药物分析第三章杂质检查

关于药物分析第三章杂质检查第1页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三一、药物的杂质与纯度1．药物纯度的概念：药物的纯度是指药物的纯洁程度。药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素，杂质检查也称纯度检查。药物中所含杂质超过质量标准规定的纯度要求，有可能使药物的外观性状、物理常数发生变化，甚至会影响药物的稳定性，使活性降低、毒副作用增加。第一节药物杂质与限量第2页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三例：青霉素在生产过程中可能引入过敏性杂质，可导致过敏性休克，甚至造成心衰死亡。例：阿司匹林中引入水分能促进其水解失效例：乙醚在麻醉中的过氧化物及醛对呼吸道

有刺激性，引起肺水肿及肺炎等，严重时甚至引起死亡。第3页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

2、药物纯度的要求是不断提高的：

例如：度冷丁1948年收入BP，1970年经GC分离鉴定出两种无效异构体（Ⅱ）和（Ⅲ），有时高达20%～30%。

再如：ASA(阿司匹林)中除了SA(水杨酸)外，还存在乙酰水酸酐、乙酰水杨酰、乙酰水杨酸等SA的衍生物，具有致敏作用。

第4页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三3、药物纯度的评价：应把药物的外观性状、理化常数、杂质检查、含量测定等方面作为一个有联系的整体来综合评价。药品中的杂质能否得到合理、有效地控制，直接关系到药品质量可控性和安全性，在药物研究与开发过程中，对杂质的研究备受重视。第5页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三4、化学试剂的纯度与临床用药的纯度不能相互混淆，药用规格与试剂规格是不一样的。化学试剂不考虑杂质的生理作用，其杂质限量只是从可能引起的化学变化对使用的影响来限定的，对试剂的使用范围和使用目的加以规定，不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用；㎡第6页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三药物纯度主要从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑。例：BaSO4

化学试剂规格对可溶性钡盐不做检查，药用规格的硫酸钡要做酸溶性钡盐、重金属、砷盐等检查，如果存在可溶性钡盐会导致医疗事故。化学试剂是不能代替药品来使用的第7页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三二、药物杂质的来源

了解药物中的杂质的来源，可有针对性的制定出检查的项目和方法。药物中杂质主要来源有两个：一、由生产中引入；二、在储藏过程中受外界条件的影响，引起药物理化性质发生变化而产生。

第8页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

（一）

生产过程中引入的杂质主要指药物（1）所用原料不纯而引入其他物质；（2）在合成过程中，未反应的原料、中间体和副产物；（3）在制作过程中加入一些试剂、溶剂等而在精制时未完全除净。例如：药用NaCl的Br-、I-、SO42-、K+、Ca2+、Mg2+、Fe3+ASA中的SA；地西泮中的去甲安定；吗啡中的罂粟碱第9页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三如：制剂中生成的杂质：ASA片、栓剂中SA的检查；盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇的检查。

生产过程中残留有机溶剂、酸性或碱性杂质的检查。

药物中无效、低效异构体或晶型的检查例如：无味氯霉素存在A、B晶型，其中B为有效，A为低效。苯甲咪唑有A，B，C三种晶型；20%；40%～60%；90%

第10页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

（二）贮藏过程引入的杂质主要指外界条件的变化或微生物的作用可能发生的水解、氧化、异构化、晶型转化、聚合等变化，而产生的有关杂质。如：ASA水解生成SA和醋酸；阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸麻醉乙醚氧化为醛和有毒的过氧化物。第11页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三易发生水解反应的结构：苷类、酯、内酯、酰胺、卤代烃等易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键第12页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三三、药物杂质的分类

按杂质的来源分为一般杂质和特殊杂质；1、一般杂质是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，它们含量高低与生产工艺水平密切相关，所以也称信号杂质；ChP附录中规定了一般杂质的检查项目的检查方法第13页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三2、特殊杂质是指在个别药物的生产和贮藏过程引入的杂质。又称为有关物质，这类杂质随药物的不同而不同。例：乙酰水杨酸引入水杨酸甲硝唑引入2-甲基-5-硝基咪唑第14页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三按照来源的不同还可将杂质分为：1、工艺杂质：合成未反应完全的反应物试剂中间体副产物等2、降解产物：从反应物及试剂中混入的其他外来杂质等。

第15页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三按照其毒性分类：杂质分为毒性杂质（重金属、砷盐）信号杂质一般无毒，但其含量的多少可反映出药物的纯度情况。如果药物中信号杂质含量过多，提示该药的生产工艺或生产控制有问题。如氯化物、硫酸盐等）

