细胞表位的研究

关于细胞表位的研究第1页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三2第一部分

T细胞表位的基本概念第2页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三3抗原结合价Antigenicvalence

能与抗体分子结合的抗原表位的总数。半抗原——

单价抗原完全抗原——

多价抗原表位

Epitope

抗原决定基

AntigenicDeterminant

决定抗原特异性的特殊化学基团，是与抗体或抗原受体结合的基本结构单位。1、抗原表位的概念第3页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三42、抗原表位的类型顺序表位（sequentialepitope)/线性表位

由连续性线性排列的短肽构成。构象表位(conformationtialepitope)/非线性表位短肽或多糖残基在序列上不连续性排列，在空间上形成特定的构象。第4页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三5T细胞表位与B细胞表位第5页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三63、共同抗原表位(commonepitope)不同抗原间含有的相同或相似的表位。交叉反应(cross-reaction)

抗体或致敏淋巴细胞对具有相同或相似表位的不同抗原的反应。第6页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三第7页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三MHCclassIpeptidesof8-10aminoacidsMHCclassIIpeptidesof>13aminoacidsb2-Ma-chainPeptidea-chainb-chainPeptide4.MHC分子和抗原肽的相互作用第8页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三

抗原肽和MHC相互作用的分子基础

*锚定残基（anchorresidue）

在抗原肽-MHC分子复合物中，抗原肽的两个或两个以上专司和MHC分子结合的氨基酸残基称为锚定残基。

第9页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三YIMHC分子YIMHC分子PSASIKSPSAIKS共用模体第10页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三MHCI类分子胞外区的结构第11页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三抗原肽和HLA相互作用的分子基础MHC限制性;CD4与CD8表位的差别；人和其他动物的差别第12页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三13第13页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三14T细胞表位的研究方法1.多肽片段的来源

降解；表达；人工合成2.MHC分子的结合

直接结合；预测3.抗原特异性T细胞的来源

感染或者免疫动物或病人

筛选方法

细胞系的建立4.检测指标活化；增殖；细胞因子；杀伤作用第14页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三15T细胞表位的研究意义1.检测刺激细胞使用Tetramer技术MHC2.疫苗表位疫苗3.治疗第15页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三16第二部分SARS-CoVS蛋白T细胞表位的研究第16页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三17第17页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三1.SARS-CoVSDNA疫苗Zhi-yongYang(NIH)Nature.2004,428(1)第18页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三2.免疫方法8wfemaleBALB/cprimeatweek050ugDNAboosttwiceatweek3,62-3wafterprime4-6wafterboost1-2wafterboosttoobservetheeffectofprimeimmunizationtoobservetheeffectofboostimmunizationtoobservetheeffectoflongtermimmunization:mousesacrificed50ugDNAi.mi.m第19页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三3.单细胞悬液的准备

淋巴结脾肺剪碎（消化），研磨，200目筛网过滤，裂解红细胞，2×106/ml第20页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三4.SARS-CoVS蛋白多肽169条,17-19aa,10aa重叠

(NIHNIAIDVRC)P1S1-17P2S8-25P3S16-22P168S1200-1216P169S1207-1255第21页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三1.S抗原刺激以后IFN-

（图A）和IL-2的产生（图B）

结果与讨论Theemptycirclesrepresenttheresultsintheabsenceofpeptidesandsolidcirclesrepresenttheresultsinthepresenceofpeptides.第22页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三23第23页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三24Fig.2.VerificationofpotentialSARSCoVSepitopesPotentialSARSCoVSepitopesP50,P51,P59andP60inpool3,andP141,P144,P151andP152inpool8wereusedtostimulatesplenocytesfromSARSCoVSDNAimmunizedBALB/cmice.IFN-γproductionwasdetectedbyELISA(A)andELISPOT(B),respectively.Eachsymbolrepresentstheresultsofanindividualexperiment(n=3~7).Inaddition,intracellularcytokinestaining(C)wasperformedtodetermineCD4+orCD8+Tcellpopulation.“0”representsthenon-peptidestimulatedcontrol.Numbersatthecornerineachsamplerepresentthepercentageofpositivecells.Representativeresultsofthreeindependentexperimentswereshown.第24页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三25Fig.3.Identificationofnewsynthetic10aaCD4andCD8epitopesTheoverlappedaminoacidsbetweenP50andP51(N50),andbetweenP59andP60(N60)weresynthesized.PeptidesN50andN60wereusedtostimulatesplenocytesfromSARSCoVSDNAvaccine-immunizedmice.P50andP60wereusedaspositivecontrols,respectively.ELISA(A)andELISPOT(B)wereperformedasdescribedabove.Furthermore,N50and60wereserialdilutedtostimulatesplenocytesfromtheDNAimmunizedmice,ELISPOT(C)wasperformedtodetectnumbersofantigenspecificIFN-γproducingcells.Experimentswerecarriedoutinduplicateandrepresentativeresultswereshown.“0”representsnon-peptide-culturednegativecontrol.第25页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三26Fig.4.SynergisticrolesofpeptideN50andN60inH-2bandH-2drestrictedmiceBALB/candC57BL/6micewereimmunizedbySARSCoVSDNAvaccineasdescribedpreviously.1-2weeksafterfinalboostvaccination,N50andN60wereadministratedaloneorcombinedtostimulatesplenocytesfrombothkindsofheterogeneousmiceatthesametimes.ELISA(A),ELISPOT(B)andFACS(C)wereperformedtodetectIFN-γ.“0”representsnon-peptidecontainednegativecontrol.Experimentsweredoneinduplicateandrepresentativeresultswereshown.第26页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三27第27页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三28Fig.6.N50andN60canelicitantigenspecificimmuneresponsesinvivoBALB/cmicewereprimedtwicewiththeDNAvaccines.3weekslater,miceweredividedintofourgroups(n=4),injectedbypeptides(N50andN60,50μgofeach)plusCpGODN(25μg),peptide,CpGODNandPBS,respectively.1-2weeksafterboostvaccination,singlecellsuspensionswerepreparedfromlymphnode(LN),spleenandlung.CellswerestimulatedbypeptideN50andN60plusanti-CD28.ELISA(A)andELISPOT(B)wereperformedtodetecttheantigenspecificIFN-γlevelsandcellsineachgroup.FACSwasperformedtodetectthefrequenciesofantigenspecificIFN-γand/orIL-2producingcellsinCD4+(C)andCD8+(D)Tcellpopulations,respectively.Experimentsweredoneinduplicateandrepresentativeresultswereshown.第28页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三29第29页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三30第30页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三第三部分SARS-CoVS蛋白CTL表位残基的初步研究第31页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三32第32页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三锚定位残基第33页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三34第34页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三35第35页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三36第36页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三37第37页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三38第38页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三3