临床病原体检查课件

临床病原体检查临床病原体检查目的明确感染是否发生以及病原体的类型。提供体外抗微生物药物敏感实验的结果。密切监视烈性传染病与新的传染病的发生，及时向行政主管部门报告。配合相关机构进行流行病学调查。临床病原体检查的基本程序医生、护士、病人、检验师：正确采集运送标本。检验科：直接镜检、免疫学和分子生物检测、病原体分离培养鉴定、药敏实验——报告结果。医生：明确诊断、合理用药。一、标本采集和运送标本采集的基本原则无菌、及时、按照要求、标注清晰根据病史与临床表现确定标本采集的类型与部位，尽量采集病变明显部位标本。在发病的早期或急性期采集标本，最好在抗生素使用前（如使用过抗生素应在申请单上注明）。采集标本防止污染，并置于无菌容器，加盖密封、立即送检。标本必须贴上标签，与检验申请单同时送检。拒收标本1.样本上无病患标签或病患标签与检验申请单不符合。2.样本以不适当的温度、运送培养基及容器运送。3.样本的量不足、已被防腐剂固定和运送时间过长。4.样本外漏、容器破损及明显受污染的样本。5.样本的检验项目申请不适合进行。6.当日重复送样本（除血液培养外）。7.已接触空气的厌养菌检测标本。8.被正常厌养菌污染的标本,要求检测。血液标本的采集适应症：疑似菌血症、败血症或脓毒血症的病人。一般在抗生素使用前，于发热初期或高峰期采血。24小时内采血2~3次可提高阳性率。血液与培养基的比例为1：10，一般成人血量10~20ml，婴儿1~5ml。呼吸道标本采集类型：鼻咽拭子、痰和经气管采集的标本。

上呼吸道存在正常菌群，在采集标本与结果分析时应予考虑。痰标本的采集采集时间：晨痰，且在取痰前用清水反复漱口。方法：（1）自然咳痰法（2）气管镜下采集法（3）气管穿刺法尿标本的采集无菌采集中段尿如考虑厌氧菌感染，采取膀胱穿刺法采集标本。

排尿困难者考虑导尿采集标本。粪便标本采集自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清洁容器中送检。排便困难者，采用直肠拭子采集。怀疑霍乱弧菌感染引起的腹泻，立即接种或将标本置于碱性蛋白胨或卡-布运送培养液送检。传染性腹泻应连续送检3次。生殖道标本男性：无菌采集尿道口分泌物或前列腺液。女性：用无菌棉纤采集阴道或宫颈分泌物。怀疑厌氧菌感染，应采用阴道后穹隆穿刺法，并立即接种于厌氧平板。疑似梅毒螺旋体感染，直接从外生殖器硬下疳蘸取渗出液，置于盖玻片上，立即送检。脑脊液由临床医生采用腰椎穿刺，抽取2-3ml，置于无菌容器中立即送检，不能暂时保存于冰箱中。胸腹水等穿刺液标本标本采集应在用药前或停止用药后1~2天进行。用无菌注射器抽取可疑标本，分别置于抗凝与不抗凝无菌容器中立即送检。怀疑厌氧菌感染，采用床边接种为宜。脓液及创伤感染分泌物标本开放性脓肿及脓性分泌物：用无菌棉纤采取脓液或病灶深部分泌物，置于无菌试管中送检。封闭性脓肿：局部消毒后，用注射器抽取，怀疑厌氧菌感染，应隔绝空气采集。大面积烧伤的创面分泌物：用无菌棉纤多点采取脓液或分泌物，置于无菌试管中送检。检查方法直接显微镜检查病原体抗原与抗体的检测病原体核酸的检测病原体的分离培养与鉴定显微镜直接涂片检测不染色标本：染色标本：革兰氏染色抗酸染色墨汁染色病原体分离培养与鉴定目的：明确感染病原体。为临床提供体外抗微生物药物敏感试验结果。结果评价：正常人群的无菌体液中检测到细菌，应考虑细菌为感染的病原体。存在正常菌群的标本检测到细菌，应结合细菌的量考虑是否为致病菌。如临床表现支持感染，但培养阴性，应考虑为标本不合格、培养不恰当等因素。直接镜检找到病原体，而培养阴性，应考虑有L细菌、厌氧菌或苛氧菌感染三、临床常见病原体检查临床常见病原体为：细菌、病毒、支原体、衣原体、立克次体