第16页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三按化学类别和特性分为：无机杂质、有机杂质、残留溶剂。无机杂质可能来源于生产过程，一般是已知和确定的。由于许多无机杂质直接影响

药品的稳定性，并可反映生产工艺本身的情况，了解药品中无机杂质的情况对评价药品生产工艺的状况有重要意义。有机杂质主要包括合成中未反应的原料、中间体、副产品、降解产物等。有机杂质分特定杂质非特定杂质第17页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三特定杂质指在质量标准中分别规定了明确的限度，并单独进行控制的杂质；特定杂质包括结构已知和结构未知的杂质非特定杂质指在质量标准中未单独列出，而仅

采用一个通用的限度进行控制的一系列杂质，其在药品中出现的种类与概率并不固定。如重金属都以铅限度来控制第18页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三四、杂质的限量

1．杂质限量的概念药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量。通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。

药物中杂质限量的控制方法有两种（1）一种是限量检查（2）一种是对杂质定量测定第19页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

限量检查法：通常不要求测定其准确含量，只需检查是否超过限量。

具体操作方法：对照法（多数采用）比较法灵敏法对照法：取一定量供试品和一定量被检杂质标准溶液，

--------同条件下处理，比较反应结果

采用该法须注意平行原则，结果才有可比性（条件一致）第20页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三注意：该法检查结果，只能判定药物所含杂质是否符合限量规定，一般不能测定杂质的准确含量。第21页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三灵敏度法：供试品溶液中进入一定量试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现，从而判断供试品中所含杂质是否符合杂质限量。例：乳酸中草酸、酒石酸等杂质检查，在检查条件下不得出现浑浊。P100第22页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三比较法：取供试品一定量，测定待检杂质的参数（如吸光度等）与规定限量比较，不得更大。例：维生素B2中感光黄素（此杂质溶于三氯甲烷），维生素B2在三氯甲烷中不溶，在400nm下测定A,不得超过0.016.第23页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三药物的杂质根据性质及危害性不同，限量要求也不一样。对危害人体健康、影响药物稳定性的杂质，必须严格控制其限量如砷、铅等；有些杂质本身一般无害，但其含量的多少可以反映出药物的纯度水平，如一些信号杂质则只要其不超过规定含量即可。第24页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

2．杂质限量的计算杂质限量的计算公式：杂质限量=杂质的最大允许量÷供试品的量×100%

=标准液浓度×体积÷供试品的量×100%

L（%）=C×V/S×100%

第25页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三例1．对乙酰基酚中的氯化物的检查：已知：S=2.0g×25/100；C=10μg/ml；V=5.0ml求：L=？解：L=C×V/S×100%=10×5.0/2.0×106×25/100×100%=0.01%

第26页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

例2．葡萄糖中重金属的检查：已知：S=4.0g；C=10μg/ml；L=5×10-6

求：V=？

解：V=L×S/C=5×10-6×4.0/10×10-6=2.0(ml)

第27页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三例3．葡萄糖中砷盐的检查：已知：V=2.0ml；C=1μg/ml；L=0.0004%

求：S=？

解：S=C×V/L=1×10-6×2.0/4×10-6=0.5(g)第28页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

例4．磷酸可待因中吗啡的检查：已知：V=5.0ml；C=0.02mg/ml；S=0.1g

求：L=？

解：L=C×V/S=5.0×0.02/0.1×1000×100%=0.1%注意点①单位一致②稀释倍数③表示方法（%，PPM）第29页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三第二节杂质的检查方法检查药物中存在的微量杂质，首要的问题就是选择一个专属性强的方法，使药物对其所含微量杂质的检测不产生干扰

药物中杂质的检查主要是依据药物与杂质在物理性质或化学性质上的差异来进行。物理性质差异：指药物与杂质在外观性状、分配或吸附以及对光的吸收等性质差别；化学性质差异：指药物与杂质对某一化学反应的差别，一般是杂质与试剂反应，而药物不反应。

第30页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三一、杂质的研究规范

制药企业应该按照经国家药品监督管理部门依法审查批准的规定工艺和规定原辅料进行药品的生产，如果变更生产工艺或原辅料，并因此而带进新的杂质，则需对原质量标准进行修订，并依法向有关药品监督管理部门申报批准。在新药的研发中，应该对新药中的杂质进行化学和安全性研究。杂质控制要合理地确定杂质检查项目与限度，合理地选择杂质检查方法。第31页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（一）有机杂质在药品质量标准中的项目名称1、以杂质的化学名称作为项目名称

