流程见图7。本文档共54页；当前第5页；编辑于星期一\14点19分

提供咨询继续提供干预服务尽早获得检测结果产后暂时未得到补充试验结果或

补

充

试验

结

果为

“不确

定”分娩前快速检测结果两种均阳性者“HIV抗体阴性

”

提供咨询

终止干预提供咨询终止干预提供咨询，

进行核酸检测等其他

补充试验

有反应报告不确定

一有反应一无反应

检测后咨询，知情选择干预措施

及时应用抗艾滋病病毒药物；

适宜、安全的助产服务尽早进行补充试验，及时获得检测结果

（首选抗体补充试验）

产时艾滋病检测及服务流程（适用于孕期未接受艾滋病检测的产妇）

孕期

未接

受

HIV抗体检

测

的临

产

产妇

主动提供相关检测信息，采集血样本

同时用两种不同的快速检测试剂

进行HIV抗

体

筛

查

试验

两种均有反应或

两种均无反应报

告

“HIV抗

体

阴

性

”

检测后咨询、指导

常规助产及服务

“HIV抗

体阳

性

”

提供咨询，进行

传染病信息报告继续提供干预服务

所生新生儿特别护理、应用抗病毒药物；喂养指导、

营养咨询等感染妇女纳入当地艾滋病

防治系统所生儿童继续随访、进行

艾滋病相关检测无反应

报告分娩前快速检测结果为一

有反应一无反应者，

用另一种筛查试剂

再次检测

无反应有反应本文档共54页；当前第6页；编辑于星期一\14点19分艾滋病感染孕产妇所生儿童艾滋病抗体检测及服务流程（图3）

艾滋病感染产妇所生儿童

早期诊断检测结果阴性；或未接受早期诊断检测、

感染状态不明确者

12个月

进行

HIV抗

体

筛查

试

验

无反应用另一种筛查试剂再次检测有反应无反应

有反应18个

月时

再

进

行HIV抗体

筛查

试

验无反应有反应不确定

提供咨询，

进行核酸

检测等其他

补充试验

无反应

用另一种筛查试剂有反应

再次检测报

告

“HIV抗

体

阴性”

排除

儿

童HIV感染

常规儿童保健随访两

种

均无

反

应原有

试剂+另

一种筛查试

剂

进

行

复检

或原有试剂双份进行复检

两种均有反应

或

一有反应一无反应

补充试验

（首选抗体补充试验）

有反应无反应

报

告“HIV抗

体

阳

性”

诊断

儿

童

HIV感

染

进行传染病信息报告

提供转介服务

随访并监测病情本文档共54页；当前第7页；编辑于星期一\14点19分18个月以下婴幼儿的HIV检测诊断

母亲

HIV

抗体经胎盘进入胎儿，出生时新生儿和婴儿早期抗体有反应，不一定是感染

出生时母亲的抗体，80~90%

在生后9~12

个月消失，出生后

18个月基本上全部消失

18

个月后儿童

HIV

仍然有反应，视为自身感染产生的抗体本文档共54页；当前第8页；编辑于星期一\14点19分18个月以下婴幼儿的HIV检测诊断

检测HIV

DNA或RNA

推荐检测HIVDNA,

因为HIV前病毒DNA以细胞内前病毒感染状态存在，所以它不受母亲围产期抗病毒治疗的影响和婴幼儿预防性抗病毒治疗的影响HIV

DNA的适宜月龄为3-6个月不得使用脐带血.本文档共54页；当前第9页；编辑于星期一\14点19分HIV/AIDS实验室检测诊断性检测初筛实验：ELISA、化学发光（CLIA)、快速检测（RT）

、PA等确认实验（补充实验）：蛋白免疫印迹试验(WB)条带/线性免疫试验（RIBA/LIA）婴儿诊断：HIV

DNA

病情判定检测T细胞亚群检测：流式细胞仪技术HIV

RNA检测：病毒载量

HIV耐药检测表型耐药：细胞培养技术基因型耐药：序列测定，杂交技术本文档共54页；当前第10页；编辑于星期一\14点19分疫胶体

金（或胶体硒）快速试验

初筛实验酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光快速检测（RT）及其它检测

(1)明胶颗粒凝集试验(PA)

(2)免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免本文档共54页；当前第11页；编辑于星期一\14点19分1.将抗原包被在固相载体上。2.如样品中含有抗体，则结合为抗原抗体复合物。3.再加入酶标记抗原，则结合为抗原-抗体-酶标记抗原复合物。4.酶催化底物并显色。

酶抗原酶标记

抗原抗体

抗原固相载体

双抗原夹心法示意图本文档共54页；当前第12页；编辑于星期一\14点19分16结果判定：以梅里埃第三代ELISA（双抗原夹心法）为例①阴性对照（NC），HIV-1阳性对照（PC1），HIV-2阳性对照（PC2）•