以及寄生虫等不同部位感染的细菌学血液中枢神经系统呼吸系统泌尿生殖道胃肠道脓肿、创伤分泌物及穿刺液眼、耳部血液标本常见病原菌种类病原菌G+球菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、草绿色链球菌、肠球菌G+杆菌结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、阴道加特纳菌G-球菌脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，卡他布兰汉菌G-杆菌大肠埃希菌、铜绿假单胞苗、克雷伯杆菌、肠杆菌、变形杆菌、沙雷菌、沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜血杆菌真菌念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌厌氧菌拟杆菌、产气荚膜梭菌中枢神经系统常见病原菌脑膜炎奈瑟菌多见，其次为流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌、B群溶血性链球菌、脑膜败血黄杆菌呼吸系统肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、肺炎衣原体泌尿生殖道淋病奈瑟菌、大肠埃希菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、沙门菌、铜绿假单胞菌和沙雷菌、肠球菌胃肠道幽门螺杆菌、霍乱弧菌、沙门菌属的细菌、志贺菌属的细菌脓肿、创伤分泌物及穿刺液化脓性感染中最常见的病原菌是金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌，创伤感染病中多由厌氧菌引起。眼、耳部球菌、杆菌均可四、医院感染概念：医院感染（nosocomialinfection）又称医院获得性感染（hospitalacquiredinfection），指患者在入院时不存在，也不处于潜伏期，而在医院内发生的感染，包括医院内获得的而在出院后发病的感染。广义的医院感染对象不仅指住院患者，还包括门诊病人、医院职工、探视人员与陪护人员等。医院感染的高危人群慢性疾病:如肿瘤、糖尿病以及肝硬化等免疫抑制剂及激素的使用着化疗及放疗患者手术及麻醉患者使用介入性诊断与治疗的患者广谱抗生素使用者医院感染的感染源病人、医院职工、探视人员、陪护人员。医院环境、未彻底消毒的医疗器械、血液制品等。医院感染常见的病原体细菌为主要病原体。细菌的种类因时、地和人而异。不同临床类型其感染细菌的构成比不同。医院感染常见临床类型下呼吸道感染：最常见尿路感染：具备一项即可诊断：手术切口感染：大部分为外源性感染培养可（-）胃肠道感染：使用抗生素血液感染：静脉输液、血液透析皮肤和软组织感染：金葡、溶血性链球菌——蜂窝组织炎静脉插管：化脓①无症状菌尿②入院时有尿路感染，入院后又培养出新的细菌③有发热及尿道综合征，培养（-），但离心尿液白细胞>10/HP细菌污染的监测各类环境中空气、物体表面、医务人员手细菌总数卫生学标准环境类别空气（cfu/m3

）物体表面（cfu/cm3

）手（cfu/cm3

）Ⅰ类≤10≤5≤5Ⅱ类≤200≤5≤5Ⅲ类≤500≤10≤10Ⅳ类—≤15≤15细菌耐药性检查体外抗菌药物敏感试验的方法纸片扩散法（Kirby-Bauertest）稀释法（dilutiontest）E试验法（Etest）

药敏试验结果的解释敏感（susceptible）：表示测试菌能被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭。耐药（resistant）：表示测试菌不能被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭，治疗无效。中介

(intermediate):该范围作为敏感与耐药之间的缓冲区，避免由于微小技术误差影响实验结果。最低抑菌浓度（MIC）：能够抑制检测菌肉眼可见生长的最低药物浓度称为测定药物对检测菌的最低抑菌浓度。耐药菌监测的特殊试验β-内酰胺酶：能裂解青霉素类和头孢菌素类的β-内酰胺环，从而使其失去活性临床意义：（1）流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌以及卡拉莫拉汉菌等阳性，表示对青霉素、氨苄西林以及阿莫西林耐药。（2）葡萄球菌属以及肠球菌属等，阳性表示对青霉素、氨基组青霉素（氨苄西林）、羧基组青霉素（替卡西林）以及脲基组青霉素（美洛西林）耐药。产超广谱β-内酰胺酶(extendspectumβ-lactamase,ESBL)检测：由质粒介导的β-内酰胺酶，可水解青霉素类、头孢菌素和氨曲南，主要在大肠埃希菌和克雷伯菌属等肠杆菌科细菌中产生。临床意义：产ESBL细菌,不论体外药物敏感试验结果如何,对青霉素类、头孢菌素类和氨曲南治疗均无效。耐甲氧西林的葡萄球菌（methecillinresistancestaphylococcus，MRS）1μg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10mm，或MIC≥4μg/ml的金黄色葡萄球菌,1μg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17mm，或MIC≥0.5μg/ml的凝固酶阴性葡萄球菌称耐甲氧西林葡萄球菌。临床意义对所有β-内酰胺类药物均无效,并对氨基糖甙类、大环内脂类、克林霉素和四环素等抗生素多重耐药。治疗首选药物为万古霉素。耐青霉素的肺炎链球菌（penicillinresistantstrepttococcuspaeumoni，PRSP）

定义：1μg苯唑西林纸片的抑菌圈直径<19mm且MIC>2μg/ml应视为耐青霉素肺炎链球菌PRSP对氨苄西林、

氨苄西林/舒巴坦、

头孢克肟、

头孢唑啉的临床治疗疗效很差，治疗时参考药敏结果选择药物，经验治疗重症感染时，可用头孢曲松或头孢噻肟联合万古霉素用药。耐万古霉素的肠球菌（vancomycinresistant