当被检查的杂质是已知化合物时(特定杂质)，就以该化合物的化学名称作为质量标准的项目名称；

2、以某类杂质的总称作为项目名称

当杂质不能明确为单一物质而又为某一类物质时，则以这类物质总称作为项目名称。3、以检测方法作为项目名称

当被检查杂质的结构未知，亦不属于具体的类别时，可用“吸光度”等，与检查方法相应的名称作为项目名称。第32页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（二）杂质检查项目的确定

杂质检查项目的确定要有针对性。

药品标准中杂质检查项目应包括药物在质量研究和稳定性考察中检出的，并在批量生产中出现的杂质和降解产物。第33页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（三）杂质限度的确定P103杂质限量的确定要合理，在确保用药安全有效的前提下，应考虑到：①生产的可行性及比与比之间的正常波动；②药品本身的稳定性③可根据原料每日剂量来制订质控限度

第34页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三杂质限度制定时考虑的因素：①杂质及含一定量杂质的药品的毒理学研究结果②给药途径③每日剂量④治疗周期⑤给药人群⑥杂质药理学可能的研究结果⑦原料药的来源⑧在保证安全有效的前提下，药品生产企业对生产高质量药品所需成本和消费者对药品价格的承受力，等第35页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

对于创新药物，杂质限度确定的依据主要是已进行的临床前安全性研究中获得的结果，通常是要求用于临床试验的样品杂质不得超过用于临床前安全性研究的样品；

对于仿制药物，可根据已有的标准制订相应的杂质限度；

对于其他新药，可参照创新药物或仿制药物的要求进行。第36页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（四）杂质检查方法的选择与验证检测方法包括：化学法光谱法色谱法等因药物结构及杂质的不同采用不同的检测方法。有机杂质的检测方法多采用色谱法，特别是HPLC法、TLC法。对检测方法的要求：专属、灵敏。二、杂质的常用检查方法

P104

第37页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（一）化学方法

当药物中杂质与药物的化学性质相差较大时，可选择合适的试剂，使之与杂质发生化学反应，产生颜色、气体、沉淀，从而检查杂质的限量。采用化学方法检查法可以对杂质进行：1、半定量检查2、可采用滴定法或重量法进行定量测定第38页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三具体方法：P1041、显色反应检查法2、沉淀反应检查法3、生成气体检查法4、滴定法第39页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（二）色谱法

药物中的有机杂质，可能是已知的或未知的、挥发性或不挥发性的，其结构和性质往往和药物相近。如果药物和杂质与某些试剂的反应相同或相似，或者它们的光谱特征相似，就难以用化学法或光谱法对杂质进行检查。色谱法可以利用药物与杂质的色谱性质的差异，能有效地将杂质与药物进行分离和检测，因而色谱法广泛应用于药物杂质的检查。一般是首选方法。第40页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三1、TLC法优点：设备简单、操作简便、分离速度快灵敏度和分辨率较高应用：药物中杂质的检查方法：（1）杂质对照品法（2）供试品溶液自身稀释对照法（3）杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法（4）对照药物法注意：质量标准中应规定杂质的个数和限量第41页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（1）杂质对照品法适用范围：已知杂质并能制备杂质对照品方法：①根据杂质限量要求，取供试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液，分别点样于同一薄层板，展开、斑点定位。②供试品溶液除主斑点（有效成分）外的其他斑点（杂质斑点）与相应的杂质对照品溶液的相应主斑点进行比较。判断：根据《中国药典》要求，判断杂质限量例：P106第42页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（2）供试品溶液自身稀释对照法适用范围：①杂质的结构不明确；

②虽然杂质的结构明确，但没有杂质对照品。要求：该方法仅限于杂质斑点颜色与主成分

斑点颜色相同或相近的情况下使用。方法：①配制一定浓度的供试品溶液，取一定量，将其按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液；②将供试品溶液和对照溶液分别点于同一薄层板上，展开、斑点定位。判断：供试品溶液所显杂质斑点与自身稀释对照溶液的相应主斑点比较，不得更深。（该斑点是何物？）例：P106

第43页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（3）杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法

当药物中存在多个杂质时，如果有已知杂质的对照品，则采用杂质对照品法检查；共存的未知杂质或没有对照品的杂质，则同时采用供试品溶液自身稀释对照法检查P107

第44页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（4）对照药物法

无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，可采用与供试品相同的药物作为对照。对照药物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。（间接法）