NC

必须＜0.25方可用，排除NC≥0.25的值，计算NC平均值。•

NC界限范围：0.6倍NC均值＜NC＜1.4倍NC均值。②符合以下条件的实验成立：•

两个以上的NC可用。PC1-NC均值

≥

0.4，PC2-NC均值

≥

0.4③Cut

off值

=

阴性对照均值

+

0.100•

小于Cut

off为阴性，大于或等于Cut

off为阳性本文档共54页；当前第13页；编辑于星期一\14点19分化学发光法结果判断••S/CO

<

1.00的样本被认定为非反应性(NR)。S/CO

≥

1.00的样本被认定为反应性(R)。初始结果为有反应性的样本必须经离心后以复检。

18本文档共54页；当前第14页；编辑于星期一\14点19分19筛查实验注意事项ELISA法1.实验前

试剂室温下平衡2.样品血清、血浆分离好3.加样

避免溅出或产生气泡、及时放入孵箱4.孵育

温度、湿度及时间5.洗板

保证洗液注满各孔，洗板针畅通6.显色临用前配制、避免接触金属器械7.加液

避免产生气泡8.读板保证酶标板底部清洁本文档共54页；当前第15页；编辑于星期一\14点19分20化学发光法血清、血浆分离好注意观察是否有没加上标本的（机器会有报警）本文档共54页；当前第16页；编辑于星期一\14点19分21ELISA检测的干扰因素一、内源性物质（1）类风湿因子（2）补体（3）嗜异性抗体（4）标本中其它成分的影响

血清脂质过高、胆红素、血红蛋白及血液粘度过大等，均对ELISA测定结果有干扰作用二、外源性物质（1）标本溶血（2）标本受细菌污染（3）标本凝集不全（4）标本管中添加物质的影响本文档共54页；当前第17页；编辑于星期一\14点19分24化学发光法检测的干扰因素异嗜性抗体经常接触动物或动物血清产品的患者接受过小鼠单克隆抗体制剂诊断或治疗的患者本文档共54页；当前第18页；编辑于星期一\14点19分免疫胶体金（或胶体硒）快速试验

与斑点EIA相似，也是以硝酸纤维膜为载体。

区别在于不用酶标记抗体，而代之以红色的胶体

金（或胶体硒）A蛋白，用渗滤法作为洗涤方法。本文档共54页；当前第19页；编辑于星期一\14点19分

免疫层析法样品垫:

加入血浆,血清或全血样品.红细胞在此迁移过程中被去除连接物垫:含分析特异性试剂结合的硒

标,为一种肉眼可见的红色信号,被分析

物和硒标特异性试剂在此反应结合病人条:固定的含特异性分析试剂,任何

与硒标特异性试剂结合的分析复合物在

此被结合固定,形成三文治结合物,肉眼

可见的红色线条说明有有反应性质控条:固定的含捕捉硒标物的特异性

试剂,不管样品中有无被检测物都应出

现红色线条.控制测试结果的有效性本文档共54页；当前第20页；编辑于星期一\14点19分

撕下所需的测试纸条数,撕下表面保护膜本文档共54页；当前第21页；编辑于星期一\14点19分血清/血浆样品加50ul样品于样品垫中15分钟内读取结果本文档共54页；当前第22页；编辑于星期一\14点19分全血样品加50ul样品于样品垫中手指血方法

加一滴缓冲液静脉血方法15分钟内读取结果本文档共54页；当前第23页；编辑于星期一\14点19分病人条质控条本文档共54页；当前第24页；编辑于星期一\14点19分结果报告：对呈无反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；对呈有反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。对初筛试验呈有反应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复检”报告。《全国艾滋病检测技术规范（2009版）》本文档共54页；当前第25页；编辑于星期一\14点19分HIV抗体检测复检试验复检试剂：

应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）

的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试

剂进行复检试验。

。

如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。《全国艾滋病检测技术规范（2009版）》本文档共54页；当前第26页；编辑于星期一\14点19分

HIV抗体检测复检试验复检结果处理：

如果两种试剂复测均呈无反应，则报告HIV抗体阴性；。

如均呈有反应，或一无反应一有反应，需送艾滋病确认实验

室进行确认。报告为“HIV抗体待复检”。

HIV抗体复检报告有固定的表格，需由1名检验人员和1名审核

人员签字。

对初筛试验呈有反应者不能出阳性报告，可

出具“HIV抗体待复检”报告

《全国艾滋病检测技术规范（2009版）》本文档共54页；当前第27页；编辑于星期一\14点19分样本均有反应

一无反应一有反应送确认均无反应性

阴性报告

有反应复检试验

原有试剂和另外一种不同

原理（或厂家）的试剂

另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。

筛查试剂初筛检测

无反应阴性报告HIV抗体初筛检测流程图本文档共54页；当前第28页；编辑于星期一\14点19分初筛试验呈有反应性样品的转送：

需要核对身份，补充个人信息（如姓名和身份证号码），必要时采集第二份血样，持HIV抗体筛查报告，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室复检。