第45页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三2、HPLC法优点：分离效能高、专属性强、检测灵敏性好，可以准确测定各组分的峰面积（定量）方法：（1）外标法（2）加校正因子的主成分自身对照测定法（3）不加校正因子的主成分自身对照法（4）面积归一化法例：P108第46页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三3、GC法适用：测定药物中挥发性特殊杂质，特别是药物中残留溶剂的检查第47页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（三）光谱方法依据：药物与药物中杂质对光选择吸收性质差异进行。1、UV-VIS法2、IR法3、AAS法第48页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（四）其他方法1、热分析法P113（1）热重分析（2）差热分析（3）差示扫描热分析2、酸碱度检查法P1163、物理性状检查法P117第49页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三第三节一般杂质的检查方法

在原料药及其制剂的生产过程中，常用到酸、碱、反应试剂、催化剂等，引入无机杂质。这些杂质的产生重要与生产工艺过程有关，可反映生产工艺情况，并直接影响药品的稳定性。

检查无机杂质对评价药品生产工艺的状况有重要意义。第50页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三一般杂质检查规则规定：（1）遵循平行操作原则1)仪器的配对性如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm；砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致。

2）对照品与供试品要同步操作第51页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（2）依照《中国药典》，正确取样、供试品的称量范围（3）依照《中国药典》，正确比色、比浊（4）检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查两份第52页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三一、氯化物的检查

1．原理：是利用氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色浑浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银混浊液比较，以判断供试品中氯化物是否超过限量。

Cl-+Ag+→AgCl↓（白）第53页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

2．条件：

[Cl-]0.05mg～0.08mg/50ml,即相当于标准氯化钠溶液5ml～8ml。

酸度稀硝酸10ml/50ml。

温度30～40℃

第54页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

3．干扰的排除

（1）供试品液混浊：可用含硝酸的蒸馏水洗净氯纸中氯化物后过滤来消除混浊对氯化物检查的干扰。

第55页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

（2）供试品有色：可采用内消色法，按中国药典附录规定的方法处理。供试品+AgNO3放置10min澄清溶液+标准NaCl+水对照溶液供试品+AgNO3+水供试品溶液暗处放置5min后比较第56页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三二、硫酸盐检查法

1．原理是利用SO42-在盐酸酸性溶液中与氯化钡试液作用，生成硫酸钡的白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的硫酸钡浑浊液比较，以判断供试品中硫酸盐是否超过限量。

第57页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

2．条件：[SO42-]0.1mg～0.5mg/50ml,即相当于标准硫酸钾溶液1～5ml。

酸度稀盐酸2ml/50ml。3．干扰的排除供试品有色：可采用内消色法。第58页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

三、铁盐检查法（一）硫氰酸盐法1．原理Fe3++6SCN-{Fe(SCN)6-]3-

红色2．条件：[Fe3+]0.01mg～0.05mg/50ml,即相当于标准铁溶液1～5ml。酸度稀盐酸4ml/50ml。

HCl第59页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

3．干扰的排除（1）当有Fe2+存在时，加氧化剂过硫酸铵氧化Fe2+成Fe3+。（2）当供试液管与对照溶液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁的颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色。因硫氰酸铁离子在正丁醇等溶剂中溶解度大，故能增加颜色深度，且能排除某些干扰物质的影响。第60页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

(二）巯基醋酸法1.原理巯基醋酸还原Fe3+为Fe2+，在氨碱性试液中与Fe2

+

作用生成红色配位离子。2Fe3++2HSCH2COOH2Fe2++SCH2COOH+2H+

SCH2COOHFe2++2HSCH2COOHFe(SCH2COOH)2+H+Fe(SCH2COOH)2[Fe(SCH2COOH)2]2-+2H2O

2OH-第61页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

2.说明

在加巯基醋酸溶液前，先加枸橼酸溶液，使其与铁离形成配位离子，以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉淀。（此法灵敏度比较高，但试剂较贵）第62页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三四、重金属检查法

重金属影响药物稳定性和安全性

重金属是指在实验室条件下与硫代乙酰胺或S2-作用显色的金属杂质.

如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等，由于药品生产过程中遇到铅的机会比较多，铅在体内容易积蓄中毒，故检查时以铅作为代表,以铅的限量表示重金属限度.（实验条件主要指溶液的PH，因为溶液的PH直接影响重金属与显色剂反应是否完全，从而影响测定的准确度）

第63页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三中国药典（2010年版）重金属的检查法规定了三种方法

第一法为硫代乙酰胺法；第二法是将供试品在500~600℃炽灼破坏后，再按第一法检查；第三法是检查能溶入碱溶液，而不溶于酸溶液的药物，在碱性条件下用硫化钠作显色剂；第64页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

第一法硫代乙酰胺法1、原理

CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S合格＜H2S+Pb2+PbS↓+2H+

2．条件：[Pb2+]10µg～20µg/27ml,相当于标准铅溶液1～2ml。

酸度pH3.0～3.5.合格＜

第65页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三3．干扰的排除

(1)供试品有色：可采用外消色法消除干扰。(2)供试品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氢析出硫，产生混浊影响比色，可加Vc或盐酸羟胺使Fe3+氧化成Fe2+离子再检查。

其他两种方法见P122

第66页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三五、砷盐检查法

《中国药典》采用古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC）检查药物中的微量的砷盐。（一）古蔡法Gutzeit)(BP也采用此法）

1.原理As3++3Zn+3H+3Zn2++AsH3

AsO33-+3Zn+9H+3Zn2++3H2O+AsH3

AsO43-+4Zn+11H+4Zn2++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3(棕色)2As(HgBr)3+AsH33AsH(HgBr)2(黄色)

As(HgBr)3+AsH33HBr+As2Hg3(棕黑色)第67页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

2.装置与试剂作用

(1)验砷仪砷化氢发生瓶;中空磨口塞;导气管(2)试剂的作用合格＜①KI-SnCl2的作用：交替还原作用；首先将AsO43-还原成AsO33-，生成的碘再被还原成碘离子。即:将五价砷还原成三价砷(五价砷与氢反应较慢)第68页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

AsO43-+2I-+2H+

AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+

—2I-+Sn4+

4I-+Zn2+

—[ZnI4]2-

由于碘离子的存在,与锌离子形成配合物,有利于

AsH3

气体生成.

第69页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

②Zn粒与氯化亚锡作用，在其面上形成Zn-Sn齐，起极化作用,从而使氢气均匀而连续地发生.

极化:当电流通过电解池或电池时,使电极电位改变并产生一反电动势的现象.

第70页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三1、Pb(AC)2棉太紧影响砷化氢气体通过；太松，硫化氢也通过起不到作用。2、硫化氢来源：锌及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中产生硫化氢气体③Pb(AC)2棉的作用：是消除供试品可能含有的少量的硫化物。S2-

+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgS（汞斑）H2S+Pb(AC)2PbS+2HAC第71页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

3.干扰的排除（1）供试品为S2-,SO32-,S2O32-等:因在酸中生成H2S,SO2,与HgBr作用生成HgS或Hg，干扰砷斑检查。用硝酸氧化成硫酸盐可消除。（2）供试品为Fe3+能消耗KI，SnCl2

应测定条件，先可加足量KI。第72页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

（3）含锑药物

锑盐被还原为SbH3与HgBr2试纸作用，产生灰色锑斑，干扰砷斑的检查，可改用Betterdorff法。白田道夫法原理：As3＋＋SnCl2＋HCl→As↓＋SnCl4＋H＋

棕褐色的胶态砷＋第73页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（二）Ag-DDC法(二乙基二硫代氨基甲酸银，USP采用此法)

1.原理：是利用砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中的银还原为红色胶态银，以Ag-DDC溶液为空白，于510nm的波长处，测定吸收度，供试品溶液的吸收度不得大于标准砷溶液的吸收度。2.试剂的作用：同古蔡法。第74页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三六、溶液颜色检查法

溶液颜色检查法是控制药物中有色杂质量的方法。中国药典（2010年版）收载有三种方法：K2Cr2O7黄、绿1.标准比色液进行比较的方法标准比色液CoCl2橙黄,橙红2.分光光度法CuSO4蓝色3.色差计法通过测定供试品与标准比色液或水之间的色差值第75页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三用分光光度法注意事项1、药品溶液有色时，杂质检查测定波长的选择2、溶剂的选择第76页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三七、易炭化物检查法

是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，用硫酸呈色的方法简单控制其含量.常采用与标准比色液比色的方法进行检查。标准比色液为CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4第77页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三注意事项：1、供试品为固体，应先研成细粉。如需加热才能溶解时，可将供试品与硫酸混合均匀，加热溶解后，放冷至室温，再转移置比色管中。2、操作时，应严格控制硫酸浓度、反应温度及时间。因易炭化合物与硫酸呈现的颜色与上述因素有关。第78页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

是检查药物中的微量不溶性杂质。常采用与浊度标准液比浊的方法进行检查。浊度标准液制备原理：(CH2)6N4+6H2O6HCHO+4NH3HCHO+H2N-NH2H2C=N-NH2+H2O