无论筛查无反应和有反应者，均需做好检测后咨询。本文档共54页；当前第29页；编辑于星期一\14点19分HIV抗体确认试验确认试验的试剂：必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。确认试验方法：

包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验及免疫荧光试验（IFA）等。《全国艾滋病检测技术规范（2009版）》本文档共54页；当前第30页；编辑于星期一\14点19分蛋白印迹实验（WB）

——广泛使用的确认实验基本原理HIV全病毒抗原经过聚丙烯酰胺凝胶电泳,将分子量大小不等的HIV抗原蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。本文档共54页；当前第31页；编辑于星期一\14点19分本文档共54页；当前第32页；编辑于星期一\14点19分试剂盒包括1.硝酸纤维膜（试剂膜条）2.阴性对照3.强阳性对照4.弱阳性对照5.浓缩样品稀释缓冲液(10×)6.浓缩洗膜缓冲液(

20×)7.酶结合物8.底物液9.封闭粉10.孵育板，11.使用手册12.镊子

18或36条

1管

1管

1管

1瓶

1瓶

1管

1瓶10袋

2或4块板

1本1支本文档共54页；当前第33页；编辑于星期一\14点19分原理加样洗加酶结合物(Ab-HRP)洗加底物本文档共54页；当前第34页；编辑于星期一\14点19分

HIV-1

病毒裂解蛋白

HIV-2

多肽条带

内对照

可选快速或过夜检测方法本文档共54页；当前第35页；编辑于星期一\14点19分其可检测标本中针对HIV不同抗原的抗体，故被用做确认试剂。不同的研究机构有不同的判定标准本文档共54页；当前第36页；编辑于星期一\14点19分

gp140/gp105、gp36，也可为gp125/gp80、gp36

p56、p26、p16

p68、p53、p34

gp160/gp120

gp41

p55、p24、p17

（或p18）p66（或p65）、p51、

p31envgagpolHIV-2抗体特异带HIV-1抗体特异带本文档共54页；当前第37页；编辑于星期一\14点19分WB结果判定标准无条带或只有P17

无条带2

ENV+GAG+POL

1

ENV

+

p24/p31

WHOFDA（USA）阴性阳性组织本文档共54页；当前第38页；编辑于星期一\14点19分我国的判断标准

HIV-1抗体阳性同时符合以下2条标准可判为HIV-1抗体阳性：①至少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现，或至少1条env带和p24带同时出现；②符合试剂盒提供的阳性判定标准

HIV抗体不确定出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性

HIV抗体阴性无HIV抗体特异带出现《全国艾滋病检测技术规范（2009版）》本文档共54页；当前第39页；编辑于星期一\14点19分HIV抗体确认实验结果a

强阳性对照（HIV-1和HIV-2）b弱阳性对照（HIV-1）c阴性对照d典型的HIV-2血清阳性反应abcd

gp160

gp120

p66p55p51

gp41

p39

p31

P24

p17

血清对照HIV-2特异带本文档共54页；当前第40页；编辑于星期一\14点19分试验中应注意的问题

1.充分浸泡

2.充分洗涤

3.显色时间

等等本文档共54页；当前第41页；编辑于星期一\14点19分HIV抗体确认实验流程图本文档共54页；当前第42页；编辑于星期一\14点19分结果汇报

符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（＋）”；

符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性（＋）”，

并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。

符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（－）”。如疑

似“窗口期”感染，建议进一步做HIV-1P24抗原检测和HIV核酸检

测，尽早明确诊断。

符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”，在备注中应注明“4周后复检”。《全国艾滋病检测技术规范（2009版）》本文档共54页；当前第43页；编辑于星期一\14点19分晚期病例在我院一中年男性患者，高烧1月余，肺部感染，有鹅口疮，CD4绝对计数是6个/ul

，3代试剂筛查呈阳性，快速阳性，WB带型为gp160，gp120，gp41。抗机会性感染一个月后，抗体筛查阳性，快速阳性、

P24抗原阳性，

WB带型gp160，gp120，gp41，p24。本文档共54页；当前第44页；编辑于星期一\14点19分55婴幼儿HIV感染核酸检测本文档共54页；当前第45页；编辑于星期一\14点19分中国婴儿早期诊断依据

5.4婴儿早期诊断适用范围

未满18个月的HIV感染产妇所生婴幼儿；

母亲HIV感染状态不详

，出现HIV相关临床表

现，临床怀疑HIV感染者。本文档共54页；当前第46页；编辑于星期一\14点19分58HIV-1

滤纸片干血斑样品检测技术（Dried

Blood