甲醛腙白色混浊

不同级号浊度标准液级号0.51234浊度标准原液（ml）2.55.010.030.050.0水（ml）97.595.090.070.050.0八、溶液澄清度检查法第79页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三1、标准浊度溶液的影响因素⑴温度：在低温（1℃）反应不能进行，不产生沉淀；高温形成的浊度稍低。因此，药典规定反应温度为25±1℃⑵放置时间：硫酸肼溶液配制后，应放置4---6小时，然后再与乌洛托品反应。溶液不放置，制得的标准浊度溶液浑浊不稳定。⑶湿度：各地的相对湿度不同，而试剂的含水量可直接影响溶液的浓度。因此，试剂应先经硅胶干燥剂干燥24h后使用为佳。⑷储存期：应置凉处避光储存。按规定储存期使用，浊度无明显变化。2、对于带乳浊色供试液的澄清度检查，不能用本法。应该用氯化钠与硝酸银产生的浑浊度比较。注意事项第80页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三浑浊程度分五级:澄清、轻微浑浊、微浊、浑浊、重度浑浊澄清系指供试品溶液的澄清度相同于所用的溶剂或未超过0.5号标准浊度溶液。判断标准第81页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三补充：1、《中国药典》还规定“注射液中不溶性微粒检查法”。它与“澄清度”检查的概念是不同的应予注意。2、微粒系指注射液可移动的不溶性外来物质。这些微粒进入血管能引起血管肉芽肿，静脉炎，血栓及血小板减少，对心肌、肝、肾等亦有损害。第82页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三九、炽灼残渣检查法(residueonignition)

BP称硫酸灰分（sulphatedash)是检查有机药物中混入的各种无机杂质。常采用重量方法进行检查。

残渣及坩埚重—坩埚重

残渣%=×100%

供试品重第83页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三注意事项1、动植物生药经灼烧后的灰烬称为灰分，它是生药药品的正常成分。2、不含金属元素组成的有机药品经灼烧后，所留的残渣称炽灼残渣加硫酸并灼烧至700--800℃后，所得的硫酸盐又称硫酸沿灰分。3、氢氟酸对瓷坩埚有腐蚀性，故含氟的药品应置于白金坩埚中灼烧。4、加热时，必须小心，先用小火加热，以免供试品溅出；切不可直接大火加热坩埚底部，否则易引起暴沸或燃烧。第84页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三5、自高温炉取出坩埚时，应先将坩埚预热（打开炉门），再与坩埚接触，避免热坩埚聚遇冷而破裂。6、有机药品的灼烧可以一定量的已恒重的纯沙或混以乙醇、甘油，以分散药品增大与氧接触的面，使灰化完全。7、坩埚置高温炉内灼烧前，务必蒸发除尽硫酸，以免硫酸蒸汽腐蚀炉膛，造成漏电事故。8、可采用蓝墨水与三氯化铁溶液混合液涂写烘烤，供瓷坩埚编号。注意事项第85页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三十、干燥失重检查法

主要检查药物中的水分及其他挥发性的物质。？常采用重量方法进行检查。常用的方法有三种：（一）常压恒温干燥法

（二）干燥剂干燥法（注意常用干燥剂P127）

（三）

减压干燥法第86页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（一）常压恒温干燥法

适用于受热较稳定的药物。干燥温度一般为105℃注意：⑴供试品应铺平，厚度∠5㎜，疏松物10㎜；

⑵结晶药物应该研细；⑶瓶盖半开或者放置旁边；⑷取时，先盖瓶盖。

第87页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（二）干燥剂干燥法（注意常用干燥剂P127）

1）硅胶：吸水率居中。变色硅胶加有氧化钴，无水氧化钴蓝色，吸水后含二分子结晶水呈淡红色。

105℃干燥后可恢复使用。优点：廉价、方便、无腐蚀性、可重复2）浓硫酸：吸水率低，有腐蚀性；3）五氧化二磷：吸水性好，不能重复使用第88页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三（三）

减压干燥法适用于熔点低，受热不稳定或水分难以除去的药物。除另行规定外，压力在2.67KPa以下。第89页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

热重分析法

热分析法（thermoanalysis)

差示热分析差示扫描量热法1.热重分析法（thermogravimetricanalysis,TGA)

在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系，研究物质在加热同时失重的情况下，所发生的质的变化，常用于药物稳定性的研究；贵重和易氧化药物的干燥失重测定。第90页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

2.差示热分析（differentialthermlanalysis,DTA)

是在程序升温下，测量被测物质和参比物之间的温差与温度关系的一种技术。参比物是一种惰性物质，在加热过程中不发生相变和化学变化。因此温差(△T)只与被测物质的量质变化有关。△T=0被测物未发生吸热或放热反应;△T=-为吸热峰;△T=+为放热峰.第91页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

测药的溶点

DTA在药物分析中应用尖峰为物理变化药物定性分析宽峰为化学变化估测药物的纯度第92页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

3.差示扫描量热法(differentialscanningcalorimetry,DSC)是在程序升温下，测量维持样品和参比物的温度相同，系统所需供给样品随温差变化的能量的一种技术。DSC与DTA的不同之处是记录方式不同，是记录系统供给的能量，吸热供给能量；放热减少供给的能量。在药物分析中应用与DTA相同。DSC-TG常联合用。

第93页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三十一、水分测定《中国药典》收载方法

卡尔.费休法、甲苯法测定物：药物中的结晶水、吸附水、游离水原理：碘将二氧化硫氧化成三氧化硫时，需要一定量的水参与反应，根据消耗碘的量测定水分（P127）费休试液组成：水：碘：二氧化硫：甲醇：吡啶提问：1、甲醇、吡啶的作用？

2、为什么上述两试剂需是无水的？第94页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三例：注射用青霉素钠水分测定精密称取本品0.7540g，置干燥具塞玻璃瓶中，加无水甲醇5ml，充分振摇后，用费休试液滴至溶液由浅黄色变成红棕色，消耗用费休试液2.15ml；另取无水甲醇5ml，同法测定，消耗用费休试液0.15ml，求青霉素钠的含水量（已知每1ml费休试液相当于3.52mg水）。解：供试品中含水量%=（A-B)F/W×100%%=（2.15-0.15）×3.15/0.7540×1000×100%=0.93%第95页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三注意：（1）费休法不适用于测定氧化剂、还原剂、以及能与试液生成水的化合物的测定，如：铬酸盐、过氧化物、硫代硫酸盐、硫化物、碱性氧化物以及含氧弱酸盐等的测定；一些羰基化合物如活泼的醛、酮可于试剂中的甲醇作用，生成缩醛和水，干扰测定。（2）费休试液的F值应在4.0mg/ml上下为宜，F值降至3.0mg/ml以下时，测定终点不敏锐，不宜再用。（3）整个操作应迅速，且不宜再阴雨或空气湿度太大时进行。第96页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三十二、有机溶剂残留量测定法[ChP(2010)]

主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂(如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、环氧乙烷、二氧六环等）。常采用气相色谱法方法进行检查。常用的方法有二种：①直接进样法和②顶空进样法（试用于挥发性大的样品测定）。色谱系统性试验的要求：(1)N＞1000;(2)用内标法测定时，要求R＞1.5;(3)外标法测定时，待测物的峰面积的RSD＜10%。第97页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三残留有机溶剂测定的方法和限量

2010版药典对残留溶剂的控制种类和限度进行了较大的修订,溶剂残留量的种类与限度与人用药品注册技术范围的国际协调会一致.按有机溶剂毒性的程度分为三类:一类有机溶媒毒性较大,具有致癌作用并对环境有害,应尽量避免使用;二类有机溶媒对人有一定毒性,尽量少用;三类有机溶媒对人的健康危险性较小,推荐使用.P129第98页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三补充：元素状态的硒对人体无毒性，但硒化合物（二氧化硒）对人体剧毒。因此，对于有可能引入硒的一些药物须对残留硒进行限量检查。第99页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三第四节特殊杂质的检查方法

一、特殊杂质的研究规范药物中特殊杂质的研究是药物质量控制的重要部分，该研究可以为药物的工艺研究、质量研究·、稳定性研究、药理毒理及临床研究提供重要信息，对特殊杂质研究直接体现创新药物的研究水平。通过对有关物质的定性研究，可以获得有关物质的结构信息，分析其形成过程，合成时可设法避免该杂质的形成，或经纯化使之降至可接受的水平，或储藏过程中控制好条件。第100页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三二、利用药物和杂质在物理性质上的差（一）臭味及挥发性质的差异利用药物中存在的杂质具有特殊臭味，可以从臭味判断

例：黄凡士林中异性有机物检查：本品2.0g,直火加热无辛味。（二）颜色差异

例：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品2.0g，加NaOH试液10ml，加水25ml，与黄色3号比色液比，不得更深。第101页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

（三）溶解行为的差异利用药物可溶于水或有机溶剂、酸、碱中，而杂质不溶；反之杂质可溶而药物不溶。例：吡哌酸中碱中不溶物吡哌酸甲酯（I）和（II）检查（四）旋光性质的差异例：硫酸阿托品中莨菪碱的检查：本品溶液(50mg/ml)α＜-0.4

第102页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

（五）对光吸收性质的差异1.紫外分光光度法：例:地蒽酚中二羟基蒽醌的检查

再如：苯丙醇中苯丙酮的检查：可利用供试液的吸收度比来控制杂质;纯品苯丙醇A247nm/A258nm=0.59;99.5%时A247nm/A258nm=0.79;

因此规定供试品A247nm/A258nm＜0.79;即所含苯丙酮＜0.5%.第103页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

2.原子吸收分光光度法：是通过测定药物中所含待测元素原子,吸收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的含量。限量检查时：对照品液=供试品+限量-----a

供试品液=------------------b

符合规定时b＜(a-b);b＞(a-b)不合格。第104页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

3。红外分光光度法：

主要用于药物中无效或低效晶型检查，如甲苯咪唑中A晶型检查第105页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

A晶型C晶型在640cm-1有强吸收吸收很弱在662cm-1吸收很弱有强吸收662cm-1640cm-1662cm-1640cm-1供试品+10%A晶型D2D1

供试品D2D1＜10%

R=D1/D2＞R’=D’1/D’2第106页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

4.荧光分析法

3,4-二去氢利血平利血平中氧化产物检查：利血平(无荧光)(I)(黄绿色荧光)3,4,5,6-四去氢利血平(II)(蓝色荧光)第107页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三(六)吸附或分配性的差异

1.薄层色谱法(TLC)有关物质

(1)杂质对照品法例如:盐酸左旋咪唑中检查硅胶G2,3-二氢-6-苯基咪唑[2,1-b]噻唑盐苯:甲醇:冰HAC样品

对照品。·····第108页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三注意：①此法必须首先确认供试品中存在的待检杂质是什么？并具备该杂质对照品。如具备上述条件，用该法检查十分可靠。因为对照品与杂质系同一物质，且检查条件完全一致。②如不能确认供试品中存在的待检杂质是什么？选用可能存在的某种物质作为杂质对照品第109页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

当药物存在的杂质未完全确认或待检杂质不止一种时，可根据药物合成路线，化学性质等推断可能存在的杂质，并且能获得该物质的对照品，即可采用此法。应用此法需注意杂质斑点与对照品应具有可比性。第110页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三(2)供试品溶液自身稀释法检查物为:结构不确定;或无杂质对照品的情况注意:该法限于杂质斑点的颜色与主成分斑点的颜色相同或相近的情况下使用.第111页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

(3)高低浓度对比品法(对照药物法)

例如:盐酸异丙嗪中有关物质的检查硅胶G有多个杂质而且结构不清样品10mg/ml;对照品(1)0.15mg/ml己烷:丙酮:乙胺(2)0.05mg/ml

样品液对(1)(2)

供试液杂质斑点不多于3个;杂质斑点与对照(1)的主斑点比较,不得更深;如有一点超过,应不深于对照液(2)的主斑点.......

....

...第112页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

2.纸层析法(PC)

常用于极性大的药物的分离、分析，如地高辛中的有关杂质的检查。第113页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

3.高效液相色谱法(HPLC)（1）峰面积归一化法：L%=∑Ai/(∑Ai+A主）×100%例如：利巴韦林中有关杂质的检查：对照品液(5μg/ml)进样10μl,调灵敏度，使主峰达满量程的20%～25%样品液(0.4mg/ml)进样10μl,杂质∑Ai＜(∑Ai+A主）的1.0%第114页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

（2）不加校正因子主成分对照法对照品液为供试品的稀释液进样测得A主

供试品液进样测得∑Ai

其∑Ai＜A主即为合格.例如:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑:对照品液(0.01mg/ml)进样20μl,调灵敏度，使主峰达10%～30%样品液(0.14mg/ml)进样20μl,杂质∑Ai＜A主的1.0%.第115页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

（3）内标法加校正因子测定供试品中杂质的含量

对照品+内标进样求校正因子（f)=(As/Cs)/(AR/CR)

供试品+内标进样求AX.AS,则杂质浓度CX=f×AX/(AS/CS)第116页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三

4.气相色谱法(GC)

主要用于药物中挥发性的杂质检查，其检查方法与HPLC法相同。第117页，讲稿共130页，2023年5月2日，星期三三、利用药物和杂质在化学性上的差异（一）酸碱性的差异

1.规定消耗滴定液体积例如己酸羟孕酮中正己酐、对甲苯磺酸检查：(NaOH0.02mol/L)取本品0.20g+中性乙醇+溴麝香草酚蓝微蓝色＜0.50ml2.pH法例如乙琥胺中2-甲基-2-乙基丁二酸检查：0.01